【正文】 B 蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗 一．吲哚試驗（靛基質(zhì)試驗） 底物：色氨酸 產(chǎn)物：吲哚 指示劑：對二氨基苯甲醛（靛基質(zhì)試劑） 培養(yǎng)基：蛋白胨水 結果：玫瑰色（ +） 不變（ ） 二 . 硫化氫試驗（ H2S） 底物：含硫氨基酸 產(chǎn)物：硫化氫 指示劑：醋酸鉛／硫酸亞鐵（ Fe2+） 培養(yǎng)基：含鐵瓊脂 結果：黑色（ +） 不變（ ） 三． 尿素酶試驗 底物：尿素 產(chǎn)物：氨 指示劑：酚紅（黃→紅） 培養(yǎng)基：尿素肉湯／尿素瓊脂培養(yǎng)基 結果：黃→紅（ +）黃 （ ） 四． 苯丙氨酸脫氨酶試驗 底物：苯丙氨酸 產(chǎn)物：苯丙酮酸 指示劑： 10%三氯化鐵 培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂斜面 結果：綠色化合物（ +） 不變 （ ） 五． 氨基酸脫羧酶試驗 底物：氨基酸 產(chǎn)物：胺和二氧化碳 指示劑：溴甲酚紫（黃→紫）培養(yǎng)基：Ｍ oeller 脫羧培養(yǎng)基 （含葡萄糖和氨基酸） 結果： 對照管 不變 試驗管 黃→紫（ +）黃 （ ） 此試驗需做對照（不含氨基酸的培養(yǎng)基） C 碳源利用試驗 一 枸櫞酸鹽利用試驗 底物：枸櫞酸鹽 產(chǎn)物：碳酸鹽 指示劑：溴色香草酚藍（綠→藍）培養(yǎng)基：枸櫞酸鹽培養(yǎng)基 結果：綠→藍（ +）綠 （ ） D 呼吸酶試 驗 一 細胞色素氧化酶試驗（ OX 試驗） OX 原理：細胞色素 C → 氧化型細胞色素 C+苯二胺→醌類化合物（紅色） 指示劑： 1%鹽酸四甲基對苯二胺 /鹽酸二甲基對苯二胺 產(chǎn)物：醌類化合物（紅色） 結果： 10s 內(nèi)紅色（ +） 不變（ ） 二 過氧化氫酶試驗 /觸媒（ H2O2 試驗） 原理： 觸媒 H2O2 → H2O+O2 ↑ 指示劑： 3% H2O2 底物： 3% H2O2 產(chǎn)物： O2 結果：大量氣泡 O2 產(chǎn)生（ +） 無（ ） 注意：做對照 血細胞中有 H2O2 ，可產(chǎn)生假陽性 三 硝酸鹽還原試驗 原理： 酶系 硝酸鹽→亞硝酸鹽 + а 萘胺 +對氨基苯磺酸→ N а 萘胺偶氮苯磺酸（紅色） 底物：硝酸鹽產(chǎn)物：亞硝酸鹽 指示劑：對氨基苯磺酸 / а 萘胺（甲液 /乙液）培養(yǎng)基：硝酸鹽培養(yǎng)基 結果：紅色（ +） 不變（ ） 注意：不變色，加入鋅粉→紅色 真陰性 不變 假陰性 E 其他生化試驗 一 凝固 酶試驗 原理： 方法；結合型血漿凝固酶 → 玻片法 凝集（ +） /不凝集（ ） 游離型血漿凝固酶 → 試管法 凝固（ +） /不凝固（ ） 結果：金黃色葡萄球菌（ +） 其他（ ） 注意：做對照試驗 二 卵磷脂酶試驗 原理： 酶 +Ca2+ 卵磷脂 → 甘油脂（混濁） 底物：卵磷脂 產(chǎn)物：甘油脂 培養(yǎng)基：卵黃瓊脂平板 結果：混濁（ +） 不變（ ） 三 DNA 酶試驗 原 理： DNA 酶 長鏈 DNA → 寡核苷酸鏈 （被酸沉淀） （溶于酸） 底物：長鏈 DNA 產(chǎn)物；寡核苷酸鏈 培養(yǎng)基： DNA 瓊脂平板 結果：菌落周圍透明環(huán)（ +） 無透明環(huán)（ ） 四 膽汁溶菌試驗 原理：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，而其他細菌則能耐受。 ：仔細觀察至少 300 個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌。 4） 復染 用堿性美蘭溶液復染 1 分鐘，用水沖洗后用吸水紙吸干。 細菌因素：細菌菌齡不同，革蘭染色結果也有差異，一般以 18~24 小時的 培養(yǎng)物染色效果最好，菌齡過長影響細菌染色性 。 5）復染：加稀釋石炭酸復紅染 30 秒。用細流水水沖洗，甩去積水。 * 抗衰老作用： 簡述條件致病菌及致病條件 條件致病菌：在正常情況下不致病，在特殊情況下能引起疾病的細菌。 * 營養(yǎng)作用：正常菌群的存在影響著生物體的物質(zhì)代謝與轉化。在正常情況下，這些微生物對人類無害，成為正常菌群。 反轉錄病毒 ：反轉錄病毒是帶有反轉錄酶（依賴 RNA 的 DNA 聚合酶）的 RNA 病毒，此病毒在反轉錄酶的作用下以病毒 RNA 為模板轉錄出互補 DNA 鏈，單鏈 DNA進入細胞核內(nèi)互補另一條 DNA，形成雙鏈 DNA 并以前病毒的形式整合于宿主 DNA 中。 病毒衣殼 :包圍在病毒核酸外的一層蛋白質(zhì)，由一定數(shù)量殼粒聚合而成。氧氣等）改變，可由一種形態(tài)轉變?yōu)榱硪环N形態(tài)，此真菌稱為二相性真菌。 MIC：最低抑菌濃度（μ g/ml)，指在體外實驗中抗菌藥物抑制培養(yǎng)基中某種細菌的生長的最低藥物濃度，是藥物抗菌活性的指標，提示藥物的抑菌能力。 中度敏感 ：常規(guī)用藥時，達到平均血藥濃度，一般相當于或略高于某種細菌的 MIC。 內(nèi)素毒 ：是革蘭陰性菌細胞壁的脂多糖，當菌體死亡崩解后游離出來。 溶原性轉換 ：是侵入細菌的噬菌體在溶原期以前噬菌體形式在細菌內(nèi)與細菌的染色體發(fā)生重組，導致細菌的基因型發(fā)生改變，溶原性細菌可以獲得新的性狀。 R 質(zhì)粒 ：又稱耐藥質(zhì)粒，具有編碼能夠破壞或修飾抗生素的酶基因。 卡介苗 ：有毒力的牛型結核分支桿菌在含甘油、馬鈴薯和膽汁的培養(yǎng)基中經(jīng) 13 年 230 次傳代而獲得的減毒變異株。 抗 O試驗： 抗鏈球菌溶素 O抗體檢測，是一種體外毒素抗毒素中和試驗?？雇淌?、抗體、補體，與毒力有關。 微生物學檢驗復習題 （供 2020級醫(yī)學檢驗本科） 名詞解釋： 凝固酶 ：金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生游離凝固酶和結合凝固酶兩種，前者分泌至菌體外，被血漿中的協(xié)同因子激活為凝血酶，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，導致血漿凝固。能阻止 O抗原與相應抗體凝集，可進行噬菌體分型?？谷苎?O抗體 ASO可中和溶血素 O的活性，常用于風濕熱的輔助診斷，活動性風濕熱患者抗體效價一般超過 400個單位。 抗酸桿菌 ：分支桿菌屬中大多數(shù)細菌，菌體內(nèi)含有分支菌酸，具有抗酸性，一般不易著色，能抵抗 3%鹽酸酒精的脫色作用，這類細菌又稱為抗酸桿菌 有菌免疫 ：是指細菌進入機體后對細菌再次入侵有免疫力，而當細菌或其成分從體內(nèi)徹底消失后機體的免疫力也隨之消失。 毒性噬菌體 ：能在宿主菌細胞內(nèi)復制增殖 ,產(chǎn)生許多子代噬菌體，并最終裂解細菌，稱為毒性噬菌體。 轉導 ：以溫和噬菌體為載體，將供體菌的遺傳物質(zhì)轉移到受體菌中，使后者獲得新的性狀。耐熱，有毒性作用（發(fā)熱、白細胞反應、內(nèi)毒素血癥、DIC），抗原性弱，不可脫毒為類毒素。對細菌引起的感染僅在應用高劑量該藥物時有效，或細菌處于體內(nèi)抗菌藥物濃集 的部位或體液 (尿、膽汁、腸腔）中時才被抑制。 洶涌發(fā)酵現(xiàn)象 ：在牛乳培養(yǎng)基中能分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白胨凝固，同時產(chǎn)生大量氣體，將凝固的酪蛋白胨沖成蜂窩狀，并將液面上的凡士林層向上推擠，甚至沖開管口棉塞，氣勢兇猛，稱為“洶涌 發(fā)酵“ ，是產(chǎn)氣莢膜梭菌的特征。 假菌絲 ： 又稱無隔菌絲，是指 酵母菌進行出芽生殖時，子母細胞不立即分離而以狹小的面積相連，則稱這種藕節(jié)狀的細胞串為假菌絲 。病毒衣殼的排列呈 3 種對稱型（ 20 面立體對稱、螺旋對稱、復合對稱）可作為病毒鑒定和分類的依據(jù)。 問答題： 試述微生物的種類及主要特點 1 試述微生物的種類及主要特點 答：微生物的種類有：非細胞型微生物，原核細胞型微生物，真核細胞型微生物。 生理作用 * 拮抗作用：正常菌群在生物體的特定部位生長后，對其他的菌群有生物拮抗的作用。 如蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪及維生素的合成，膽汁的代謝、膽固醇的代謝及激素轉化都有正常菌群的參與。 致病條件： ； ； 。 3）媒染：加盧戈碘液覆蓋涂面染 1 分鐘。用細流水水沖洗，甩去積水。 抗酸染色步驟、結果 步驟 1） 用接種環(huán)挑取約 膿性或呈干酪樣部分痰液做成 25mm 20mm 大小的均勻薄涂片，待自然干燥后用酒精燈火焰固定。 用油 鏡檢查并記錄結果。 177。 指示劑： 10%去氧膽酸鈉 結果：加膽鹽的培養(yǎng)基變透明，而對照管仍混濁（ +） 加膽鹽的培養(yǎng)基仍混濁，而對照管仍混濁（ ） 五 CAMP 試驗 原理：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，而其他細菌則能耐受。如微莢膜、 Vi 抗原、 K 抗原等，都具有抗吞噬、抵抗抗體和補體的作用。凝固物沉積在菌體表面或病灶周圍，保護細菌不被吞噬細胞吞噬和殺滅。 5）脫氧核糖核酸酶：有利于細菌擴散。 第一種是物理監(jiān)測。 第二種是化學指示監(jiān)測。 嗜熱脂肪芽孢菌菌片， 121℃≦ 19 分鐘 溴甲酚紫葡糖蛋白胨培養(yǎng)基 7 天培養(yǎng) 顯紫色無 嗜熱脂肪芽孢菌生長，滅菌合格。醫(yī)院工作人員在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染也屬醫(yī)院感染。生物媒介傳播。 1 L型菌及特點 概念 ：某些藥物作用于細菌，可抑制的肽聚糖的合成或破壞細胞壁的結構，在高滲環(huán)境下，細菌仍可存活，成為細胞壁缺陷型 L 型細菌的生物學特性： 細菌 L 型的形態(tài)和染色性：細菌 L 型呈高度多形性，大小不一。 L 型細菌的其他特征：生化反應和抗原結構不典型，無法進行常規(guī)的菌種鑒定；人工傳代后可回復為野生型；常引起慢性及反復發(fā)作的感染，對作用于細胞壁的常規(guī)藥物不敏感。如果紙片的厚度過厚或過薄，藥敏紙片直徑過大或過小將影響藥敏試驗的結果。 10 培養(yǎng)基種類，在大多數(shù)情況下，采用 WHO 組織統(tǒng)一要求的 MH 培養(yǎng)基進行的藥敏試驗效果較好 11 孵育 的溫度和時間 1液體稀釋法的原理 答：原理：以水解酪蛋白（ MH）液體培養(yǎng)基將抗生素作不同濃度的稀釋，然后種入待檢菌，定量測定抗菌藥物對該菌的 MIC 。 1細菌產(chǎn)生耐藥性的生化機制 答： 產(chǎn)生一種或多種水解酶，鈍化酶和修飾酶； 抗生素作用的靶位改變，包括青霉素結合蛋白位點和 DNA 解旋酶的改變； 細菌膜的通透性下降，包括細菌生物被摸的形成和通道蛋白丟失； 細菌主動外排系統(tǒng)的過度表達。 常規(guī)需進行 B內(nèi)酰胺酶的檢測的細菌有：肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌、嗜血桿菌屬、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌葡萄球菌、腸球菌、大腸埃希菌、奇異變形桿菌、產(chǎn)酸克雷伯菌等。 ● CLSI 推薦的檢測方法：雙紙片協(xié)同法。 2鏈球菌是如何分類和鑒定的？ 鏈球菌的分類：根據(jù)溶血現(xiàn)象分類：甲型溶 血性鏈球菌、乙型、不出現(xiàn)溶血的丙型。 2肺炎鏈球菌致病因素及鑒定要點，如何區(qū)分肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌？ 肺炎鏈球菌的致病因素：肺炎鏈球菌的莢膜在細菌的侵襲力上起著重要作用；肺炎鏈球菌的溶血素、神經(jīng)氨酸酶也是其主要致病物質(zhì) 鑒定要點：發(fā)酵葡萄糖和多種糖，不產(chǎn) 氣，乳酸為代謝終末產(chǎn)物，觸酶陰性，膽汁溶菌試驗和 Optochin 陽性。 如何區(qū)分肺炎鏈球菌和草綠色鏈球菌：肺炎鏈球菌： Optochin 為 S，膽汁溶菌試驗陽性。 生化反應： 氧化酶－；發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）；觸酶＋；硝酸鹽還原試驗＋ 發(fā)酵多種糖類，多數(shù)能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ★利用乳糖發(fā)酵試驗初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌： 腸道致病菌→多數(shù)不發(fā)酵乳糖 腸道非致病菌→多數(shù)發(fā)酵乳糖 抗原構造復雜：鞭毛抗原（ H）、 K 或 Vi 抗原、菌體抗原（ O） 抵抗力不強，加熱 60℃ 30min 即被殺死，不耐干燥，對一般化學消毒劑如漂白粉、酚、甲醛等均敏感。 屬種的鑒定可以用自動儀和商品鑒定盒來定。沙門菌屬的血清學鑒定中， H 血清分型如果第二相不凝，可能是位相誘導 . 志賀菌屬 ：無鞭毛，在增菌培養(yǎng)是在 GN 肉湯上， 37℃培養(yǎng) 4 到 6 小時即可。 25℃動力陽性， 37℃動力陰性。 2變形桿菌、 小腸結腸炎耶爾森菌 鑒定要點 變形桿菌 G 桿菌 普瓊：有遷徙現(xiàn)象。 4 O/F 為 O 型，不利用或產(chǎn)堿（ N/F）。 2產(chǎn)堿桿菌、不動桿菌屬鑒定要點 產(chǎn)堿桿菌屬：在 MAC 、 SS 平板上可形成無色透明的菌落，在血平板上行成灰色，扁平，邊緣薄的較大菌落。 2）、培養(yǎng)特性：專性需氧菌，部分菌株能在兼性厭氧條件下生長，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，可生長的溫 度范圍為 25— 42 攝氏度，最適生長唯獨為 25— 30 攝氏度， 4 攝氏度不生長。 革蘭陰性桿菌鑒定步驟 見書 3革蘭陽性球菌鑒定步驟 見書 3細菌實驗室應如何檢驗疑為霍亂的糞便標本？ 糞便標本：（ 1） a （ 3）生化鑒定： a O/129敏感試驗 （ s） e如在培養(yǎng)液中加入吐溫 80 可是細菌分散，均勻生長，有毒株的在液體培養(yǎng)