【文章內(nèi)容簡介】 8。 采樣點的布置還可根據(jù)需要在生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)增加采樣點。178。 采樣注意事項采樣管口宜向上。布置采樣點時，應(yīng)避開回風(fēng)口。采樣時，測試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)。178。 采樣點的平均粒子濃度 式中： A———某一采樣點的平均粒子濃度，粒/m3； Ci———某一采樣點的粒子濃度（i=1，2，…，n），粒/m3； N———某一采樣點上的采樣次數(shù)，次。平均值的均值 式中：M———平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒/m3； Ai———某一采樣點的平均粒子濃度（i=1，2，…，L），粒/m3； L———某一潔凈室（區(qū)）內(nèi)的總采樣點數(shù)，個。178。 計算采樣點平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差(S)S=√175。[（MA1）2 +(MA2)2 +…]/（L1），粒/m3 計算95%置信上限(UCL)95%置信上限(UCL)=M+ (S/√175。L) ，粒/m3L：采樣點的總數(shù)t0。95：95%置信上限的t 分布系數(shù)，見下表，采樣點數(shù)L23456t需要注意的是，當(dāng)采樣點數(shù)只有1 個或多于9 個時，則不用計算95%置信上限。潔凈室達到規(guī)定的潔凈級別的判定條件：178。 各采樣點測得的粒子濃度平均值不超過相應(yīng)潔凈級別規(guī)定的限度；178。 95%置信上限不超過相應(yīng)潔凈級別規(guī)定的限度。 測定結(jié)果見附表36。（靜態(tài)） 儀器：JYQⅡ浮游菌采樣器（采樣流量100L/min）。 浮游菌檢測培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備培養(yǎng)皿的直徑為90mm15 mm的凹碟，其中所使用的培養(yǎng)基為大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）。178。 靜態(tài)測試。測試報告中應(yīng)標(biāo)明測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)，室內(nèi)測試人員不得多于2人。178。 測試時間——靜態(tài)測試，空調(diào)凈化系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始。178。 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)基平皿，開動儀器使真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min。然后放入培養(yǎng)基平皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采集器。設(shè)定好需采集的升數(shù)和延遲的時間參數(shù)后，置采樣口于采樣點后（一般A級潔凈區(qū)，可在離藥物敞口處30cm處設(shè)測點），按“YES”，儀器開始抽空氣采樣。178。 A級、B級采樣量每個點不少于1000L。每個點采樣量為100L/min10min1次。178。 C級采樣量每個點500L，每個點采樣量為100L/min5min1次。178。 D級采樣量每個點100L，每個點采樣量為100L/min1min1次。178。 取樣點選取根據(jù)房間的面積，具體參照N≥，N表示取樣點的數(shù)量，S表示檢測房間的面積。具體采樣點位置和數(shù)量見下表。房間名稱潔凈等級面積（㎡）取樣點數(shù)量（N）YB1洗衣、整衣間D級3男一更D級3緩沖間D級2男二更D級4女一更D級72緩沖間D級1女二更D級3緩沖D級3YB1內(nèi)走廊D級9YB1中控室D級3YB1暫存間D級7YB1器具存放間D級4YB1器具清洗間D級4YB1潔具存放間D級2YB1潔具清洗間D級2YB1結(jié)晶離心間D級7YB1離心間緩沖D級1YB1濕品暫存間D級3YB1干燥間D級6YB1過篩間D級3YB1混合間D級6YB1內(nèi)包間D級6YB1氣閘間D級1YB1內(nèi)包材暫存間D級1NB1洗衣、整衣間D級3NB1中控室D級2NB1暫存間D級7NB1器具存放間D級4NB1器具清洗間D級4NB1潔具存放間D級2NB1潔具清洗間D級2NB1中和離心間D級627NB1濕品暫存間D級4NB1干燥間D級6NB1篩粉間D級143NB1混合間D級6NB1內(nèi)包間D級6NB1氣閘間D級1NB1內(nèi)包材暫存間D級1NB1內(nèi)走廊D級9NB1防爆區(qū)緩沖D級1中和間D級637結(jié)晶間緩沖D級1結(jié)晶間D級577178。 培養(yǎng)——全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?！?0～35℃培養(yǎng)，時間不少于2天。——每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。178。 菌落計數(shù)——用肉眼直接計數(shù)，然后用5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏?！襞囵B(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)178。 注意事項——測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。——采取一切措施防止人為對樣本的污染。——對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄?！捎诩毦N類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡鑒別?！蓸忧皯?yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。178。 采樣點數(shù)量及其布置——最少采樣點數(shù)如下表最少采樣點數(shù)目：面積（㎡）潔凈度級別A 、B級C級D級102322≥1020422≥2040822≥401001642≥10020040103注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面積，對于非單向流潔凈室，指的是房間面積。178。 采樣點的位置—— m左右（略高于工作面）；——送風(fēng)口測點位置離開送風(fēng)面30ｃｍ左右；——可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。采樣點布置的規(guī)則見下圖（圖4）。178。 最小采樣量浮游菌每次最小采樣量見下表。最小采樣量：潔凈度級別采樣量（L／次）D級100178。 采樣注意事項——對于單向流潔凈室或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流潔凈室，采樣口向上；——布置采樣點時，至少應(yīng)盡量避開塵埃較集中的回風(fēng)口；——采樣時，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動；——應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染；——培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作，但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿（TSA）一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。178。 記錄測試報告應(yīng)包含以下內(nèi)容：——測試者的名稱和地址、測試日期；——測試依據(jù)；——被測潔凈區(qū)的平面位置；——有關(guān)測試儀器及其測試方法的描述：包括測試環(huán)境條件，采樣點數(shù)目以及布置圖，測試次數(shù)，采樣流量，還應(yīng)記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量及位置，現(xiàn)場運轉(zhuǎn)設(shè)備和數(shù)量、位置。178。 結(jié)果計算——用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)?！總€測點的浮游菌平均濃度的計算，見下式：浮游菌平均濃度（個／ｍ3）＝菌落數(shù)／采樣量測定結(jié)果見附件37。（靜態(tài)）本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。178。 高壓消毒鍋：使用時應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程進行。178。 恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。178。 一般采用φ90mm15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。178。 使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌30min。：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）。178。 將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。178。 待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2～8℃的環(huán)境中存放。178。 采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。178。 培養(yǎng)——全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?！?0～35℃培養(yǎng)，時間不少于2天?！颗囵B(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，可每區(qū)域選定3只培養(yǎng)皿作對照試驗，與采樣皿同時操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。178。 菌落計數(shù)——用肉眼直接計數(shù)，然后用5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏?！襞囵B(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。178。 注意事項——測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性?！扇∫磺写胧┓乐谷藶閷颖镜奈廴??！獙ε囵B(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄?！捎诩毦N類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡鑒別?！蓸忧皯?yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。178。 測試狀態(tài)——靜態(tài)測試，室內(nèi)測試人員不得多于2人。沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)?！两稻鷾y試前，被測試潔凈區(qū)已經(jīng)過消毒。178。 測試時間——測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。178。 采樣點數(shù)目——最少采樣點數(shù)目：沉降菌的最少采樣點數(shù)可按下表確定。在滿足最少測點數(shù)的同時，不宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見下表。最少采樣點數(shù)目：面積（㎡）潔凈度級別A 、B級C級D級102322≥1020422≥2040822≥401001642≥10020040103注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面積，對于非單向流潔凈室，指的是房間面積。178。 采樣點的布置——～（略高于工作面）。 ——可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點，采樣點的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏（如圖3）。 記錄：測試報告中應(yīng)記錄測試者的名稱和地址測試日期，測試依據(jù)，被測潔凈室的平面位置，有關(guān)測試儀器及其測試方法描述，測試結(jié)果。單個沉降碟的暴露時間可以少于4 小時，同一位置可使用多個沉降碟連續(xù)進行監(jiān)測并累積計數(shù)。 結(jié)果評定178。 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。178。 潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。178。 若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結(jié)果必須合格。 測定結(jié)果見附件38。對于驗證方案執(zhí)行過程中，任何與方案內(nèi)容不符的項目均應(yīng)記錄，針對項目對空調(diào)凈化系統(tǒng)影響程度，組織相關(guān)人員進行偏差調(diào)查，并根據(jù)調(diào)查結(jié)果做出繼續(xù)或終止方案執(zhí)行的決定。偏差應(yīng)根據(jù)調(diào)查結(jié)論采取糾偏行動，經(jīng)評估合格后，方案才能繼續(xù)執(zhí)行。.4 運行確認結(jié)論對硝酸硫胺及VB1精制區(qū)HVAC和潔凈室運行確認的各項內(nèi)容和指標(biāo)進行評價和總結(jié)。8 硝酸硫胺及VB1精制區(qū)HVAC、潔凈室性能確認 確認各操作間符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》無菌藥品附錄中潔凈區(qū)潔凈度級別。確認空氣凈化系統(tǒng)能夠連續(xù)、穩(wěn)定地使?jié)崈魠^(qū)的潔凈度符合設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)及生產(chǎn)工藝的要求。 驗證相關(guān)操作規(guī)程的可操作性，并提出修改建議。 建議潔凈區(qū)潔凈度監(jiān)測周期。 整理使用手冊，操作規(guī)程等技術(shù)資料，歸檔保存。 （SOP）的確認確認空氣凈化系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）草案（文件編號：SOPFM00700）已經(jīng)起草，批準(zhǔn)，通過驗證，確認空氣凈化系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序具有可操作性，真實性及完整性，符合系統(tǒng)設(shè)計要求。確認結(jié)果見附件39。 取樣計劃 對HVAC系統(tǒng)進行連續(xù)3次的靜態(tài)測試，3次試驗分別在3天內(nèi)完成；然后進行連續(xù)2周的模擬動態(tài)監(jiān)測，每周7天。具體取樣計劃見附表：檢測項目檢測頻率靜態(tài)塵埃粒子靜態(tài)測試三次，三天內(nèi)完成溫濕度控制靜態(tài)測試三次，三天內(nèi)完成(每日監(jiān)測，每2小時讀數(shù)記錄一次)壓差、照度靜態(tài)測試三次，三天內(nèi)完成(每日監(jiān)測，每2小時讀數(shù)記錄一次)浮游菌靜態(tài)測試三次，三天內(nèi)完成（模擬動態(tài)后測試）沉降菌靜態(tài)測試三次，三天內(nèi)完成（模擬動態(tài)后測試）模擬動態(tài)浮游菌連續(xù)二周的模擬動態(tài)監(jiān)測，每個周期第一天測一次沉降菌連續(xù)二周的模擬動態(tài)監(jiān)測，每個周期第一天測一次表面微生物連續(xù)二周的模擬動態(tài)監(jiān)測，每個周期第一天測一次溫濕度控制每日監(jiān)測，每2小時讀數(shù)記錄一次壓差、照度每日監(jiān)測，每2小時讀數(shù)記錄一次（靜態(tài)）178。 靜態(tài)測試“靜態(tài)”就是指所有生產(chǎn)設(shè)備均已安裝就緒，但沒有生產(chǎn)活動且無操作人員在場的狀態(tài)。在進行“靜態(tài)”監(jiān)測時，需注意應(yīng)在生產(chǎn)操作全部結(jié)束，操作人員撤離生產(chǎn)現(xiàn)場并經(jīng)15 ～ 20分鐘自凈后進行監(jiān)測。 測試時間測試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始，具體嚴格遵循不同狀態(tài)的測試要求。采樣點數(shù)目需通過如下公式計算得來：NL= √175。ANL：最少采樣點數(shù)目（四舍五入取整）A：潔凈區(qū)的面積，以m2 計(單向流時，該面積可視為氣流截面的面積)具體數(shù)值見下表：潔凈區(qū)面積／m2采樣點數(shù)目＜1013102034204046401006101002001014200400142040010002032100020003245200045關(guān)于采樣量的設(shè)置，通過如下公式計