【文章內(nèi)容簡介】 魯米諾（luminol）在一定條件下與H2O2及Co2+等金屬離子共存時發(fā)出強(qiáng)烈的藍(lán)光，當(dāng)樣品中有CAT存在時，基質(zhì)的H2O2將被分解，由H2O2所引起的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度減弱計算總CAT酶活性。薄層色譜法薄層色譜法測定維生素E只適用于αE。試樣經(jīng)皂化，使維生素E游離，用乙醚抽提出不可皂化物，用薄層層析法分離出αE，使其與三氯化鐵溶液反應(yīng)，三價鐵被還原為二價鐵，二價鐵與α,α’聯(lián)氮苯反應(yīng)生成鉻鹽，測定其顯色深度，求出α維生素E的含量。楊萬興等[43]建立了高效薄層掃描法測定維生素E霜中維生素E含量的方法。以乙酸乙醋、乙醚、冰醋酸(7:3:)為展開劑, 采用雙波長反封鋸齒法，測維生素E時λs=285 nm，λr=285 nm。%，%。毛細(xì)管電泳法電泳染色定位法的基本原理是根據(jù)光化學(xué)法與NBT還原法。電泳則采取垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳。既可采用SOD活性正染色(呈現(xiàn)棕色區(qū)帶)也可采取SOD活性負(fù)染色(呈現(xiàn)無色透明區(qū)帶)。根據(jù)凝膠上電泳分離的SOD區(qū)帶的著色深淺與面積大小，對樣品進(jìn)行半定量分析，也可制作校正曲線計算樣品中的SOD含量。Ana Maria Adalid等[44]用毛細(xì)管電色譜法分析測定了番茄中的番茄紅素和β胡蘿卜素含量， μg/%，方法可以很好的應(yīng)用于番茄及其制品中番茄紅素和β胡蘿卜素含量的測定。HerreroMart237。nez等[72]用毛細(xì)管電泳法測定了蔬菜中的β胡蘿卜素、番茄紅素和葉黃素的含量，可以很好的應(yīng)用于測定胡蘿卜、番茄、菠菜和玉米中的β胡蘿卜素、番茄紅素和葉黃素的含量。高效液相色譜法周林宗等[45]研究了固相萃取富集和預(yù)分離微柱高效液相色譜快速測定枸杞樣品中類胡蘿卜素的方法，方法采用用二極管矩陣檢測器檢測，檢測波長為450 nm，枸杞樣品中的幾種類胡蘿卜素在5 min內(nèi)可達(dá)到基線分離，方法標(biāo)準(zhǔn)回收率為95%~103%，%~%。章清等[46]建立血清中葉黃素、β胡蘿卜素、番茄紅素的高效液相色譜測定法，檢測波長為450 nm，葉黃素、番茄紅素和β胡蘿卜素的，%~%、%~%、%~%，%%、%%、%%。 μg/mL~ μg/mL。張玉珍等[47]建立了蝦青素的含量及有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜測定方法，檢測波長為482 nm，蝦青素在6 μg/mL~36 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，檢出限為11 ng/mL，平均回收率為100%，%。Amin Ismail等[48]用高效液相色譜法測定了5種蔬菜在不同種植方式下維生素C、β胡蘿卜素和葉黃素含量的變化。李國營等[49]建立了應(yīng)用高效液相色譜法(HPLC)測定谷子種質(zhì)資源中維生素E的檢測技術(shù), 并應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)原理對方法的精密度、準(zhǔn)確度、再現(xiàn)性等進(jìn)行了較全面的考察和評價。利用該方法對400份谷子種質(zhì)資源進(jìn)行了鑒定、評價, 并篩選出一批高維生素E含量的種質(zhì)資源。劉勝輝等[50]用高效液相色譜法測定了幾種水果中的維生素C，并研究了不同的色譜條件、不同的提取液對測定結(jié)果的影響，結(jié)果表明：%的偏磷酸浸提樣品以及作為流動相效果較好， min，回收率為92%~98%， mg/mL~ mg/mL。何優(yōu)選等[51]建立了一種高效液相色譜測定沙田柚果肉中維生素C含量的方法。檢測波長為265 nm，線性范圍40 μg/mL~320 μg/mL，%~%。謝志鵬等[52]建立并應(yīng)用了一種集高效液相色譜(HPLC)、流動注射(FI)和電化學(xué)發(fā)光三者優(yōu)點(diǎn)于一體的HPLCFI聯(lián)用電化學(xué)發(fā)光分析新方法，方法基于將在線恒電流電解產(chǎn)生ClO與Luminol構(gòu)成了較強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光體系，而維生素C對該化學(xué)發(fā)光體系有抑制作用，與流動注射技術(shù)相結(jié)合。108 mmol/mL~106 mmol/mL之間呈良好的線性，109 mmol/mL，%~%。張云楚等[53]建立了高效液相色譜示差折光檢測法測定維生素C葡萄糖注射液含量的方法， g/L~ g/ g/L~ g/L的濃度范圍內(nèi)呈線性，%%，%%。GB/T 222492008《保健食品中番茄紅素的測定》[54]適用于作為主要功效成分添加于保健食品中番茄紅素的測定。其方法原理是利用番茄紅素易溶于二氯甲烷等溶劑的理化特性，試樣經(jīng)焦性沒食子酸二氯甲烷溶液提取，定容，過濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，由紫外檢測器檢測，根據(jù)保留時間和峰面積進(jìn)行定性和定量。 g時，定容至10 mL，進(jìn)樣量10 181。L時，檢出限3104 g/kg，定量限1103 g/kg。 181。g/mL~ 181。g/mL。趙平娟[55]建立了番茄及其制品中番茄紅素高效液相色譜法測定方法。樣品經(jīng)丙酮加石油醚(2:1) ( %BHT) 提取,色譜柱采用(250 mm ,. 5μm) ,流動相為甲醇乙腈二氯甲烷(體積比25:70:5) ,柱溫為室溫,檢測波長為473 nm ,番茄紅素的保留時間為6 min。在3mg/ kg ~ 24 mg/ kg添加水平, % ~% , %~%。黃聲嵐[56]建立了RPHPLC法快速測定番茄紅素粉劑中的番茄紅素。該法采用Waters NovaPak C18 ( mm150 mm id. 4 μm),以甲醇：乙腈(80:20)為流動相,470 nm為檢測波長， % , %； %, %。張志強(qiáng)[57]探討了HPLC法測定番茄紅素的方法，結(jié)果表明最佳的色譜條件為流動相采用乙腈:四氫呋喃:二氯甲烷=85::、檢測波長472 nm，在此條件下可很好的分離番茄紅素，回收率96%~102%。DingQiang Lu[58]建立反相高效液相色譜法測定番茄紅素微膠囊中番茄紅素含量的方法。該法采用反相高效液相色譜法,色譜柱為美國Alltech Alltima C18( mm250 mm, 5 μm) , 流動相為甲醇四氫呋喃水(66:30:4) , mL/min ,檢測波長為472 nm。 μg/mL ~18 μg/mL ,%~% , %~%。張麗薇[59]采用高效液相色譜法測定保健食品中的番茄紅素(膠囊或片劑)。樣品用水溶解破膜,以乙酸乙酯提取，用HPLC檢測番茄紅素的含量。 μg/mL～ μg/mL， μg/mL，%～%, %～ %。方法操作簡單,靈敏度高,線性范圍寬。質(zhì)譜法B. Stephen Inbaraj等[60]用HPLCDADAPCIMS法測定了枸杞中的類胡蘿卜素及其酯的含量，方法測定了11種類胡蘿卜素和7種類胡蘿卜素酯。Li H等[61]用LCAPCIMS法測定魚子中的類胡蘿卜素和維生素A的含量，同時方法還研究了測定過程中基質(zhì)效應(yīng)的影響。A. Garrido Frenich等[62]用LCMS法測定了蔬菜水果中的維生素C和類胡蘿卜素含量。四、功效成分檢測方法（一）保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定修改的Marklund方法試劑A液： mol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris）鹽酸緩沖溶液（內(nèi)含1 mmol/LEDTA2Na）。B液： mol/L鄰苯三酚鹽酸溶液。 mg溶于少量10 mmol/L鹽酸溶液，并定容至100 mL。測定方法鄰苯三酚自氧化速率測定 在25℃左右，于10 mL， mL， mL。加入B液立即混合并傾入比色皿，分別測定在325 nm波長條件下初始和1 min后吸光值，二者之差即鄰苯三酚自氧化速率ΔA325（min1）。樣液和SOD酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率按上述步驟分別加入一定量樣液或酶液使抑制鄰苯三酚自氧化速率為1/2ΔA325（min1），即ΔA’325（min1）。SOD活性測定加樣程序見表2。表 1 SOD活性測定加樣表試液空白樣液SOD液A液/mL蒸餾水/mL樣液或SOD液/μL—B液/mL液體樣品按式（1）計算：SOD活力（U/mL）= ..........................（1）式中：U/mL—SOD酶活力單位；ΔA325—鄰苯三酚自氧化速率；ΔA’325—樣液或SOD酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率；V—所加酶液或樣液體積，單位為毫升（mL）；D—酶液或樣液的稀釋倍數(shù)；—反應(yīng)液總體積，單位毫升（mL）。固體樣品按式（2）計算：SOD活力（U/g）= ..........................（2）U/mL—SOD酶活力單位；ΔA325—鄰苯三酚自氧化速率；ΔA’325—樣液或SOD酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率；D—酶液或樣液的稀釋倍數(shù)；V1=樣液總體積，單位為毫升（mL）；m=樣品質(zhì)量，單位為克（g）；—反應(yīng)液總體積，單位毫升（mL）。方法特點(diǎn)本方法以修改Marklund方法和化學(xué)發(fā)光法測定保健食品中SOD活性。 U/mL，108 mol/L [63]。（二） 保健食品中過氧化氫酶（CAT）活性的測定[64]分析方法（1） 過氧化氫酶的提取稱取約1g試樣，倒入研缽中。加少量石英砂，粗磨至無整粒樣后，量取緩沖液50 mL，先加入少量以潤濕樣品，細(xì)磨至糊狀后，小心轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，用剩余的緩沖液分多次洗凈研缽，洗液并入錐形瓶中，劇烈振搖5 min，靜置2 h ~3 h后過濾至比色管中。（2） 酶活動度的測定 mL濾液于錐形瓶中，直接煮沸1 min。冷卻后加入20 mL水和3 mL 2%過氧化氫溶液，搖勻后在30 ℃恒溫水浴鍋中放置15 min，加入5 mL 10%硫酸溶液，搖勻， mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定剩余的過氧化氫，滴定至微紅色且30 s不褪色為止，記錄消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（V1）。（3） 空白試驗(yàn)： mL濾液于錐形瓶中，直接煮沸1 min。冷卻后加入20 mL水和3 mL2%過氧化氫溶液，搖勻后在30 ℃恒溫水浴鍋中放置15 min，加入5 mL10%硫酸溶液，搖勻， mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定剩余的過氧化氫，滴定至微紅色且30 s不褪色為止，記錄消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（V0）。 過氧化氫酶活動度X按式（3）計算：..........................（3）式中：X—過氧化氫酶活動度，單位為毫克過氧化氫每克（mg H2O2/g）；V0—空白試驗(yàn)用去高錳酸鉀溶液體積，單位為毫升（mL）；V1—試樣滴定用去高錳酸鉀溶液體積，單位為毫升（mL）；c—試劑高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為摩爾每升（mol/L）；m—試樣質(zhì)量，單位為克（g）；M—試樣水分含量，%；17— mL高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液[c（1/5 KMnO4）= mol/L]相當(dāng)?shù)腍2O2的質(zhì)量。方法特點(diǎn)在pH ，從樣品中提取過氧化氫酶，在提取液中加入一定量的過氧化氫，是過氧化氫在過氧化氫酶作用下分解，再用高錳酸鉀溶液滴定過量的過氧化氫。根據(jù)高錳酸鉀溶液的消耗量計算出試樣中過氧化氫酶活動度。（四） 保健食品中前花青素含量的測定[65]分析方法固體粉末狀試樣：根據(jù)試樣含量稱取50 mg~500 mg（ g）試樣于50 mL棕色容量瓶中，加入30 mL甲醇，超聲處理20 min，放冷至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，離心（3000 r/min，10 min），上清液備用。含油試樣：根據(jù)試樣含量稱取50 mg~500 mg（ g）試樣于小燒杯中，用5 mL二氯甲烷使試樣溶解，并倒入50 mL容量瓶中，再用甲醇多次洗燒杯，并入50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。口服液：根據(jù)試樣含量準(zhǔn)確吸取1 mL~5 mL試樣，置于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。將正丁醇與鹽酸按95:5的體積比混合后，取出15 mL置于具塞錐形瓶中， mL硫酸鐵銨溶液和2 mL試樣溶液，混勻，置沸水水浴回流，精確加熱40 min后，立即置冰水中冷卻，過微孔濾膜后高效液相色譜儀測定。高效液相色譜儀：配紫外檢測器；超聲波清洗器。 離心機(jī)；液相色譜參考條件：色譜柱：耐低pH型的ODS C18柱， mm150 mm，5 μm；柱溫：35 ℃。 檢測器：紫外檢測器；檢測波長：525 nm；流動相：水+甲醇+異丙醇+甲酸=73+13+6+8；進(jìn)樣量：10 μL；流速： mL/min，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。圖 10 前花青素的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖方法特點(diǎn)方法的檢出限為：104 g/100g，104 g/100g。（五） 保健食品中番茄紅素的測定 方法提要 樣品經(jīng)皂化后用石油醚提取番茄紅素，提取液經(jīng)濃縮后，過中性氧化鋁柱凈化，洗脫液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊?，用液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。試劑和材料（1）含1% BHT的二氯甲烷溶液： g BHT（），用100 mL二氯甲烷溶解。（2）提取液：稱取10 g BHT（），用1000 mL石油醚溶