重組dna技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-01 06:36 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ℃ 加熱 15 min而 失活，故 CIP較為常用。 堿性磷酸酶 去除 DNA、 RNA、 dNTP和 NTP 5ˊ端的磷酸根。17催化單脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到 DNA3`端羥基上。應(yīng)用：探針標(biāo)記，標(biāo)記測(cè)序以及制備人工黏性末端。催化多聚核苷酸 5ˊ 羥基末端磷酸化。用途： ⑴ 放射性標(biāo)記 DNA的 5`端 ⑵ 使缺少 5`磷酸基的 DNA磷酸化用于連接反應(yīng)。單鏈核酸內(nèi)切酶，降解單鏈 DNA或 RNA。 T4多聚核苷酸激酶 S1核酸酶末端轉(zhuǎn)移酶18第四節(jié) 重組 DNA技術(shù)常用載體19 是指能攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行 擴(kuò)增 和 表達(dá) 的一類(lèi) DNA分子。 一、定義 分類(lèi)：克隆載體： 用于在宿主細(xì)胞中 克隆 和 擴(kuò)增 外 源 DNA片段。 表達(dá)載體： 用于在宿主細(xì)胞中獲得外源基因 表達(dá) 產(chǎn)物。20具備復(fù)制能力。具備一個(gè)或多個(gè)篩選標(biāo)志。具備較多拷貝數(shù)，易從宿主細(xì)胞中分離純化。具備一個(gè)或多個(gè)限制性內(nèi)切酶的單一識(shí)別點(diǎn)（多克隆位 點(diǎn)， MCS）。具有較高的遺傳穩(wěn)定性。 二、特點(diǎn) 21 這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建，除去致病基因，并賦予一些新的功能：如有利于進(jìn)行篩選的標(biāo)志基因、單一的限制酶切點(diǎn)等。 常用載體 質(zhì)粒 DNA、噬菌體 DNA、病毒 DNA、酵母 DNA22質(zhì)粒（ plasmid） : 質(zhì)粒為細(xì)菌染色體之外一些能 獨(dú)立復(fù)制 并保持 穩(wěn)定遺傳 的復(fù)制子。結(jié)構(gòu)上，它是一種 雙鏈閉合環(huán)狀 的 DNA分子 。 23pBR322質(zhì)粒載體① 相對(duì)分子質(zhì)量小， 長(zhǎng)度為 。② 含有氨芐青霉素和四環(huán)素的抗性基因 (Ampr和 Tetr)。③ 有 24種限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。④ 有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)（ ori） 及與DNA復(fù)制有關(guān)的序列，賦予該質(zhì)粒復(fù)制子特性。⑤ 為松弛型復(fù)制子。24 是感染細(xì)菌的一類(lèi)病毒，寄生于細(xì)菌中，并能溶解細(xì)菌細(xì)胞，故稱噬菌體。 噬菌體（ bacteriophage,phage)25噬菌體生活周期2627病毒酵母酵母人工染色體（ YAC） ：用于大片段 DNA的克隆。28第五節(jié) 重組 DNA技術(shù)29 基本步 驟 目的基因的獲取重組 DNA導(dǎo)入受體菌目的基因與載體連接 成重組 DNA克隆載體的選擇重組體的篩
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