[理化生]選修31dna重組技術(shù)的基本工具(編輯修改稿)
2025-03-20 22:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 外源 DNA、 使之失效 ，從而達(dá)到 保護(hù)自身 的目的。 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 練習(xí)使用 EcoRI 剪切目的基因 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 黏性末端 ? 要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性 (平 )末端？ 要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)黏性 (平 )末端。 ? 如果把兩種來源不同的 DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？ 會產(chǎn)生 相同的黏性 (平 )末端 ，然后讓兩者的黏性 (平 )末端 黏合 起來，就似乎可以合成重組的 DNA分子了。 思考 ? Go back …… GAATTC…… …… CTTAAG…… …… GAATTC…… …… CTTAAG…… EcoRⅠ …… GAATTC…… …… CTTAAG…… …… GAATTC…… …… CTTAAG…… 不同來源的 DNA片段混合 將不同種來源的 DNA片段連接起來 生物 A基因片段 生物 B基因片段 …… G AATTC…… …… CTTAA G…… …… G AATTC…… …… CTTAA G…… 酶切 （二） “ 分子縫合針 ” —— DNA連接酶 ① 作用 : 把切下來的 DNA片段拼接成新的 DNA，即將 脫氧核糖和磷酸 連接起來 . ② 作用原理： 催化磷酸二酯鍵形成 可把黏性末端之間的 縫隙“縫合” 起來， Ecoli DNA連接酶 或 T4DNA連接酶 即 恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵 T4 DNA連接酶 還可把 平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低 T4DNA連接酶 DNA連接酶的作用過程 點(diǎn)擊播放 ③ 類型： 類型 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 來源 功能 大腸桿菌 T4噬菌體 恢復(fù) 磷酸 二酯鍵 只能連接 黏性末端 能連接 黏性末端 和平末端 (效率較低 ) 相同點(diǎn) 差別 （二） “ 分子縫合針 ” —— DNA連接酶 DNA聚合酶 DNA連接酶 區(qū)別 1 區(qū)別 2 相同點(diǎn) 尋根問底 ? DNA連接酶與 DNA聚合酶是一回事嗎 ?為什么 ? 1)只能將 單個(gè)核苷酸 連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵 形成 磷酸二酯鍵 1)在 兩個(gè) DNA片段之間 形成磷酸二酯鍵 2)以 一條 DNA鏈為模板 ，將 單個(gè)核苷酸 通過磷酸二酯鍵 連接成一條互補(bǔ)的 DNA鏈 2)將 DNA雙鏈上的 兩個(gè)缺口同時(shí)連接 起來，不需要模板
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