【文章內(nèi)容簡介】 品各適量，精密稱定，作為雜質(zhì)對照品溶液。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按外標(biāo)法計算各已知雜質(zhì)的百分含量。 富馬酸沃諾拉贊各已知雜質(zhì)的測定結(jié)果名稱雜質(zhì)Ⅰ雜質(zhì)Ⅱ雜質(zhì)Ⅲ雜質(zhì)Ⅳ雜質(zhì)Ⅴ雜質(zhì)Ⅵ測得含量%未檢出未檢出未檢出未檢出回收率溶液：1）取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ，雜質(zhì)Ⅲ，雜質(zhì)Ⅳ，雜質(zhì)Ⅴ，雜質(zhì)Ⅵ，精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（80%濃度）溶液。同法配制3份。2）取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ，雜質(zhì)Ⅲ，雜質(zhì)Ⅳ，雜質(zhì)Ⅴ，雜質(zhì)Ⅵ，精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（100%濃度）溶液。同法配制3份。3）取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ，雜質(zhì)Ⅲ，雜質(zhì)Ⅳ，雜質(zhì)Ⅴ，雜質(zhì)Ⅵ，精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（120%濃度）溶液。同法配制3份。分別精密量取上述溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，、11。（～75，制劑的質(zhì)量控制一第129~139頁）按外標(biāo)法以峰面積計算供試品溶液中各雜質(zhì)的量。再按下式計算回收率：回收率（%）=式中：M測得量為回收率溶液中已知雜質(zhì)的測得量； M供試品中的量為回收率溶液中供試品的已知雜質(zhì)的量； M加入量為回收率溶液中已知雜質(zhì)的加入量； 富馬酸沃諾拉贊雜質(zhì)測定回收率試驗結(jié)果編號M加入量/μgM測得量/μgM供試品/mg雜質(zhì)Ⅰ%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%123456789編號M加入量/μgM測得量/μgM供試品/mg雜質(zhì)Ⅱ%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%123456789編號M加入量/μgM測得量/μgM供試品/mg雜質(zhì)Ⅲ%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%1未檢出02030405060708090編號M加入量/μgM測得量/μgM供試品/mg雜質(zhì)Ⅳ%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%1未檢出02030405060708090編號M加入量/μgM測得量/μgM供試品/mg雜質(zhì)Ⅴ%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%1未檢出02030405060708090編號M加入量/μgM測得量/μgM供試品/mg雜質(zhì)Ⅵ%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%1未檢出02030405060708090結(jié)論：此方法測定雜質(zhì)準(zhǔn)確性良好。 耐用性試驗 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時的耐用性情況，通過改變流動相比例、流動相pH值、流動相鹽濃度、流速等色譜因素進行試驗，計算含雜質(zhì)的量。分別取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對照品各適量，精密稱定，作為雜質(zhì)對照品溶液。取重復(fù)性項下供試品。，精密稱定，置20ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1ml，置200ml量瓶中，加流動相A稀釋制成至刻度，搖勻，作為對照溶液。精密量取上述溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算各雜質(zhì)含量，~13。（~102，制劑的質(zhì)量控制一第140~166頁） 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗結(jié)果1耐用性研究項目方法及條件耐用范圍沃諾拉贊雜質(zhì)Ⅰ雜質(zhì)Ⅱ雜質(zhì)Ⅲ雜質(zhì)Ⅳ雜質(zhì)Ⅴ雜質(zhì)Ⅵ分離度分離度分離度分離度分離度分離度分離度色譜原條件 流速流動相比例54465050pH值鹽濃度 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗結(jié)果2耐用性研究項目方法及條件耐用范圍雜質(zhì)Ⅲ%雜質(zhì)Ⅰ%雜質(zhì)Ⅱ%雜質(zhì)Ⅳ%雜質(zhì)Ⅴ%雜質(zhì)Ⅵ%單雜%總雜%色譜原條件流速流動相比例54465050pH值鹽濃度平均值（%）RSD（%）結(jié)論：此方法測定本品有關(guān)物質(zhì)耐用性良好。 吡啶3磺酸方法學(xué)驗證試驗項目驗證結(jié)果條件選擇C18柱，（）為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為261nm。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。專屬性酸、堿、高溫、氧化、光照降解雜質(zhì)均與主峰分離良好，各已知雜質(zhì)與相鄰峰分離良好，主峰及各已知雜質(zhì)峰純度均合格；輔料及其降解產(chǎn)物和梯度峰不干擾本品有關(guān)物質(zhì)的測定。檢測限。定量限。線性～，相關(guān)系數(shù)R2=1準(zhǔn)確度%～%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=%精密度重復(fù)性試驗：測得吡啶3磺酸含量RSD=%。中間精密度試驗：測得吡啶3磺酸含量RSD=%。溶液穩(wěn)定性供試品溶液室溫放置8小時內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。耐用性采用不同色譜柱，不同的流動相比例、pH、鹽濃度等檢查吡啶3磺酸，吡啶3磺酸測的含量的RSD均小于10%。 吡啶3磺酸檢查方法學(xué)驗證內(nèi)容儀器設(shè)備島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A二極管陣列檢測器島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A紫外檢測器色譜條件選擇及溶液配制 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為261nm；。梯度表如下：時間（分鐘） 流動相A（%） 流動相B（%）01000710001090910901000201000 溶液配制 供試品溶液：取本品細粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使沃諾拉贊充分溶解，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。雜質(zhì)對照溶液：取雜質(zhì)Ⅶ工作對照品適量，精密稱定，作為對照品溶液。破壞性試驗 Ⅶ工作對照品破壞試驗溶液的配制與處理：溶液稀釋步驟處理方法溶劑未破壞→20ml100ml無降解處理高溫破壞→20ml100ml水浴100℃加熱6小時高溫空白溶劑適量水浴100℃加熱6小時光照破壞→20ml100ml光照箱4500LX照射40小時光照空白溶劑適量光照箱4500LX照射40小時酸破壞→20ml100ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置28小時酸空白溶劑適量1mol/L鹽酸2ml，室溫放置28小時堿破壞→20ml100ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置26小時堿空白溶劑適量1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置26小時氧化破壞→20ml100ml30%雙氧水3ml，室溫放置23小時氧化空白溶劑適量30%雙氧水3ml，室溫放置23小時取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。（～12，制劑的質(zhì)量控制一第167~178頁） 富馬酸沃諾拉贊片吡啶3磺酸檢查破壞試驗結(jié)果名稱吡啶3磺酸總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未 破 壞/合格63379100/高溫破壞合格62286光照破壞合格71121酸 破 壞合格69644堿 破 壞合格73152氧化破壞合格62279計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結(jié)論：溶劑不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關(guān)物質(zhì)的專屬性良好。Ⅶ工作對照品與樣品混合破壞試驗溶液的配制與處理：供試品配制：（），雜質(zhì)Ⅶ，按處方加入輔料（），混合均勻，作為供試品粉末。溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白→20ml無降解處理未破壞→20ml無降解處理高溫破壞→20ml水浴100℃加熱5小時高溫空白→20ml水浴100℃加熱5小時光照破壞→20ml光照箱4500LX照射40小時光照空白→20ml光照箱4500LX照射40小時酸破壞→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘酸空白→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘堿破壞→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時氧化破壞→20ml30%雙氧水3ml，氧化空白→20ml30%雙氧水3ml，取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。（～25，制劑的質(zhì)量控制一第179~191頁） 富馬酸沃諾拉贊片吡啶3磺酸檢查破壞試驗結(jié)果名稱吡啶3磺酸總峰面積主峰面積%吡啶3磺酸峰面積吡啶3磺酸面積%物料平衡%分離度峰純度未 破 壞合格129089360937/高溫破壞合格134946966205光照破壞合格131575089733酸 破 壞合格1351111139062堿 破 壞合格1370201153110氧化破壞合格132680297055計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結(jié)論：溶劑及輔料均不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關(guān)物質(zhì)的專屬性良好。定量限試驗 同原料藥。 吡啶3磺酸定量限試驗結(jié)果1名稱稀釋步驟定量限/ng吡啶3磺酸→100ml 吡啶3磺酸定量限試驗結(jié)果2名稱123456平均RSD%峰面積830844842868904882 結(jié)論：此法靈敏度較高，在限度范圍內(nèi)可用于富馬酸沃諾拉贊及已知雜質(zhì)定量檢查。檢測限試驗 同原料藥。 吡啶3磺酸檢測限試驗結(jié)果名稱稀釋步驟檢測限/ng吡啶3磺酸→100ml結(jié)論：此法靈敏度較高，可有效檢出富馬酸沃諾拉贊及已知雜質(zhì)。線性關(guān)系試驗 同原料藥。 吡啶