透明質(zhì)酸的生產(chǎn)工藝(編輯修改稿)
2024-12-13 20:29 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 6%~0. 8%)，但 由于 所用 的原 料為 人臍帶 ，所 得 透 明 質(zhì)酸 精品 作為 眼科 手術(shù) 用粘 彈輔 助劑 時(shí) ,引 起抗 原反 應(yīng)的 可能 性較 小。 三 、 以 動(dòng)物 眼玻 璃體 為 原料 的制 備工 藝 [3,7,8] （ 一 ） 工 藝路 線 （ 二 ） 工 藝過 程 1．提取 將冷 凍的 牛、豬 或羊 眼球 解凍 ，剝出 玻璃 體，融化 后離 心，分 出上 清，加入 倍 體 積 的 丙酮 沉淀 。 8h 后 離心 ，所 得沉 淀加 入到 1mol/L 氯 化鈉 溶液 中， 攪拌 提取 4h，離 心 。 2． 除 蛋 白 質(zhì)上 清液 在低 溫下 加入 冷的 5%三 氯乙 酸， 攪勻 ，立 即離 心分 出上 清液 ，用5m ol/L 氫氧 化鈉 溶液 調(diào) pH 值至 中性 。 3． 粗 品 沉 淀將 中性 上清 液倒 入 2 倍 體積 95%乙醇 中， 分出 沉淀 。 4．溶 解、吸附 除雜 質(zhì)將 沉淀 溶于 ，加 入處 理好 的漂 白土 攪拌吸附 2h， 離心 收 集 上清 液。 5． 絡(luò) 合 沉 淀向 上清 夜內(nèi) 加入 等體 積的 1%CPB 溶 液， 得 HACPB 沉 淀。 放置 12h 后離心 ， 收 集 沉淀 。 6． 解 離 沉 淀洗 滌后 于 ， 抽濾 。 7．沉 淀、干燥 ：將 濾液 倒入 3 倍體積 95%乙 醇中 ，分 出沉 淀 。沉淀 經(jīng)乙 醇 、丙 酮脫水 ，放 于 有 五 氧化 二磷 的真 空干 燥器 內(nèi)干 燥， 得玻 璃酸 鈉精 品。 （ 三 ） 工 藝說 明與 討論 1．以 動(dòng)物 眼玻 璃體 為原 料制 得的 透明 質(zhì)酸 ，其質(zhì) 量較 以雄 雞冠和 人臍 帶為 原料 者差 ，相對(duì) 分 子 質(zhì) 量 Mr 較小 ，一 般不 適于 作注 射劑 使用 。 2．吸 附除 雜質(zhì) 步驟 ，尚可 選用 類 似 吸附 劑。天然 礦物 質(zhì)吸 附劑 常因 生產(chǎn) 廠或 同一 廠批次不 同在 吸附 性能 上有 差異 ，其 預(yù)處 理方 法也 很重 要，要 根據(jù) 實(shí)際 情況 實(shí)驗(yàn) 研究 來確 定具體操 作 方 法 。 3． C PB 與 CPC 的 性能 基本 相同 ，兩 者在 透明 質(zhì)酸 的生 產(chǎn)中 可相 互代 用。 四 、 細(xì) 菌發(fā) 酵法 生產(chǎn) 工 藝 （ 一 ） 工 藝路 線 [10~12] （ 二 ） 工 藝過 程 1）搖瓶 種子 液的培 養(yǎng)取 斜面 菌種 ，接 種于 裝有 滅菌培 養(yǎng)液 400ml 的 1L 錐 形瓶 中， 37℃培養(yǎng) 12~16h，光 鏡 觀察 菌體 生長 良好 ，無雜 菌污 染 ，即 可接 種于 種子 罐中 。培養(yǎng) 液配方 ：蛋 白胨 10g、牛 肉浸膏 5g、酵 母膏 5g、葡 萄糖 5g、磷 酸 氫二鉀 2g、硫 酸鎂 0. 3g，加水溶 解 至 1L， 115℃ 滅菌 30min。 2）種 子罐 種子 液的 培養(yǎng) 按搖 瓶種 子液 的配 方配 制培 養(yǎng)液 100L，加 入種 子罐 中，通蒸汽加熱， 115℃ 滅菌 30min。冷 卻至 37℃ ，用 火焰接 種法 ，將搖 瓶種 子液 接種 于種 子罐中 ，通 氣 量 50L/min， 攪拌 120rpm， 37℃ 培養(yǎng) 12~16h。 光 鏡觀 察菌 體生 長良 好， 無雜 菌污 染 ， 即 可待 接種 于發(fā) 酵罐 中。 3） 發(fā) 酵 按 搖瓶 種子 液配 方， 將葡 萄糖 含量 提高 到 5%， 配 制發(fā) 酵培 養(yǎng)液 1000L， 加入1. 4m 3 發(fā)酵 罐中 ,通入 蒸汽 加熱 ,115℃ 滅菌 30min。 冷卻 至 37℃ 后 ，將 種子 罐中 的種 子液 通 過 移 種管 道移 至發(fā) 酵罐 中， 維持 通氣 量 500~600L/min， 攪 拌轉(zhuǎn) 速 120rpm， 37℃發(fā)酵 40~46h。 在發(fā) 酵過 程中 ，發(fā) 酵液 的 pH 值不 斷下 降， 加 5mol/L 氫氧 化鈉 溶液 ，調(diào)pH ~ 。發(fā)酵 后期，葡萄 糖濃 度下 降至 %以下 ,pH 值 下降 很慢 或不 再下降 時(shí) ,即為發(fā) 酵 終 點(diǎn) 。 4）下 游分 離純 化發(fā) 酵結(jié) 束 ,用 三氯 乙酸調(diào) ~ ,板 框 過濾 除菌 體 ,濾液 用稀 氫氧化鈉調(diào) ~,加三 倍體積 95%乙醇 ,沉 淀出透 明質(zhì) 酸。 沉淀 用發(fā) 酵體 積的 氯 化 鈉 水 溶液 溶解 ，加 入 %的 活性 炭， 攪拌 吸附 1h。 過 濾， 濾液 在攪 拌下 ,加 入過 量的 1%CPC 水 溶液 與濾 液中 的透 明質(zhì) 酸發(fā) 生絡(luò) 合沉 淀 ,靜置 使沉 淀下 沉 ,虹 吸出 母液 ,加入0. 1m ol/L 氯 化鈉 液洗 滌沉 淀兩 次。 沉淀 于發(fā) 酵體 積的 夜 ,過濾 ,濾 液加 三倍 體積 乙醇 沉淀 ,沉 淀用 乙醇 和丙 酮脫 水 ,用 旋轉(zhuǎn) 式真 空 干 燥器 進(jìn)行 干燥 ,得 透明 質(zhì)酸 鈉。 （ 三 ） 工 藝說 明與 討論 1937 年， Kendall 等 [12]就 發(fā) 現(xiàn)鏈 球菌 可產(chǎn) 生透 明質(zhì) 酸， 許多 人對(duì) 此進(jìn) 行了 研究。鏈球 菌屬 的多 種細(xì) 菌具 有莢 膜 (見圖 31 和圖 32)，這 種莢 膜的 主要 成分 就是 透明質(zhì)酸 。鏈球 菌在 生長 過程 中，莢膜 的產(chǎn) 生有 幾種 不同 的情 況，有的 菌株 在整 個(gè)生 長期 都有莢膜 ，有的 在對(duì) 數(shù)生 長期 的前 段產(chǎn) 生，后 段消 失，或 穩(wěn)定 期消 失，有 的根 本不 產(chǎn)生 莢膜。進(jìn)一 步的 研究 發(fā)現(xiàn) 這與 菌種 是否 產(chǎn)生 透明 質(zhì)酸 酶有 密切 關(guān)系，事實(shí) 上目 前一 部分 商品 透明質(zhì)酸 酶 就 是 用鏈 球菌 發(fā)酵 制得 的， 莢膜 的消 失是 由 于 被酶 解了 。 MacLennan[13]根 據(jù)是 否產(chǎn) 生 透 明 質(zhì)酸 和透 明質(zhì) 酸酶 ，將 具有 莢膜 的鏈 球菌 C 組分 為三 類： 1） 只產(chǎn) 生透 明質(zhì) 酸，不 產(chǎn)生 透明 質(zhì)酸 酶； 2）透 明質(zhì) 酸和 透明 質(zhì)酸 酶都 產(chǎn)生； 3）只 產(chǎn)生 透明 質(zhì)酸 酶，不 產(chǎn)生透明 質(zhì)酸 。因此 ，
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