【正文】 試證實(shí)了SRB1的高水平表達(dá)。在SKOV3ip1小鼠模型中單劑量注射FAK siRNA /rHDL納米粒4天后，F(xiàn)AK水平降低了87% 。 接下來，我們研究在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌小鼠模型（ HCT116 ）研究STAT3沉默基因的治療效果 ，該模型使SR B1表達(dá)（圖2C）。在HeyA8MDR卵巢癌模型中(圖W6)，就多烯紫杉醇處理對(duì)于細(xì)胞增殖就沒有效果，STAT3 siRNA / rHDL單藥可減少19%細(xì)胞增殖。這些基因可以作為響應(yīng)靶向STAT3療法的重要組織標(biāo)記基因。例如，rHDL核心成分的細(xì)胞攝取通過一個(gè)特定的受體(SRB1)完成。用脂質(zhì)體或小分子抑制劑系統(tǒng)性靶向 FAK顯示減少腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，但是，這種方法并非腫瘤特異性并且可能產(chǎn)生毒性。在腫瘤細(xì)胞中激活STAT3與血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的增加是相關(guān)的。到目前為止,一些納米粒系統(tǒng)已經(jīng)具有潛在的治療措施，然而,由于缺乏組織特異性和體內(nèi)廣泛分布大部分這些系統(tǒng)可能在對(duì)正常組織產(chǎn)生毒性。　　生物數(shù)據(jù)指出，STAT3沉默后凋亡和修復(fù)是細(xì)胞生存的主要影響，我們重點(diǎn)研究這些途徑的基因(表W1)?？誶HDL 納米粒和對(duì)照siRNA / rHDL處理的小鼠之間沒有顯著差異。多烯紫杉醇和STAT3 siRNA / rHDL聯(lián)合療法使腫瘤細(xì)胞的增長減低的更多(比起對(duì)照組，91%，P ；比起多烯紫杉醇，89%，P )。在SKOV3ip1小鼠模型中我們注射STAT3 siRNA /rHDL。SRB1表達(dá)在腫瘤細(xì)胞在研究rHDL作為siRNA的有效遞送系統(tǒng)之前， 我們首先分析了多個(gè)細(xì)胞系和人類腫瘤存在的SRB1受體。大腸癌轉(zhuǎn)移模型對(duì)于大腸癌轉(zhuǎn)移模型， HCT116細(xì)胞注入雌性裸鼠脾臟（治療組 N = 10）。在人類上皮卵巢腫瘤(n = 50)在SBR1的表達(dá)可以用福爾馬林固定石蠟包埋標(biāo)本檢測，這種方法源于德克薩斯大學(xué)MD安德森癌癥中心，是經(jīng)過機(jī)構(gòu)審查委員會(huì)批準(zhǔn)。在微序列分析前，STAT3基因沉默利用蛋白質(zhì)印跡在蛋白質(zhì)水平得到證實(shí)。HCT116細(xì)胞在添加10%%硫酸慶大霉素的改良伊格爾培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 低聚賴氨酸 / siRNA混合物偶聯(lián)脂質(zhì)，（ 10mM Tris， KCl，1mM ） 。增加HDL攝取可使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生較高增殖率。這個(gè)概念根源于干擾RNA（例如，小分子干擾RNA）基因沉默的能力，傳統(tǒng)治療方法很難靶向這些基因，如抗體或小分子抑制劑。這些數(shù)據(jù)表明，rHDL納米粒是一種新型、高效的siRNA載體，因此。 為了研究siRNA靶向輸送途徑，一些腫瘤細(xì)胞受體已被獲知。簡單地說，載脂蛋白AI ，是rHDL納米粒的主要核蛋白，在生產(chǎn)蛋白過程中用質(zhì)粒載體進(jìn)行分離和純化。本篇文章中所用到所有細(xì)胞株都是德克薩斯大學(xué)MD安德森癌癥中心的，通過表征細(xì)胞線芯的研究得到認(rèn)證。RNA通過提取(氯仿),沉淀(異丙醇)和純化(75%乙醇)。流式細(xì)胞儀分析之前的樣品。適合的腫瘤細(xì)胞來源于卵巢癌小鼠模型（ HeyA8，SKOV3ip1和HeyA8 MDR ）用腹腔注射接種。rHDL納米粒具有強(qiáng)大的有效載荷承載能力（最高至4mg siRNA /ml)。用該方法進(jìn)行長期治療實(shí)驗(yàn)之前，我們下一個(gè)驗(yàn)證STAT3 siRNA偶聯(lián)到rHDL納米顆粒(siRNA / rHDL)在體內(nèi)基因沉默的有效性。(圖W4A) 考慮到STAT3的耐藥性，我們還進(jìn)行了紫杉醇耐藥HeyA8MDR模型實(shí)驗(yàn)(圖2 B)。我們?cè)赟KOV3ip1原位卵巢癌模型中用FAK siRNA / rHDL 納米粒靶向FAK(圖2 C)。與對(duì)照組(P )相比，STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇的聯(lián)合治療可增加30倍的腫瘤細(xì)胞凋亡。生物效果是通過降低腫瘤細(xì)胞增殖，減少降低血管生成，降低細(xì)胞生存率來評(píng)估。即使STAT3被廣泛認(rèn)為是一個(gè)重要的癌癥啟動(dòng)子，傳統(tǒng)治療方法因其靶向性受到的限制。這個(gè)遞送方法不僅高效的，而且具有選擇性和生物相容性。在目前研究中，rHDL納米粒的吸收主要局限于腫瘤和肝。STAT3沉默用免疫印跡分析證實(shí)(圖W3A)。在SKOV3ip1模型,STAT3 siRNA / rHDL或多烯紫杉醇單藥治療在MVD(圖3)產(chǎn)生66%至69%的降低(P )。對(duì)于這些實(shí)驗(yàn)，我們常用細(xì)胞毒性，奧沙利鉑，偶聯(lián)STAT3 siRNA / rHDL。我們首先用STAT3 siRNA / rHDL 靶向STAT3(圖2 B)。熒光標(biāo)記(Alexa555)siRNA被包入到rHDL納米粒子，并進(jìn)行IV或IP(圖2)。我們使用SPSS和GraphPadPrism軟件對(duì)所有結(jié)果進(jìn)行處。熒光染色取新鮮冰凍得原位卵巢癌模型（ SKOV3ip1 ）的腫瘤組織 ，置于丙酮中，用PBS洗滌，并用Hoechst （1:10,000 ）復(fù)染。蛋白質(zhì)印跡分析用改良放射免疫沉淀裂解緩沖液制備細(xì)胞裂解液。 ），和一個(gè)非定標(biāo)性的控制序列（靶序列的539。簡單地說，1ml的納米粒加入1ml的比色皿中作zeta電勢檢測。因此，使用小分子抑制劑或其他非特異性靶向STAT3的手段可能會(huì)導(dǎo)致許多不必要的副作用，因此需要有效途徑限制毒性。此外，眾所周知，HDL納米?？梢蕴颖芫W(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吸收，比大多數(shù)藥物制劑或其他脂蛋白，他們?cè)谘h(huán)中表現(xiàn)出更長的滯留時(shí)間。 基于脂蛋白納米載體的小干擾RNA靶向遞送方法研究摘要RNA干擾作為一種治療途徑尤其是惡性腫瘤的治療具有巨大潛力。關(guān)于內(nèi)源性，HDL納米粒是完全可生物降解的，并且也無引起免疫反應(yīng)的相關(guān)報(bào)道。雖然STAT3可以在許多實(shí)體瘤里激活，但是它在正常組織中表達(dá)，并且參與許多正常細(xì)胞過程。此外， rHDL納米粒子的ζ電位使用電位粒度分析儀檢測 。CCACCUGGGCCAGUAUUAU 339。平均改變倍數(shù)已經(jīng)報(bào)道。 48小時(shí)后，處死小鼠，收集腫瘤和器官（腦，心臟，肺，肝，腎，脾）并冷凍。rHDL體內(nèi)研究將治療組每10只小鼠被隨機(jī)分配。Figure of rHDL nanoparticles. (A) Illustrations of rHDL nanoparticle position. (B) Electron micrograph of rHDLnanoparticles containing control siRNA. (C) Expression of SRB1 in human epithelial ovarian cancer (IHC). (D) mRNA expression of SRB1 in ovarian and colorectal cancer cell lines.在體內(nèi)rHDL納米粒的選擇性輸送 比起正常組織，考慮到SRB1受體在腫瘤細(xì)胞中的高度表達(dá)，我們接下來檢測用rHDL納米粒遞送siRNA 在體內(nèi)的有效性。E image shows tumor histologic diagnosis. The adjacent graph shows percent Alexa555positive cells. (B)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in chemosensitive (HeyA8 and SKOV3ip1) and chem