【文章內(nèi)容簡介】 性對照組2陰性對照組3稀釋劑對照組菌回收率223試驗(yàn)組的菌回收率123結(jié)果判定備注：******驗(yàn)證一批平行三次，批號：******結(jié)論：按照《******微生物限度檢查法驗(yàn)證方案》檢驗(yàn)，結(jié)果實(shí)驗(yàn)日期： 報(bào)告日期： 檢 驗(yàn) 人： 復(fù) 核 人： 質(zhì)量部QA: 統(tǒng)計(jì)日期： 附表2：控制菌檢查方法的驗(yàn)證結(jié)果品名： 批號： 試驗(yàn)次數(shù)項(xiàng)目BL增菌液MUG靛基質(zhì)檢查結(jié)果結(jié)果判定第一次供試品　　　　　　試驗(yàn)組　　　　陽性對照陰性對照　　　　第二次供試品　　　　　　試驗(yàn)組　　　　陽性對照陰性對照　　　　第三次供試品　　　　　　試驗(yàn)組　　　　陽性對照陰性對照　　　　檢 驗(yàn) 人： 復(fù) 核 人： 質(zhì)量部QA: 統(tǒng)計(jì)日期： 附表3：按確定的驗(yàn)證方法檢驗(yàn)三批產(chǎn)品微生物限度檢查結(jié)果 品名： 項(xiàng)目 細(xì)菌數(shù)霉菌和酵母菌數(shù)大腸埃希菌批號　cfu/gcfu/g　　cfu/gcfu/g　　cfu/gcfu/g　檢 驗(yàn) 人： 復(fù) 核 人： 質(zhì)量部QA: 統(tǒng)計(jì)日期： 微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案 編碼：表一、驗(yàn)證方案的起草與批準(zhǔn) 起草人： 起草時期： 年 月 日： 部門審核人日 期生產(chǎn)部生產(chǎn)車間QCQA 批準(zhǔn)人： 批準(zhǔn)日期：二、驗(yàn)證方案為確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的細(xì)菌、霉菌、酵母菌數(shù)的測定，特制定本方案。驗(yàn)證過程應(yīng)嚴(yán)格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行，若因特殊原因確需要變更時，應(yīng)報(bào)驗(yàn)證委員會批準(zhǔn)。通過比較試驗(yàn)4組中試驗(yàn)菌的恢復(fù)生長結(jié)果來評價整個檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性、有效性和重現(xiàn)性。：進(jìn)行微生物限度檢查方法驗(yàn)證前，所有的平皿和稀釋劑都應(yīng)該嚴(yán)格按照相關(guān)的滅菌程序消毒，以確保其對試驗(yàn)的結(jié)果沒有影響。試驗(yàn)菌應(yīng)包括G—、G+、酵母菌和霉菌類微生物以基本覆蓋樣品中可能存在的微生物。：用3個不同批號產(chǎn)品微生物限度檢測方法進(jìn)行平行試驗(yàn)，通過計(jì)算回收率來判斷限度檢查方法是否對產(chǎn)品有影響。：用標(biāo)準(zhǔn)菌株評價方法“ ”的微生物限度檢查對檢品中微生物的抑制性，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)顯示3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對照組的菌回收率應(yīng)不小于70%，試驗(yàn)組回收率也不低于70%。：恒溫培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、電子天平、高壓蒸汽滅菌器、凈化工作臺。：操作間應(yīng)該安裝空氣除菌過濾層裝置。環(huán)境潔凈度不應(yīng)低于10000級，局部潔凈度為100級（或放置同等級凈化工作臺）。操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應(yīng)該保持對環(huán)境形成正壓。： 批號： 批號： 批號： ：培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基批號配制日期有效期至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：以上經(jīng)115℃高壓蒸汽滅菌30min。 實(shí)驗(yàn)菌株的來源： 菌株名稱內(nèi)控編號大腸埃希菌CMCC(B) 44102Ec金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26003Sa枯草芽孢桿菌CMCC(B) 63501Bs白色念珠球菌CMCC(F) 98001Ca黑曲霉CMCC(F) 98003An編號由菌名首字母—傳代代數(shù)—制備日期組成。：無菌薄膜過濾器：（）、無菌移液管（5ml）將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌接種至10ml的無菌營養(yǎng)肉湯中在30～35℃下培養(yǎng)18～24小時，將白色念珠菌接種至改良馬丁液體培養(yǎng)基中，在23～28℃下培養(yǎng)24～48小時。將黑曲霉接種至改良馬丁液體培養(yǎng)基中，在23～28℃下培養(yǎng)5～7天。%的無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌落數(shù)為50～100cfu的菌懸液。供試液的制備：取樣品10g（ml），振搖使分散均勻□，或用勻漿儀混勻□，制成1：10均勻的供試液。A樣品試驗(yàn)組取1：10供試品（相當(dāng)于1g或1ml供試品）1ml，及各50～100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌傾注肉湯瓊脂培養(yǎng)基；白色念珠菌、黑曲霉傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。B菌液組取上述制備菌液各1ml注入平皿中，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌加入肉湯瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌、黑曲霉加入玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。C供試品對照組取上述1：10供試液1ml注入平皿中，分別傾注肉湯瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。D稀釋劑對照組～100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌傾注肉湯瓊脂培養(yǎng)基；白色念珠菌、黑曲霉傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。 將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌在30～35℃下培養(yǎng)48小時，將白色念珠菌、黑曲霉在23～28℃下培養(yǎng)72小時，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。： 批號： 菌種名稱產(chǎn)品試驗(yàn)組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉： 批號： 菌種名稱供試品對照組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉： 批號： 菌種名稱稀釋劑對照組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉： 批號： 菌種名稱菌液組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌種名稱批號菌落計(jì)數(shù)（cfu/皿）回收率稀釋劑對照組菌液組大腸埃希菌平均值金黃色葡萄球菌平均值枯草芽孢桿菌平均值白色念珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)247。菌液組的平均菌落數(shù)100%。菌種名稱批號菌落計(jì)數(shù)（cfu/皿）回收率試驗(yàn)組供試品對照組菌液組大腸埃希菌平均值金黃色葡萄球菌平均值枯草芽孢桿菌平均值白色念珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)－供試品對照組的平均菌落數(shù)）247。菌液組的平均菌落數(shù)100%。：，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率分別為 %、 %、 %、 %、 %。 %、 %、 %、 %、 %。 以上驗(yàn)證結(jié)果證明，本品 采用上述方法進(jìn)行微生物限度檢查。檢驗(yàn)人： 復(fù)核人：質(zhì)控部負(fù)責(zé)各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果記錄，驗(yàn)證小組根據(jù)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評價，起草驗(yàn)證報(bào)告，報(bào)驗(yàn)證委員會。驗(yàn)證委員會負(fù)責(zé)對驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評審，做出驗(yàn)證結(jié)論，發(fā)放驗(yàn)證證書。對驗(yàn)證結(jié)果的評審應(yīng)包括：驗(yàn)證試驗(yàn)是否有遺漏；驗(yàn)證實(shí)施過程中對驗(yàn)證方案有無修改，修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準(zhǔn)；驗(yàn)證記錄是否完整；驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求，偏差及對偏差的說明是否合理，是否需進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)。驗(yàn)證報(bào)告由驗(yàn)證組長審核后，報(bào)驗(yàn)證總負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，并簽發(fā)驗(yàn)證證書。驗(yàn)證報(bào)告 年 月 日至 年 月 日，驗(yàn)證小組根據(jù)批準(zhǔn)的微生物限度檢查方法驗(yàn)證文件對微生物限度檢查法進(jìn)行了相關(guān)的一系列驗(yàn)證工作，達(dá)到了預(yù)期效果，滋將有關(guān)事項(xiàng)說明如下：驗(yàn)證方案在實(shí)施過程中未做修改。驗(yàn)證方案各項(xiàng)性能指標(biāo)在驗(yàn)證中未作變動，誤差在允許范圍內(nèi)。驗(yàn)證過程中結(jié)果符合規(guī)定要求，記錄完整屬實(shí)。驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)計(jì)要求和GMP原則要求，可以投入使用。 片組分或檢驗(yàn)條件改變時須重新驗(yàn)證。以上情況，請驗(yàn)證委員會審批！驗(yàn)證小組：年 月 日試驗(yàn)報(bào)告審批表驗(yàn)證名稱微生物限度檢查方法驗(yàn)證編號SOPV028驗(yàn)證內(nèi)容審閱會簽質(zhì)量部審核人： 年 月 日驗(yàn)證委員會意見：批準(zhǔn)人： 年 月 日驗(yàn)證證書 驗(yàn)證證書編號： 驗(yàn) 證 名 稱： 有 效 期： 上述方法已按驗(yàn)證方案進(jìn)行驗(yàn)證，各項(xiàng)驗(yàn)證結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)要求，批準(zhǔn)按此方法進(jìn)行本品的控制菌檢查。特發(fā)此證。 驗(yàn)證總負(fù)責(zé)人： 年 月 日 備注：微生物限度檢查檢驗(yàn)方法驗(yàn)證報(bào)告驗(yàn) 證 情 況驗(yàn)證概述我公司于年月日～年月日對微生物限度檢查方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，在驗(yàn)證過程中分別取用了大腸埃希菌 [CMCC(B)4410金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌 [CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]菌種，對微生物限度的計(jì)數(shù)方法以及控制菌檢查方法進(jìn)行了驗(yàn)證。為保證驗(yàn)證的準(zhǔn)確性，我們同時對其驗(yàn)證過程中使用的純化水、無菌生理鹽水以及設(shè)備進(jìn)行了控制，以保證驗(yàn)證的準(zhǔn)確性。按照驗(yàn)證方案中的方法進(jìn)行驗(yàn)證，以證明其微生物檢驗(yàn)方法是可靠的，使其產(chǎn)品的檢驗(yàn)更具有說服力。驗(yàn)證時間驗(yàn)證人員負(fù)責(zé)驗(yàn)證部門質(zhì)量部人員參加驗(yàn)證部門生產(chǎn)部人員驗(yàn)證結(jié)果見“7檢測結(jié)果”再驗(yàn)證時間年月日驗(yàn)證結(jié)論本次驗(yàn)證的驗(yàn)證項(xiàng)目符合方案規(guī)定，驗(yàn)證程序合理，驗(yàn)證數(shù)據(jù)可靠，驗(yàn)證文件可行，驗(yàn)證的數(shù)據(jù)結(jié)果均符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，證明在檢驗(yàn)產(chǎn)品微生物限度時采用該種檢驗(yàn)方法能夠符合其檢驗(yàn)及標(biāo)準(zhǔn)的要求。姓名： 年 月