【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用 （ 2）單抗藥物具有更高的療效 （ 3）單抗藥物對(duì)腫瘤相關(guān)靶點(diǎn)的特異性作用 其研究重點(diǎn)主要集中在將抗體與化學(xué)藥物、酶、放射性核素、毒素和生物誘導(dǎo)劑等耦聯(lián)后直接殺傷腫瘤或者利用抗體促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤血管生成等方面。目前，國(guó)際上與腫瘤治療相關(guān)的抗體研究主要集中在將抗體與耦聯(lián)物作用后直接殺傷腫瘤細(xì)胞，利用抗體促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤血管生成等方面。 單克隆抗體藥物 代表藥物：曲妥珠單抗（ trastuzumab， Herceptin ） Trastuzumab為靶向結(jié)合 HER2的人 IgG1類單抗， HER2為酪氨酸激酶受體，在約 20%～ 25%的進(jìn)展期乳腺癌患者過表達(dá)。HER2分子具有以下的特點(diǎn)，因此成為乳腺癌治療的靶分子： ① HER2的表達(dá)水平與乳腺癌的發(fā)病機(jī)理及預(yù)后相關(guān)； ②腫瘤的 HER2表達(dá)水平及基因拷貝數(shù)遠(yuǎn)高于正常組織，有效的減輕了 HER2靶向治療藥物的毒性； ③ HER2表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞比例很高，而且在腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)，因此在患者體內(nèi)可以靶向大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞； ④ HER2在原發(fā)腫瘤及轉(zhuǎn)移灶均有表達(dá)，因此 HER2靶向治療對(duì)原發(fā)及轉(zhuǎn)移病灶均有效。 曲妥珠單抗（ trastuzumab）的作用機(jī)制： ①抑制受體信號(hào)傳導(dǎo)。 HER2可以活化多種信號(hào)傳導(dǎo)通路，包括 PI3K、MAPK等。 Trastuzumab減少了這些信號(hào)通路的傳導(dǎo)，將細(xì)胞阻滯于調(diào)定點(diǎn)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。受體信號(hào)傳導(dǎo)的降低是由于trastuzumab介導(dǎo)的 HER2受體內(nèi)化及降解。 ②通過調(diào)節(jié) p27kipl阻滯細(xì)胞于 G1調(diào)定點(diǎn)。 Trastuzumab處理的細(xì)胞被阻滯于 G1調(diào)定點(diǎn)，細(xì)胞增殖減少。細(xì)胞阻滯于 G1調(diào)定點(diǎn)與細(xì)胞周期依賴的激酶抑制蛋白 p27kipl相關(guān)。 ③誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。體內(nèi)研究表明 trastuzumab可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡，凋亡的發(fā)生與 Ki67的表達(dá)無關(guān)。 ④抑制血管形成。高表達(dá) HER2的腫瘤細(xì)胞新生血管及 VEGF的表達(dá)顯著增加。體內(nèi)研究結(jié)果顯示 trastuzumab處理后，乳腺癌腫瘤體積減小，微血管密度降低；體外研究表明 trastuzumab處理后，內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力下降。 ⑤ 抑制 DNA修復(fù)。體外研究顯示可與許多化療藥物產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。Trastuzumab或聯(lián)合化療藥物促進(jìn) DNA損傷，并抑制 DNA的修復(fù)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。 抗腫瘤新藥發(fā)現(xiàn) Mathematical model Cell Biology Target selection Drug design (Pre)clinical testing How many drug targets are there? ? ~8,000 targets of pharmacological interest, of which nearly 5,000 could be potentially hit by traditional drug substances, nearly 2,400 by antibodies and ~800 by protein pharmaceuticals. Drug Target: Enzymes Drug Target: Enzymes II Drug Target: Enzymes III Drug Target: Enzymes III Drug Target: Receptors I Drug Target: Receptors II Drug Target: Receptors III Drug Target: Receptors III Drug Target: Ion channels Drug Target: Transport proteins Drug Target: DNA/RNA and the ribosome Drug Target: Targets of monoclonal antibodies Drug Target: Various physicochemical mechanisms 抗腫瘤藥物的篩選和評(píng)價(jià) 抗腫瘤藥的臨床前藥理研究包括藥效學(xué)和毒性研究?jī)刹糠? 抗腫瘤藥物藥效學(xué)需研究?jī)?nèi)容： 體外抗腫瘤試驗(yàn) 體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn) 評(píng)價(jià)藥物的抗癌活性時(shí)，以體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果為主，同時(shí)參考體外試驗(yàn)結(jié)果以做出正確的結(jié)論。 體外抗腫瘤活性試驗(yàn) 目的： ? 對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選； ? 了解候選化合物的抗瘤譜； ? 為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)提供參考，如劑量范圍、腫瘤類別等 。 體外抗腫瘤活性試驗(yàn)常用方法 體外試驗(yàn)常用方法有： ? 染料排斥法 ? 四氮唑鹽還原法 ? 阿拉馬藍(lán)法 ? 磺酰羅丹明染色法 ? 集落形成法 ? 生長(zhǎng)曲線測(cè)定法。 藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為 4872 小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁 24 小時(shí)后再給藥。試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗腫瘤藥，陰性對(duì)照為溶媒對(duì)照 體外抗腫瘤活性試驗(yàn)常用方法 ? 染料排斥法（ dye exclusion assay） ? 試驗(yàn)原理：活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑等的能力，而死細(xì)胞由于膜完整性的破壞，可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料，一定時(shí)間后，對(duì)著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，即可算出被殺死的細(xì)胞比例。 ? 方法要點(diǎn)：向一定容積的待檢細(xì)胞懸液加入定量的某種染液，最常用的是 %臺(tái)盼藍(lán)液，混勻，室溫染色 515min，將已染色的細(xì)胞懸液滴加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，直接在光鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)。 ? 觀測(cè)指標(biāo)：按（未染色細(xì)胞數(shù) /細(xì)胞總數(shù)） X100%計(jì)算活細(xì)胞率，對(duì)照組活細(xì)胞率應(yīng)在 90%以上。根據(jù)活細(xì)胞率計(jì)算受試樣品的半數(shù)致死劑量（ IC50）作為藥物抗腫瘤活性的指標(biāo)。 體外抗腫瘤活性試驗(yàn)常用方法 ? 阿拉馬藍(lán)法（ alamar blue assay） ? 試驗(yàn)原理：非熒光性藍(lán)色底物阿拉