透明質(zhì)酸的生產(chǎn)工藝-全文預(yù)覽
【正文】 量制 備 [21,22]等 。發(fā)酵 生產(chǎn) 透明 質(zhì) 酸 所用的菌種 ,一般 是將 產(chǎn)生 透明 質(zhì)酸 的鏈 球菌 進(jìn)行 誘變 處理 得到 ,誘變方 法有 紫外 線照 射 ,化 學(xué)誘變 劑 處 理 等。進(jìn)一 步的 研究 發(fā)現(xiàn) 這與 菌種 是否 產(chǎn)生 透明 質(zhì)酸 酶有 密切 關(guān)系，事實(shí) 上目 前一 部分 商品 透明質(zhì)酸 酶 就 是 用鏈 球菌 發(fā)酵 制得 的， 莢膜 的消 失是 由 于 被酶 解了 。 沉淀 于發(fā) 酵體 積的 夜 ,過濾 ,濾 液加 三倍 體積 乙醇 沉淀 ,沉 淀用 乙醇 和丙 酮脫 水 ,用 旋轉(zhuǎn) 式真 空 干 燥器 進(jìn)行 干燥 ,得 透明 質(zhì)酸 鈉。發(fā)酵 后期，葡萄 糖濃 度下 降至 %以下 ,pH 值 下降 很慢 或不 再下降 時(shí) ,即為發(fā) 酵 終 點(diǎn) 。 光 鏡觀 察菌 體生 長(zhǎng)良 好， 無雜 菌污 染 ， 即 可待 接種 于發(fā) 酵罐 中。 四 、 細(xì) 菌發(fā) 酵法 生產(chǎn) 工 藝 （ 一 ） 工 藝路 線 [10~12] （ 二 ） 工 藝過 程 1）搖瓶 種子 液的培 養(yǎng)取 斜面 菌種 ，接 種于 裝有 滅菌培 養(yǎng)液 400ml 的 1L 錐 形瓶 中， 37℃培養(yǎng) 12~16h，光 鏡 觀察 菌體 生長(zhǎng) 良好 ，無雜 菌污 染 ，即 可接 種于 種子 罐中 。 （ 三 ） 工 藝說 明與 討論 1．以 動(dòng)物 眼玻 璃體 為原 料制 得的 透明 質(zhì)酸 ，其質(zhì) 量較 以雄 雞冠和 人臍 帶為 原料 者差 ，相對(duì) 分 子 質(zhì) 量 Mr 較小 ，一 般不 適于 作注 射劑 使用 。 放置 12h 后離心 ， 收 集 沉淀 。 2． 除 蛋 白 質(zhì)上 清液 在低 溫下 加入 冷的 5%三 氯乙 酸， 攪勻 ，立 即離 心分 出上 清液 ，用5m ol/L 氫氧 化鈉 溶液 調(diào) pH 值至 中性 。 3．實(shí)驗(yàn) 發(fā)現(xiàn) ，在 高鹽 濃度 下，有 機(jī)溶 劑可 使大 部分 蛋白 質(zhì)變 性，或被 鹽析 沉淀 出，或在乙 醇 沉 淀 后不 再溶 于水 ，這 樣可 使提 取液 得到 明顯 的純 化。 （ 三 ） 工 藝說 明與 討論 1．對(duì) 原料 預(yù)處 理，新生 兒臍 帶剪 下后 ，應(yīng)盡 量擠 出里 面血 管中 存留 的血 液，再放 入丙酮中 脫水 保存 。 4． 氯 仿 處 理再 用氯 仿處 理 2~3 次 ， 分出 水相 。 2．氯仿 處理 濾液 中加入 10%量 的氯 化鈉 ，攪 拌使 溶解。干 燥的 產(chǎn)品 量較 少時(shí) ，可采用 靜止 狀態(tài) 下 ，加 五氧化二 磷進(jìn) 行常 溫真 空干 燥； 產(chǎn)品 量較 多時(shí)， 可采 用動(dòng) 態(tài)的 真空 干燥 ，溫 度控 制在 50~65℃ ，不 用 五 氧 化二 磷。此原 理與 離子 交換 法有 類似之處。原 理是 ， CPC 為季 銨鹽 ，在水 溶液 中帶 正電荷 ；透 明質(zhì) 酸或 其它 酸性 粘多 糖 ，在 水溶 液中 帶負(fù) 電荷 ；在 低鹽 濃度 下 ，透 明質(zhì) 酸與 CPC 絡(luò)合沉 淀，在高 鹽濃度 下， HACPC 絡(luò) 合物 解離 溶解。 可反 復(fù)多 次進(jìn) 行氯 仿處 理。 7．氯 仿可 使蛋 白變 性沉 淀 ，利 用此 作用 可除 去一 部分 蛋白 質(zhì)雜質(zhì) 。沉 淀形 態(tài)有 纖維狀 和無 定型 粉末 狀兩 種形 態(tài) ,纖 維狀 透明 質(zhì)酸 容易 制備 ,形態(tài)疏 松 ,易于脫 水和 真空 干燥 ,缺點(diǎn) 是使 用時(shí)，溶解 速度 慢，若在 常溫 下溶 解 成 1%的水 溶液 ，需 要 3~7d。 3．透明 質(zhì)酸 的提 取液 粘度 較大，過濾 速度 較慢 ，可 采用 先粗 濾后 精濾 ，并 加紙 漿、硅藻土 或 活 性 炭助 濾。加 熱至 90℃ 可對(duì) 原料 有一定滅 菌作 用，并使 蛋白 質(zhì)熱變 性，易被 蛋白 酶水 解。 2．雞 冠絞 碎后 用膠 體磨 處理 時(shí) ，注 意不 要磨 得太 細(xì)，以減 少機(jī) 械剪 切力 對(duì)透 明質(zhì) 酸的降解 。 8． 過 濾 解 離液 先用 硅藻 土過 濾至 清 ,再用 微孔 濾膜 精濾 。溶解 后 ，調(diào) ~5. 0,加 入等 體積 的氯 仿攪 拌處理 2 次 ,靜 置分出水 相 。 一 、 以 雄雞 冠 (roosterb)為 原料 的 生產(chǎn) 工藝 [1~4] （一） 工 藝 路線 （二） 工 藝 過程 1． 提 取 凍 雞冠 解凍 后， 用絞 肉機(jī) 絞碎 ，加 適量 水用 膠體 磨磨 成糊 狀， 按每 1kg 雞冠 加水 8L， 加 氯化 鈉 80g， 攪 拌加 熱至 90℃ ，保 溫 10min， 冷 卻至 50℃ ，用 1mol/L 氫氧化 鈉 液 調(diào) ~,加入適 量胰 酶 ,45~50℃ 保 溫酶 解 5~7h， 酶解 過程 中維 持pH 8. 5~。已 從下 列組 織中 分離 出了 透明 質(zhì)酸： 結(jié)締 組織、 臍帶、 皮膚 、人 血清、 雞冠、關(guān)節(jié) 滑液 、腦、 軟骨 、眼 玻璃 體、人 尿、雞 胚、 兔卵 細(xì)胞、 動(dòng)脈 和靜 脈等， 但考 慮到 原料透明 質(zhì)酸 含量 的高 低、數(shù)量 的多 少和 易于 取得 的程 度等 成本 因素，能夠 用于 生產(chǎn) 的原 料主要為 雞冠 、人 臍帶 和動(dòng) 物眼 球。透 明質(zhì) 酸在 動(dòng)物 組織 中的 分布 較為 廣泛 ，幾 乎所 有的 動(dòng)物 組織 中均 含有 透明 質(zhì)酸，只是含量 不同 。透明 質(zhì)酸 無種 屬差 異，不同 動(dòng)物 組織 提取 的及 不同 菌種 發(fā)酵 生產(chǎn) 的透 明質(zhì) 酸， 在化 學(xué)本 質(zhì)和 分子 結(jié)構(gòu) 上是 一致的 ，只 是 相 對(duì) 分子 質(zhì)量 （ Ｍ r）有 差別 。 4． 氯 仿 處 理將 透明 質(zhì)酸 中間 品溶 于 ,溶解 濃 度為 %,溶 解過程 中加 少量 氯仿 防腐 。 7． 解 離 將 HACPC 絡(luò) 合沉 淀加 入 ,攪拌 解離 5~10h。也 可用 丙酮 脫水 處理 或儲(chǔ) 存，這樣 可除去大 部 分 脂 肪等 雜質(zhì) ，以 利于 后面 的分 離純 化， 但成 本加 大。提取 時(shí)，可在 水中 加入 1%的 氯化 鈉 。 提取 和酶 解時(shí) ，應(yīng) 注意 防腐 。在從 水溶液中 用 甲 醇 或乙 醇沉
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