重組dna技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-01 06:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ℃ 加熱 15 min而 失活，故 CIP較為常用。 堿性磷酸酶 去除 DNA、 RNA、 dNTP和 NTP 5ˊ端的磷酸根。17催化單脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到 DNA3`端羥基上。應(yīng)用：探針標記，標記測序以及制備人工黏性末端。催化多聚核苷酸 5ˊ 羥基末端磷酸化。用途： ⑴ 放射性標記 DNA的 5`端 ⑵ 使缺少 5`磷酸基的 DNA磷酸化用于連接反應(yīng)。單鏈核酸內(nèi)切酶，降解單鏈 DNA或 RNA。 T4多聚核苷酸激酶 S1核酸酶末端轉(zhuǎn)移酶18第四節(jié) 重組 DNA技術(shù)常用載體19 是指能攜帶目的基因進入宿主細胞進行 擴增 和 表達 的一類 DNA分子。 一、定義 分類：克隆載體： 用于在宿主細胞中 克隆 和 擴增 外 源 DNA片段。 表達載體： 用于在宿主細胞中獲得外源基因 表達 產(chǎn)物。20具備復(fù)制能力。具備一個或多個篩選標志。具備較多拷貝數(shù)，易從宿主細胞中分離純化。具備一個或多個限制性內(nèi)切酶的單一識別點（多克隆位 點， MCS）。具有較高的遺傳穩(wěn)定性。 二、特點 21 這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建，除去致病基因，并賦予一些新的功能：如有利于進行篩選的標志基因、單一的限制酶切點等。 常用載體 質(zhì)粒 DNA、噬菌體 DNA、病毒 DNA、酵母 DNA22質(zhì)粒（ plasmid） : 質(zhì)粒為細菌染色體之外一些能 獨立復(fù)制 并保持 穩(wěn)定遺傳 的復(fù)制子。結(jié)構(gòu)上，它是一種 雙鏈閉合環(huán)狀 的 DNA分子 。 23pBR322質(zhì)粒載體① 相對分子質(zhì)量小， 長度為 。② 含有氨芐青霉素和四環(huán)素的抗性基因 (Ampr和 Tetr)。③ 有 24種限制性內(nèi)切酶位點。④ 有一個復(fù)制起始點（ ori） 及與DNA復(fù)制有關(guān)的序列，賦予該質(zhì)粒復(fù)制子特性。⑤ 為松弛型復(fù)制子。24 是感染細菌的一類病毒，寄生于細菌中，并能溶解細菌細胞，故稱噬菌體。 噬菌體（ bacteriophage,phage)25噬菌體生活周期2627病毒酵母酵母人工染色體（ YAC） ：用于大片段 DNA的克隆。28第五節(jié) 重組 DNA技術(shù)29 基本步 驟 目的基因的獲取重組 DNA導(dǎo)入受體菌目的基因與載體連接 成重組 DNA克隆載體的選擇重組體的篩
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