mrna及sshppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 18:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 凝膠中有重疊帶 2）特異 cDNA片段太短（ 110bp450bp)，得不到雜交信號(hào) 3） cDNA產(chǎn)物的質(zhì)量往往較低，在凝膠上 呈現(xiàn) smear狀態(tài) 4）得到的特異性的 cDNA 片段非翻譯序列 （ 3 ‘端 UTR，保守， Northern 雜交易出現(xiàn)假陽性） ，利用 GeneBank進(jìn)行數(shù)據(jù)分析不利 5）檢測全部 mRNA的工作量很大（ T12MN 與 20種隨機(jī)引物組合 240次 PCR)三、 mRNA差別顯示技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)n 技術(shù)的改進(jìn)n 1)連接酶介導(dǎo) PCR法（ ligation linked PCR ) T12MN與 T7啟動(dòng)子引物n 2)cDNA親合捕獲法n 32P dCTP取代 dCTPn 3）點(diǎn)雜交篩選法 TA克隆法n TA克隆載體n Taq DNA聚合 酶 具有一種非模板依 賴 性活性， 這 種活性可以在 PCR產(chǎn) 物的 3’ 端加上一個(gè)非配 對(duì) 的脫氧腺 嘌 呤核苷（ A）。 根據(jù) 這 一特點(diǎn)研制出了一種 線性 質(zhì) 粒，其 5’ 端各 帶 一個(gè)不配 對(duì) 的脫氧胸腺 嘧啶核苷（ T）， 采用 該質(zhì) 粒可將 PCR產(chǎn) 物以 TA連 接的方式直接 進(jìn) 行克隆，即 TA克隆。 三、 mRNA差別顯示技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)n 技術(shù)的改進(jìn)n 4） 隨機(jī)引物法n 5） 簡化錨定引物法 GT12A、 GT12G、 GT12C 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 研究植物不同分化發(fā)育階段的基因表達(dá)差異n Vielle、 Calzada 、 Nuccion 狼尾草的有性生殖與無融合生殖的子房n 2個(gè)錨定引物， 20個(gè)隨機(jī)引物n 2268個(gè) cDNA， 3個(gè)基因在有性生殖的子房中特異性的表達(dá) 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用基因的鑒定與克隆水稻的赤霉素調(diào)節(jié)基因 赤霉素處理的水稻：誘導(dǎo) 不誘導(dǎo) mRNA的表達(dá)量相差 10倍 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 研究激素對(duì)植物發(fā)育的影響n 婁沂春水稻葉綠體 ATP合成酶受赤霉素誘導(dǎo)的差別表達(dá)基因，證明了赤霉素誘導(dǎo)水稻產(chǎn)生生理發(fā)應(yīng)過程涉及了葉綠體基因表達(dá) 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 植物抗逆性機(jī)理的研究n 抗病蟲基因n 鹽脅迫n 高低溫脅迫 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 在營養(yǎng)學(xué)中的應(yīng)用 營養(yǎng)物質(zhì)的作用與基因調(diào)空有關(guān)，當(dāng)某種營養(yǎng)缺乏或過多時(shí)，在分子水平上就表現(xiàn)為某個(gè)或某些基因的開啟、關(guān)閉或表達(dá)量的變化。銅在營養(yǎng)學(xué)中的作用缺銅 6周的大鼠肝臟 mRNA 正常大鼠肝臟 mRNA10個(gè) cDNA片段的差異表達(dá)量是對(duì)照的 新的未知基因五、 mRNA差別顯示在甜菜無融合生殖基因克隆研究中的應(yīng)用n 被子植物無融合生殖使其子代繼承了母本所有的遺傳特性，并形成遺傳上穩(wěn)定的，可由種子繁殖的無性系。由此可以保存優(yōu)異的基因型，固定雜種優(yōu)勢，并可能使一些重要的作物實(shí)現(xiàn) “ 一系法 ” 育種；如果無融合生殖被很好地利用，它將是二十世紀(jì)六十年代 “ 綠色革命 ” 之后的又一次農(nóng)業(yè)革命 — 無性生殖革命 。 五、 mRNA差別顯示在甜菜無融合生殖基因克隆研究中的應(yīng)用 植物界中，無融合生殖廣泛存在。我們通過栽培甜菜（Beta vulgaris L.） 與白花甜菜（ Zoss） 遠(yuǎn)緣雜交獲得了真實(shí)雜種，經(jīng)遺傳回交獲得了帶有白花甜菜染色體的完整單體附加系系列，并且通過單體附加系傳遞研究，篩選出近 100%高頻率傳遞的單體附加系 M14品系。經(jīng)過標(biāo)記基因雜交、傳遞遺傳形態(tài)觀察、胚胎學(xué)及分子生物學(xué)鑒定它們是兼性無融合生殖的 ,1999年 3月經(jīng)專家鑒定為無融合生殖品系；同時(shí)無融合生殖基因已經(jīng)定位在這條附加的白花甜菜染色體上，因此 M14品系是克隆無融合生殖基因的極為難得的材料。 甜菜單體附加系 M14品系
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