基于脂蛋白納米載體的小干擾rna靶向遞送方法研究畢業(yè)論文-全文預覽
【正文】 中證實使用r HDL納米粒靶向STAT3和FAK治療有效性。然后，脂類混合物（膽固醇[ C ] /膽固醇油酸[ CE ] /蛋黃卵磷脂[PC]，摩爾比的1:5::115 ）在氮氣流中干燥。載脂蛋白A I（ ），終體積用PBS調整到2ml 。此外， rHDL納米粒子的ζ電位使用電位粒度分析儀檢測 。得到的圖片有所增強，粒徑可通過Adobe ImageCS2 軟件檢測。簡單地說,HeyA8和SKOV3ip1細胞在添加15%%硫酸慶大霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。C，5% CO2/95%的孵箱中。CCACCUGGGCCAGUAUUAU 339。簡單地說， SKOV3ip1和HeyA8 ，在70 ％處匯合?！ ∥⑿蛄蟹治鲈赟KOV3細胞使用Illumina平臺得到cDNA微序列。聚合酶鏈反應分析反轉錄聚合酶連鎖反應(RTPCR)可以利用cDNA預先形成正常人體器官和癌癥細胞系。平均改變倍數已經報道。主要抗體通過抗鼠免疫球蛋白G和化學發(fā)光檢測試劑盒檢測。免疫組織化學新鮮冷凍部分由CD31染色(1:800稀釋），ki 67染色是在5μm厚的福爾馬林固定石蠟包埋標本上。TUNEL染色取新鮮冷凍的實驗組(SKOV3ip1模型)腫瘤組織部分，通過末端脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧尿苷三磷酸缺口尾部標記進行末端染色，再用1:10,000的Hoechst進行復染。 48小時后，處死小鼠，收集腫瘤和器官（腦，心臟，肺，肝，腎，脾）并冷凍。原位卵巢癌模型雌性裸鼠（ 10?12周齡）購自美國美國國家癌癥研究所。小鼠隨機飼養(yǎng)并在第7天后開始處理。4周后，解剖小鼠，收集腫瘤 體內沉默STAT3或FAK ? 。rHDL體內研究將治療組每10只小鼠被隨機分配。結果包含 RNAi 的rHDL納米粒的制備因為RNAi分子是高度離子化,主要是因為磷酸基團帶負電荷，我們設計 了一個新穎制劑是將siRNA偶聯(lián)到rHDL里。此外，含有siRNA納米粒是非常穩(wěn)定的。此外，我們檢測在人類正常器官的SRB1表達并用RTPCR分析乳腺癌、直腸癌、胰腺癌和卵巢癌細胞系的表達 (圖W1)。Figure of rHDL nanoparticles. (A) Illustrations of rHDL nanoparticle position. (B) Electron micrograph of rHDLnanoparticles containing control siRNA. (C) Expression of SRB1 in human epithelial ovarian cancer (IHC). (D) mRNA expression of SRB1 in ovarian and colorectal cancer cell lines.在體內rHDL納米粒的選擇性輸送 比起正常組織，考慮到SRB1受體在腫瘤細胞中的高度表達，我們接下來檢測用rHDL納米粒遞送siRNA 在體內的有效性。為了解決這個問題,，我們首先分析了用Alexa555標記siRNA / rHDL納米粒處理的小鼠器官(圖W2)。STAT3 siRNA的有效性首先在體外SKOV3細胞上測試(圖W3A)，與對照組siRNA相比，5μg 的STAT3 siRNA導致STAT3蛋白表達超過80%的減少。根據這個實驗。E image shows tumor histologic diagnosis. The adjacent graph shows percent Alexa555positive cells. (B)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in chemosensitive (HeyA8 and SKOV3ip1) and chemoresistant (HeyA8MDR) mouse models of ovarian carcinoma. *P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. (C)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in colorectal cancer model of liver metastases (HCT116). *P .05 pared with control siRNA/rHDL, **P .05 pared with STAT3 or oxaliplatin vivoefficacy of FAK siRNA/rHDL in the SKOV3ip1 ovarian cancer model.*P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. Error bars, SEMSTAT3或FAK基因沉默對腫瘤的生長和轉移的影響體內成功沉默 FAK 或STAT3基因后(圖W3B），我們接下來測試了這種是否用多烯紫杉醇化療藥方法的治療有效性。與對照組比較，STAT3 siRNA / rHDL和多烯紫杉醇的聯(lián)合治療使腫瘤重量減少的最多(92%，P )。正如預期，多烯紫杉醇對腫瘤的生長無顯著影響。我們在每一個治療組的動物的局部轉移頻率進行了分析。 STAT3 siRNA / rHDL單獨治療導致在腫瘤的重量減少79％ （ P ） 。為了評估rHDL納米粒的安全性，我們評估用rHDL納米粒處理小鼠的幾個參數（圖W5 ） 。FAK或多烯紫杉醇單藥治療可使腫瘤重量減少62%和74%(兩者P )。在SKOV3ip1卵巢癌模型中(圖3), STAT3基因沉默減少26%細胞增殖(P )，而多烯紫杉醇抑制30%腫瘤細胞增殖(P )。為了確定STAT3沉默對腫瘤相關血管生成的影響,我們從所有四個實驗組取新鮮冷凍腫瘤組織的樣品進行CD31染色實驗(圖3和W5)和檢測MVD。 眾所周知，STAT3被認為是增加細胞存活和抑制細胞凋亡。除此之外，在HeyA8MDR模型中，就多烯紫杉醇處理不影響細胞凋亡，對照組siRNA / rHDL相比，STAT3 siRNA / rHDL 或STAT3 siRNA / rHDL與多烯紫杉醇聯(lián)合治療可大幅增加(分別為61%和76%，兩者P )凋亡細胞(陽性活化型半胱天冬酶3 )(圖W6)Figure of rHDLincorporated STAT3 siRNA on tumor microenvironment. Tissues harvested after STAT3 siRNA/rHDL therapy were subjected to immunohistochemistry for markers of proliferation (Ki67), angiogenesis (CD 31), and apoptosis (TUNEL). For the TUNEL stain, five random fields per slide were e
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