新生兒促甲狀腺素的時(shí)間分辨熒光免疫分析及其試劑盒研制(編輯修改稿)
2025-07-26 04:21 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 選方法[1]。經(jīng)過多年研究，我們建立了NeohTSH TrFIA法，并研制出了診斷試劑盒，現(xiàn)報(bào)道如下。1 材料與方法 標(biāo)本 標(biāo)本均在受試者知情同意下通過Samp。S903濾紙收集，嚴(yán)格按要求操作[24]，由鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院、沈陽市婦幼保健所新篩中心、佛山市順德區(qū)婦幼保健院提供。 材料與儀器 分別用于包被和標(biāo)記的兩株鼠源性促甲狀腺素單克隆抗體（進(jìn)口分裝），TSH純品、牛血清白蛋白（BSA）和Tween80（Sigma公司）。Sepharose CL6B（Pharmacia公司）。96孔微孔板（Thermo Labsystems公司）。銪(Eu3+)標(biāo)記試劑盒（Wallac公司）。β萘甲酰三氟丙酮為主要成分的Eu3+發(fā)光增強(qiáng)液[5]、洗滌液[6]和含有小牛血清(200ml/L)的50mmol/L [6]均為自制。其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。凍干機(jī)（上海浦東冷凍干燥設(shè)備有限公司）。VictorTM2D1420型TrFIA檢測(cè)儀及配套DELFIA 174。 Neonatal TSH試劑（Perkin Elmer公司）。恒溫振蕩儀（廣州豐華公司）。 標(biāo)準(zhǔn)血片、質(zhì)控血片制備 用TSH純品按5055%的血細(xì)胞比容由人全血制備，由本公司生產(chǎn)部提供。 固相抗體包被板的制備 將包被抗體用50mmol/L ，在96孔微孔板各孔中加200181。l，4℃過夜，棄去包被液，洗滌1次，37℃封閉2h，棄去封閉液，真空抽干過塑冷藏。 銪標(biāo)記物的制備 將1mg的標(biāo)記抗體加入含有1mg的Eu3+凍干粉小瓶中，室溫振蕩反應(yīng)48h。反應(yīng)液經(jīng)用50mmol/L CL6B柱（1cm40cm）層析，A280監(jiān)測(cè)收集第一洗脫峰。 建立NeohTSH TrFIA檢測(cè)方法 采用雙抗體夾心法，將標(biāo)準(zhǔn)品、再加入用分析緩沖液1：1200稀釋的銪標(biāo)記物 200181。l室溫振蕩4h（室溫法）或室溫振蕩15min后置于4℃過夜孵育再室溫振蕩1h（過夜法），洗滌6次，加入增強(qiáng)液200181。l ，振蕩5min后，于1420時(shí)間分辨儀上用隨機(jī)配備的Workstation軟件熒光計(jì)數(shù)和用Multicalc軟件進(jìn)行擬合分析。 Perkimelmer公司DELFIA 174。 Neonatal TSH檢測(cè)方法嚴(yán)格按儀器和試劑說明書操作檢測(cè)。 評(píng)價(jià)參數(shù) 評(píng)價(jià)試劑盒的分析靈敏度、分析特異性、準(zhǔn)確性、精密度，建立試劑盒的參考值，并與國(guó)外同類產(chǎn)品進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 Neonatal TSH TrFIA標(biāo)準(zhǔn)曲線分析（有效劑量（ED）、變異系數(shù)（CV）等）及結(jié)果由VictorTM2D1420儀隨機(jī)配備Multicalc軟件自動(dòng)給出。其它平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)均采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析或直線相關(guān)性分析。測(cè)試值與靶值間采用偏倚分析。2 結(jié)果 上述包被抗體濃度、包被與封閉溫度與時(shí)間[7]、反應(yīng)溫度與時(shí)間[78]、銪標(biāo)記物工作濃度、洗板次數(shù)等均采用棋盤方陣滴配法確定。
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