【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 T3基因的有效劑量。在SKOV3ip1小鼠模型中我們注射STAT3 siRNA /rHDL。第四天，我們發(fā)現(xiàn)降低了88% STAT3蛋白水平(圖W3B)，在第6天，蛋白表達(dá)有些回升。根據(jù)這個(gè)實(shí)驗(yàn)。另一個(gè)關(guān)于癌癥生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因，F(xiàn)AK也具有類似的結(jié)果(圖W3C)。在SKOV3ip1小鼠模型中單劑量注射FAK siRNA /rHDL納米粒4天后，F(xiàn)AK水平降低了87% 。Figure delivery of siRNA using rHDL nanoparticles. (A) Uptake of Alexa555labeled siRNA/rHDL in SKOV3ip1 tumors. A single IV or IP injection of mg/kg of Alexa555 labeled or mg/kg of IV and IP injection of untagged siRNA/rHDL was administered in mice bearing SKOV3ip1 tumors, and 48 hours later, tumors were harvested and counterstained with Hoechst (blue), and siRNA (red) uptake was assessed with fluorescence microscopy. The Hamp。E image shows tumor histologic diagnosis. The adjacent graph shows percent Alexa555positive cells. (B)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in chemosensitive (HeyA8 and SKOV3ip1) and chemoresistant (HeyA8MDR) mouse models of ovarian carcinoma. *P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. (C)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in colorectal cancer model of liver metastases (HCT116). *P .05 pared with control siRNA/rHDL, **P .05 pared with STAT3 or oxaliplatin vivoefficacy of FAK siRNA/rHDL in the SKOV3ip1 ovarian cancer model.*P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. Error bars, SEMSTAT3或FAK基因沉默對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響體內(nèi)成功沉默 FAK 或STAT3基因后(圖W3B），我們接下來測(cè)試了這種是否用多烯紫杉醇化療藥方法的治療有效性。我們首先用STAT3 siRNA / rHDL 靶向STAT3(圖2 B)。在三個(gè)原位卵巢癌小鼠模型中用單獨(dú)STAT3 siRNA / rHDL或偶聯(lián)多烯紫杉醇進(jìn)行治療。在HeyA8 模型中，單獨(dú)給STAT3 siRNA / rHDL或多烯紫杉醇減少了的62%的腫瘤重量(P ,兩者)。與對(duì)照組比較，STAT3 siRNA / rHDL和多烯紫杉醇的聯(lián)合治療使腫瘤重量減少的最多(92%，P )。在SKOV3ip1模型中結(jié)果類似(圖2 B)。另外，當(dāng)STAT3 siRNA / rHDL有無多烯紫杉醇處理小鼠，HeyA8 和SKOV3ip1卵巢癌模型中證實(shí)了腫瘤結(jié)數(shù)量的劇減。(圖W4A) 考慮到STAT3的耐藥性，我們還進(jìn)行了紫杉醇耐藥HeyA8MDR模型實(shí)驗(yàn)(圖2 B)。正如預(yù)期，多烯紫杉醇對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)無顯著影響。STAT3 siRNA / rHDL 單藥療法使腫瘤生長(zhǎng)減少了76%(P)。多烯紫杉醇和STAT3 siRNA / rHDL聯(lián)合療法使腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)減低的更多(比起對(duì)照組，91%，P ；比起多烯紫杉醇，89%，P )。腫瘤節(jié)數(shù)量也有類似的效果（圖2）。我們?cè)诿恳粋€(gè)治療組的動(dòng)物的局部轉(zhuǎn)移頻率進(jìn)行了分析。相比于對(duì)照組和多烯紫杉醇單藥療法，STAT3 siRNA / rHDL是否偶聯(lián)多烯紫杉醇都能顯著降低上腹部和薄壁肝組織的轉(zhuǎn)移。 接下來，我們研究在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌小鼠模型（ HCT116 ）研究STAT3沉默基因的治療效果 ，該模型使SR B1表達(dá)（圖2C）。腫瘤細(xì)胞注射到脾臟后，轉(zhuǎn)移擴(kuò)散到肝臟。 STAT3 siRNA / rHDL單獨(dú)治療導(dǎo)致在腫瘤的重量減少79％ （ P ） 。對(duì)于這些實(shí)驗(yàn)，我們常用細(xì)胞毒性，奧沙利鉑，偶聯(lián)STAT3 siRNA / rHDL。奧沙利鉑降低55 ％的腫瘤生長(zhǎng)（ P ）。與對(duì)照組相比，奧沙利鉑和STAT3 siRNA / rHDL偶聯(lián)治療可使腫瘤重量（ 96 ％，P ）和肝臟中轉(zhuǎn)移損壞數(shù)目（86％ ，P ）顯著減少。為了評(píng)估rHDL納米粒的安全性，我們?cè)u(píng)估用rHDL納米粒處理小鼠的幾個(gè)參數(shù)（圖W5 ） 。在兩個(gè)不同治療組中，動(dòng)物體重或肝功能測(cè)試（ AST和ALT比值）沒有顯著差異（圖W5 ，A和B ）。與對(duì)照組相比，治療結(jié)果顯示沒有顯著變化后，多個(gè)正常器官用蘇木精和伊紅（ H ＆ E ）染色（圖W5C ）為了測(cè)試rHDL納米粒對(duì)其他靶點(diǎn)的效用潛力,我們進(jìn)行了FAK siRNA / rHDL實(shí)驗(yàn)。我們?cè)赟KOV3ip1原位卵巢癌模型中用FAK siRNA / rHDL 納米粒靶向FAK(圖2 C)。FAK或多烯紫杉醇單藥治療可使腫瘤重量減少62%和74%(兩者P )。聯(lián)合治療顯著減少腫瘤重量(96%，P )，腫瘤節(jié)的數(shù)量(74%，P )。空rHDL 納米粒和對(duì)照siRNA / rHDL處理的小鼠之間沒有顯著差異。　STAT3靶向腫瘤微環(huán)境的影響 為了了解STAT3 / rHDL的生物效應(yīng)，在藥物敏感的(SKOV3ip1)和藥物耐藥(HeyA8MDR)卵巢癌模型中進(jìn)行一系列的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)。在SKOV3ip1卵巢癌模型中(圖3), STAT3基因沉默減少26%細(xì)胞增殖(P )，而多烯紫杉醇抑制30%腫瘤細(xì)胞增殖(P )。與對(duì)照組比較，STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇聯(lián)合治療可抑制48%腫瘤細(xì)胞增殖(P )(圖3)。在HeyA8MDR卵巢癌模型中(圖W6)，就多烯紫杉醇處理對(duì)于細(xì)胞增殖就沒有效果，STAT3 siRNA / rHDL單藥可減少19%細(xì)胞增殖。對(duì)照組比較，STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇偶聯(lián)治療可顯著降低細(xì)胞增殖(39%，P ）。為了確定STAT3沉默對(duì)腫瘤相關(guān)血管生成的影響,我們從所有四個(gè)實(shí)驗(yàn)組取新鮮冷凍腫瘤組織的樣品進(jìn)行CD31染色實(shí)驗(yàn)(圖3和W5)和檢測(cè)MVD。在SKOV3ip1模型,STAT3 siRNA / rHDL或