【文章內(nèi)容簡介】 核化并體積變小，僅將嗜堿性粒細(xì)胞保持原有狀態(tài)，體積明顯大于其他類的白細(xì)胞。在散點(diǎn)圖上處于上面區(qū)域的為嗜堿性粒細(xì)胞；散點(diǎn)圖的橫坐標(biāo)可表示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，處于左側(cè)的為單個核的細(xì)胞群，包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞；處于右側(cè)的為分葉核細(xì)胞；中間部位則考慮為桿狀核細(xì)胞；左下端為單個核的原始細(xì)胞區(qū)。圖7：ADVIA 120/2120儀器Perox通道和Baso通道散點(diǎn)圖該儀器在紅細(xì)胞、血小板的測定上也采用了光學(xué)檢測技術(shù)。通過激光照射掃描每個通過Flowcell的紅細(xì)胞，低角度散射光（2 176。~3 176。）用于測量細(xì)胞體積；高角度(5176?！?5176。)散射光測量每個紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白濃度（CH）和血紅蛋白含量平均值CHCM。這兩個值不受紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白測定的影響。還可根據(jù)每個紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白濃度，計算出紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白分布寬度（HDW）值。其根據(jù)紅細(xì)胞在體積大小和單個紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量的分析，將紅細(xì)胞劃分為9個區(qū)域，得到紅細(xì)胞體積和色素含量分布的九分圖，也是該儀器在紅細(xì)胞分析方面獨(dú)有的特色，根據(jù)紅細(xì)胞分布情況可初步判斷疾病類別（下圖中）。在血小板計數(shù)分析上也同樣采用了二維光散射分析法，即可獲得血小板體積大小，可測量1~60fl內(nèi)的各種大小不同的血小板，還可對血小板內(nèi)容物含量（MPC）進(jìn)行測定。血紅蛋白測定采用連續(xù)流動比色法和紅細(xì)胞散射光直接測定法兩種方法，有助于高脂血和高膽紅素血標(biāo)本的血紅蛋白測定準(zhǔn)確性。圖8：ADVIA 120/2120 紅細(xì)胞散點(diǎn)圖（左）和血小板散點(diǎn)圖（右）4 雙鞘流技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色法ABX是法國生成血細(xì)胞分析儀器的著名廠家，其生產(chǎn)的全自動血細(xì)胞分析儀Pentra 120型為其高端產(chǎn)品。在白細(xì)胞分類上采用該公司特有的專利技術(shù)雙鞘流（DHSS）分析法。雙鞘流是專利技術(shù)，而測定本身是通過電阻抗和光吸收法雙重原理。標(biāo)本首先在第一鞘流液中經(jīng)過電阻抗測定分析，得到細(xì)胞體積測定結(jié)果，然后通過第二鞘流引導(dǎo)再行光吸收率分析，對細(xì)胞內(nèi)容物進(jìn)行測定，最終將細(xì)胞測定信息在散射圖相應(yīng)的位置表現(xiàn)出來。雙鞘流技術(shù)的核心部件是含有紅寶石小孔的復(fù)雜的鞘流池，在雙鞘流系統(tǒng)的上下兩端分別加上恒定電流，是保證電阻法的測量要素。為了保證被檢測的細(xì)胞能夠正確通過計數(shù)孔和鞘流通道，需要利用外來鞘流來進(jìn)行矯正，因此通過左側(cè)鞘流泵注入稀釋液形成第一鞘流液，其作用是保護(hù)溶液能夠直接通過計數(shù)小孔，并且保證其中攜帶的細(xì)胞處于中心部位，液流不發(fā)生偏移和扭曲；溶液通過計數(shù)小孔后，再通過中間鞘流泵注入稀釋液形成第二股鞘流，用以保證吸光度測量。這樣的過程被稱為雙鞘流分析技術(shù)。圖9 雙鞘流技術(shù)示意圖儀器通過兩個通道來完成白細(xì)胞的五項分類。其采用的細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)（Cytochemistry）的原理是經(jīng)典的細(xì)胞分類技術(shù)，此染色劑中含有溶血素及氯唑黑活體染料（Chlorazol Black E）。在儀器的LMNE檢測池中，全血樣品與染色劑充分混勻，在35℃條件下進(jìn)行孵育，此過程的作用是：① 溶解紅細(xì)胞 ②對單核細(xì)胞的初級顆粒、嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的特異顆粒進(jìn)行不同程度的染色，同時對細(xì)胞的膜（細(xì)胞膜、核膜、顆粒膜）也進(jìn)行不同程度的著色 ③ 固定細(xì)胞的形態(tài)，使其保持自然狀態(tài)。由于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞對染色劑的著色程度不同、每種細(xì)胞特定的細(xì)胞核形態(tài)和顆粒的結(jié)構(gòu)造成光散射的強(qiáng)度不同，產(chǎn)生了特定的吸光率。染色后的標(biāo)本被引導(dǎo)進(jìn)入鞘流池進(jìn)行雙鞘流分析，首先經(jīng)過60mm紅寶石小孔進(jìn)行電阻法分析，用于判斷細(xì)胞體積大小，在LMNE散點(diǎn)圖上的橫坐標(biāo)即可表示出細(xì)胞大小的特性。然后樣本迅速進(jìn)入直徑為42mm的第二鞘流檢測通道進(jìn)行光吸收率測定，以判斷細(xì)胞形態(tài)和內(nèi)容物等情況。根據(jù)每類細(xì)胞在這兩個分析參數(shù)上所表現(xiàn)出來的特性，形成二維分布的散點(diǎn)圖。在此通道內(nèi)可完成白細(xì)胞中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸細(xì)胞群的分類。此通道內(nèi)在分析的同時還能夠檢測兩群異常白細(xì)胞亞群：巨大未成熟細(xì)胞（LIC）百分比及絕對值，異型淋巴細(xì)胞（ALY）百分比及絕對值，同時還可提供多達(dá)82種提示和報警信息。在LMNE散點(diǎn)圖上，各類白細(xì)胞的特點(diǎn)是：①淋巴細(xì)胞：典型的淋巴細(xì)胞體積較小、形態(tài)規(guī)則、胞漿內(nèi)沒有顆粒，其吸光率最低，所以定位在散點(diǎn)圖的右下部矩陣中，正常淋巴細(xì)胞散點(diǎn)圖為正態(tài)體積分布。②單核細(xì)胞：典型的單核細(xì)胞體積較大、腎狀核、胞漿內(nèi)有初級顆粒（幾乎不著色），細(xì)胞核大且不分葉，光散射較少，所以位于吸光率軸的最下端，依據(jù)單核細(xì)胞的體積，位于體積軸的最右端，而異常單核細(xì)胞及特大單核細(xì)胞則可能出現(xiàn)在LIC的矩陣中。③中性粒細(xì)胞：典型的中性粒細(xì)胞具有嗜中性顆粒及分葉核的結(jié)構(gòu)，中性顆粒部分著色，同時由于顆粒及核的分葉等形態(tài)上的復(fù)雜性，而產(chǎn)生光散射。所以中性粒細(xì)胞群散點(diǎn)圖位于中部。核分葉越多的中性粒細(xì)胞，吸光性越強(qiáng)，在散點(diǎn)圖上的位置向右移。同時桿狀細(xì)胞（Bands）體積與中性粒細(xì)胞接近，但核的復(fù)雜程度低，吸光率低，散點(diǎn)圖位于中性粒細(xì)胞與單核細(xì)胞之間。④嗜酸性粒細(xì)胞：由于嗜酸性粒細(xì)胞含有特異性顆粒，與染色液特異性著色，其著色強(qiáng)度最深，位于Y軸的最上端，此方法提高了嗜酸性粒細(xì)胞的分類的準(zhǔn)確性。⑤巨大未成熟細(xì)胞（Large Immature Cell）：未成熟粒細(xì)胞因其體積較大，可含有顆粒，光散射強(qiáng)，位于嗜中性粒細(xì)胞散點(diǎn)圖的右側(cè)，在LIC矩陣圖中從左到右依次排列晚幼粒、中幼粒、早幼粒細(xì)胞，另外各種原始細(xì)胞位于單核細(xì)胞的右側(cè)區(qū)域中。由于此散點(diǎn)圖中可能有大單核細(xì)胞，可引起LIC假性計數(shù)增加（LIC的計數(shù)結(jié)果被計算到在嗜中性粒細(xì)胞中）。LIC包括：大單核細(xì)胞、高嗜堿性的單核細(xì)胞、巨大中性粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞、原始細(xì)胞。⑥異型淋巴細(xì)胞(Atypical Lymphs)：在散點(diǎn)圖中位于淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞之間的一群細(xì)胞，包括：小原始粒細(xì)胞、大淋巴細(xì)胞等。在WBC/BASO檢測池中，全血樣品與BasolyseII（）溶血素混合，在35176。C恒溫下，溶解紅細(xì)胞，由于嗜堿性粒細(xì)胞具有抗酸性，能夠保持形態(tài)完整，而其他白細(xì)胞胞漿溢出，成為裸核狀態(tài)。細(xì)胞通過一個直徑為80mm的鞘流微孔時，根據(jù)電阻抗原理進(jìn)行測定，以細(xì)胞體積大小為橫坐標(biāo)繪制WBC/BASO直方圖。依據(jù)閾值設(shè)定區(qū)分裸核化的白細(xì)胞與嗜堿性粒細(xì)胞。在直方圖上可以看出在中心界標(biāo)左側(cè)的是細(xì)胞體積變小的其它細(xì)胞群，界標(biāo)右側(cè)是體積較大的嗜堿性粒細(xì)胞。因嗜堿性粒細(xì)胞