【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 種 檢測(cè)方法 紙片擴(kuò)散法（ KB 法） 肉湯稀釋法 瓊脂稀釋法 瓊脂篩選法 濃度梯度法 自動(dòng)化藥敏檢測(cè) DNA 探針雜交 PCR 技術(shù) 淋病的 確診應(yīng)如何進(jìn)行微生物學(xué)檢查 答：先培養(yǎng) :即疑為淋病奈瑟菌感染的標(biāo)本接種于選擇培養(yǎng)基如 NYC、 MTM、 ML，立即置于 5％ CO2 氣體條件下 35~37℃孵育，培養(yǎng)基需觀察 72 小時(shí)后無菌生長(zhǎng)可報(bào)告為陰性，每隔 24 小時(shí)觀察，淋病奈瑟菌的菌落呈灰褐色、光滑、半透明呈露滴狀凸起的菌落。 然后進(jìn)行革蘭染色鏡檢 :將菌落涂片，革蘭染色后顯微鏡下見革蘭陰性雙球菌，再進(jìn)行氧化酶和觸酶試驗(yàn)，葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)陽性，其他糖類試驗(yàn)陰性于是可確診為淋病奈瑟菌。 2鏈球菌是如何分類和鑒定的？ 鏈球菌的分類：根據(jù)溶血現(xiàn)象分類：甲型溶 血性鏈球菌、乙型、不出現(xiàn)溶血的丙型。 根據(jù) Lancefield 抗血清分型將分為 ABCD… ..等 20 個(gè)群。對(duì)人類治病主要是 A 群。 鑒定：羊血脂平板識(shí)別溶血特性，涂片格蘭染色，鏡檢，如果為 G+，進(jìn)一步做觸酶試驗(yàn)， %的 NaCL 不生長(zhǎng)著，可確定為鏈球菌細(xì)菌。 2肺炎鏈球菌致病因素及鑒定要點(diǎn)，如何區(qū)分肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌？ 肺炎鏈球菌的致病因素：肺炎鏈球菌的莢膜在細(xì)菌的侵襲力上起著重要作用；肺炎鏈球菌的溶血素、神經(jīng)氨酸酶也是其主要致病物質(zhì) 鑒定要點(diǎn)：發(fā)酵葡萄糖和多種糖，不產(chǎn) 氣，乳酸為代謝終末產(chǎn)物，觸酶陰性，膽汁溶菌試驗(yàn)和 Optochin 陽性。 a 溶血性鏈球菌。莢膜多糖使菌落呈粘液狀；可產(chǎn)生自溶酶，培養(yǎng) 48h 后出現(xiàn)“臍窩狀”菌落。對(duì)青霉素耐藥甚至多重耐藥。 如何區(qū)分肺炎鏈球菌和草綠色鏈球菌：肺炎鏈球菌： Optochin 為 S，膽汁溶菌試驗(yàn)陽性。草綠色鏈球菌： Optochin 為 R，膽汁溶菌試驗(yàn)陰性。 2腸桿菌科細(xì)菌有哪些共同的生物學(xué)特性？如何區(qū)分腸桿菌科細(xì)菌與其他革蘭陰性桿菌？ 答： 共同的生物學(xué)特性： 1. 形態(tài)與染色： G –桿菌，多數(shù)有周鞭毛、有莢膜或微莢膜，致病菌株多數(shù)有菌毛 ，均無芽胞，多數(shù)有動(dòng)力。 培養(yǎng)：需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普特培養(yǎng)基上和 MAC 上生長(zhǎng)良好。 生化反應(yīng)： 氧化酶－；發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）；觸酶＋；硝酸鹽還原試驗(yàn)＋ 發(fā)酵多種糖類，多數(shù)能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ★利用乳糖發(fā)酵試驗(yàn)初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌： 腸道致病菌→多數(shù)不發(fā)酵乳糖 腸道非致病菌→多數(shù)發(fā)酵乳糖 抗原構(gòu)造復(fù)雜：鞭毛抗原（ H）、 K 或 Vi 抗原、菌體抗原（ O） 抵抗力不強(qiáng)，加熱 60℃ 30min 即被殺死，不耐干燥，對(duì)一般化學(xué)消毒劑如漂白粉、酚、甲醛等均敏感。對(duì)低溫有耐受 力，能耐膽鹽，并在一定程度上能抵抗染料的抑菌作用。 易變異：通過接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、溶源性轉(zhuǎn)換引起耐藥性變異、毒力性變異、生化反應(yīng)性變異 臨床意義： ☆致病物質(zhì)：菌毛、表面抗原、內(nèi)毒素、腸毒素 ☆傳染途徑：腸道傳染、腸道外傳染 ☆所致疾病：○腸道致病菌引起腸道傳染?。?xì)菌性痢疾、傷寒等） ○條件致病菌：是醫(yī)院感染的主要病原菌 腸桿菌科細(xì)菌與其他革蘭陰性桿菌區(qū)分 腸桿菌科細(xì)菌與其它 Gb 鑒定要點(diǎn) : 腸桿菌科 弧菌科 非發(fā)酵菌 O/F（葡萄糖） F F O/ 氧化酶 + + 形態(tài) 桿狀 弧形 桿狀 鞭毛 周毛或無 單毛 單、叢、周或無 2哪些是主要引起人類腸道感染的腸桿菌科細(xì)菌？ 埃希菌屬，志賀菌屬，沙門菌屬，耶爾森菌屬。 2如何進(jìn)行腸桿菌科細(xì)菌的微生物學(xué)檢驗(yàn)？ 答 :尿液標(biāo)本 1 首先是直接圖片染色 ,給出初步報(bào)告 2 接種在 BAP 和 MAC 上 ,35℃培育箱中培育 18～ 24 小時(shí) 3 培育好后 ,做涂片染色 ,和氧化酶實(shí)驗(yàn) .然后轉(zhuǎn)種到 KIA和 MIU 上以及 O/F,37℃培育 18～ 24 小時(shí) . 4 然后觀察結(jié)果，全面生化鑒定和血清學(xué)分型 5 藥敏試驗(yàn) 注 :1 血清和腦脊液標(biāo)本需要先增菌 ,然后做 1～ 4 步 2 糞便嘔吐物的分離培養(yǎng)是在 (SS/HE/XLD和 MAC/EMB/中國(guó)藍(lán) )上邊進(jìn)行 ,然后同尿標(biāo)本 以上實(shí)驗(yàn)步驟為腸桿科菌屬的檢驗(yàn)程序 報(bào)告依據(jù) : ⑴ 革蘭陰性無芽孢桿菌 ⑵ O/F 為發(fā)酵型 ⑶ 吲哚 /甲基紅 /VP/枸櫞酸鹽 (IMVC) ⑷ MAC 上面的菌落 ⑸ KIA 實(shí)驗(yàn)的結(jié)果 腸桿菌的定科主要依靠 O/F 實(shí)驗(yàn)和氧化酶實(shí)驗(yàn)，以及菌的形態(tài)和有無鞭毛（有鞭毛的細(xì)菌才具有致病性）來定。 屬種的鑒定可以用自動(dòng)儀和商品鑒定盒來定。 手工操作結(jié)果判定各種屬特點(diǎn)： 大腸埃希氏菌 ：在選擇性平板上課發(fā)酵如糖，形成有色菌落： EMB 上市粉紅色有金屬光澤； MAC 上粉紅或紅色； HE 上中度抑制，菌落呈橙紅色或橘紅色； SS 上受抑制，菌落呈粉紅色或者中間粉紅色，周圍無色； XLD 上市不透明的黃色。 KIA 上為 AA+,(上下產(chǎn)酸產(chǎn)氣， H2S 陰性 )MIU（動(dòng)力 /吲哚 /尿素） ++. IMVC++ 沙門菌屬 ： KIA 結(jié)果可能為葡萄糖分解陽性，乳糖分解陰性，有的產(chǎn)氣，有點(diǎn)不產(chǎn)氣，有的 H2S 陽性 有的陰性。 MIU+； IMVC:+或者 ++。沙門菌屬的血清學(xué)鑒定中， H 血清分型如果第二相不凝，可能是位相誘導(dǎo) . 志賀菌屬 ：無鞭毛，在增菌培養(yǎng)是在 GN 肉湯上， 37℃培養(yǎng) 4 到 6 小時(shí)即可。 KIA 上，產(chǎn)堿 /產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣、 H2S 陰性； MIU(+/),IMVC上（ +/） +。血清定型原則是先多價(jià)，后單價(jià)，需對(duì)照。 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 ：糞便標(biāo)本在增菌時(shí)采用冷增菌培養(yǎng)， 4～ 5℃培養(yǎng) 2 到 3 周。 25℃動(dòng)力陽性， 37℃動(dòng)力陰性。尿素陽性 克雷伯菌屬 ：對(duì)氨芐西林天然耐藥，對(duì)頭孢容易耐藥。 腸桿菌屬 ： IMVC 結(jié)果與大腸埃希氏菌屬相反，為 ++,動(dòng)力和鳥氨酸均陰性。 變形桿菌屬 ：周身鞭毛， H2S 陽性，同種間的鑒定，普通變形桿吲哚陽性，普通變形桿與豪氏主要依靠七葉苷和水楊苷實(shí)驗(yàn)，前者兩項(xiàng)為陽性，后者為陰性，奇異變形桿的特點(diǎn)是鳥氨酸陽性，產(chǎn)黏變形桿是木糖發(fā)酵陰性，潘氏變形桿是氯霉素耐藥。 2變形桿菌、 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 鑒定要點(diǎn) 變形桿菌 G 桿菌 普瓊：有遷徙現(xiàn)象。 SS： 中心呈黑色 氧化酶 尿酶 + KIA： KA++ 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 G桿菌 CIN：菌落為粉紅色，偶有一圈膽鹽沉淀 氧化酶： 尿酶 + KIA： KA TSIA： AA 血清定型 2不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的共同特點(diǎn)是什么？臨床常見菌屬有哪些？ 答 : 1 培養(yǎng) 在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，包括血平板，巧克力平板。 2 革蘭染色 革蘭陰性桿菌。 3 氧化酶實(shí)驗(yàn)大多為陽性。 4 O/F 為 O 型，不利用或產(chǎn)堿（ N/F）。 5 KIA 斜面穿刺生 長(zhǎng)不良，底層穿刺上可生長(zhǎng) ，斜面及底層均呈堿性生長(zhǎng)。 6 動(dòng)力實(shí)驗(yàn)在半固體中僅在穿刺的 4mm 左右生長(zhǎng)， 46h 初步觀察，時(shí)間久了動(dòng)力消失。 臨床常見菌屬有假單胞菌屬，不動(dòng)桿菌屬，產(chǎn)堿桿菌屬，黃桿菌屬，莫拉菌屬，軍團(tuán)菌屬。 2產(chǎn)堿桿菌、不動(dòng)桿菌屬鑒定要點(diǎn) 產(chǎn)堿桿菌屬：在 MAC 、 SS 平板上可形成無色透明的菌落，在血平板上行成灰色，扁平，邊緣薄的較大菌落。 生化鑒定：氧化酶及觸酶（ +）、 O/F 產(chǎn)堿性、脲酶（ — ）、動(dòng)力（ — ）不液化明膠、不分解任何糖類 不動(dòng)桿菌屬：在普通培養(yǎng)基和麥康克平板上生長(zhǎng)良好，最是溫度為 35 度，有些菌株可在 42 度生長(zhǎng)，在 SS瓊脂平板上有部分菌落生長(zhǎng)， 生化鑒定：氧化酶（ — ）、動(dòng)力（ — ）、硝酸鹽實(shí)驗(yàn) (— ) 2銅綠假單胞菌的主要生物學(xué)特性 1）、形態(tài)特征：為格蘭陰性菌，長(zhǎng)短不一，球狀或長(zhǎng)絲狀，成雙或成鍛煉排列。一端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，無芽孢?？僧a(chǎn)生多種色素，如綠膿素與帶熒光的水溶性熒光素。 2）、培養(yǎng)特性：專性需氧菌，部分菌株能在兼性厭氧條件下生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，可生長(zhǎng)的溫 度范圍為 25— 42 攝氏度，最適生長(zhǎng)唯獨(dú)為 25— 30 攝氏度， 4 攝氏度不生長(zhǎng)。氧化酶陽性，氧化分解葡萄糖、木糖、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，液化明膠，還原硝酸鹽并產(chǎn)生氮?dú)?，吲哚陰性，利用枸櫞酸鹽，精氨酸雙水解酶陽性 。 3)、有 O 抗原和 H 抗原，其中 O 抗原包含外膜蛋白，脂多糖兩種成分。外膜蛋白是保護(hù)性抗原，脂多糖具有特異性，應(yīng)用抗原成分可對(duì)銅綠假單胞菌進(jìn)行血清學(xué)分型，目前可分為 20 個(gè)血清型。 革蘭陰性桿菌鑒定步驟 見書 3革蘭陽性球菌鑒定步驟 見書 3細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室應(yīng)如何檢驗(yàn)疑為霍亂的糞便標(biāo)本？ 糞便標(biāo)本：（ 1） a 涂片 b動(dòng)力制動(dòng)試驗(yàn) ===快速檢測(cè)→初步報(bào)告 （ 2）接種堿性胨水 （ 25℃ 68 小時(shí)）→轉(zhuǎn)鐘 a TCBS 或 4 號(hào)瓊脂 — 35℃ 1218小時(shí)→觀察可疑菌落。 （ 3）生化鑒定： a涂片 染色（菌體短小 彎曲成弧形或直桿狀的革蘭陰性細(xì)菌） b氧化酶試驗(yàn)（ +） c粘絲試驗(yàn)（ +） d O/129敏感試驗(yàn) （ s） e O1 群， O139群血清凝集實(shí)驗(yàn)（ +） （ 4）分純：轉(zhuǎn)鐘 KIA→生化鑒定： a 耐鹽性試驗(yàn) NAcL【 0%（ +） 1%（ +） 3%（ +） 6%（ +） 8%（ ） 10%（ ） 】 ； b 血清型鑒定； c 生物型 鑒定 3簡(jiǎn)述結(jié)核分枝桿菌的形態(tài)及培養(yǎng)特性（培養(yǎng)基） 答：形態(tài)：細(xì)長(zhǎng)略彎曲的桿菌，有時(shí)可見啊分枝狀，無芽胞和鞭毛，因衰老和抗結(jié)核藥物的作用可出現(xiàn)多種形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀。 培養(yǎng)特性：在固體培養(yǎng)基上，菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣。在液體培養(yǎng)基中，生成菌膜。如在培養(yǎng)液中加入吐溫 80 可是細(xì)菌分散，均勻生長(zhǎng)，有毒株的在液體培養(yǎng)基中呈索狀生長(zhǎng)。 3如何進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的微生物學(xué)檢驗(yàn)？ 形態(tài)觀察 （ 1）、涂片：直接涂片和厚涂片；火焰固定后用于染色 （ 2）、 染色： ○ 1 抗酸染色 報(bào)告抗酸桿菌 ○ 2 熒光染色 報(bào)告分枝桿菌 分離培養(yǎng) （ 1）、標(biāo)本處理：腦脊液等無雜菌污染的標(biāo)本可直接或離心后取沉渣接種；痰和尿液有雜菌污染的標(biāo)本接種之前應(yīng)作適當(dāng)?shù)奶幚怼?○ 1 酸處理，待接種； ○ 2 堿處理，待接種； ○ 3 胰酶 — 新潔爾滅法，待接種 （ 2）、接種與培養(yǎng) 1）固體培養(yǎng)基： ○ 1 抗酸性染色 ○ 2 鑒定試驗(yàn) 鑒定報(bào)告群別或種別 ○ 3 耐藥試驗(yàn) 2）液體培養(yǎng)基： 鑒定報(bào)告群別或種別 生化反應(yīng) 糖發(fā)酵 觸酶 熱觸酶 中性紅 碲鹽還原 + + 基因診斷： ○ 1 DNA 探針 ○ 2 PCR 雜交梳 鑒定報(bào)告群別或種別 ○ 3 16rRNA 基因測(cè)序 免疫學(xué)診斷： ○ 1 結(jié)核菌素試驗(yàn) 輔助手段 ○ 2 檢測(cè)抗 PPD IgG 診斷活動(dòng)性結(jié)核 ○ 3 全血 INFγ 測(cè)定 報(bào)告群被或種別 3厭氧芽胞梭菌屬共同特征，主要種類？ 共同特征：厭氧或微需氧的粗大芽孢桿菌。革蘭陽性，芽孢呈圓形或卵圓形，直徑大于菌體，位于菌體中央，極端或次極端，使菌體膨大呈梭狀。多數(shù)為腐生菌，少數(shù)致病菌，能分泌外毒素，和侵襲酶類，引起人和動(dòng)物致病。 種類：臨床上有致病性的梭狀芽孢桿菌主要是某些厭氧芽孢桿菌，如破傷風(fēng)梭菌，產(chǎn)氣莢膜梭菌，肉毒梭菌與艱難梭菌等。 3破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌的形態(tài)特征、致病物質(zhì)及所致疾病 破傷風(fēng)攆梭菌的（形態(tài)特征）：革蘭氏陽性菌、細(xì)長(zhǎng)、周身鞭毛、能運(yùn)動(dòng)、無莢膜。芽孢正圓形，比菌體大，位于菌體頂端，使細(xì)菌呈鼓槌狀。專性厭氧菌，在 血平板上呈薄膜狀生長(zhǎng)，菌落半透明、灰白色、邊緣疏松呈羽毛狀，伴 β 溶血。在皰肉培養(yǎng)基中，肉渣部分消化，微變黑，有少量氣體，有腐敗性惡臭。（致病物質(zhì)）：外毒素。（所致疾?。焊腥竞笠饳C(jī)體強(qiáng)直性痙攣、抽搐，稱為破傷風(fēng)。 肉毒梭菌的（形態(tài)特征）：革蘭陽性粗短桿菌、單獨(dú)或成雙排列