紫外-可見分光光度法(編輯修改稿)
2025-05-27 05:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 λ max =516nm，A= ε、 E 注：若溶液中存在多種吸光物質(zhì)時，吸光度將是各組分吸光度的總和。 A總 ＝ Aa+Ab+Ac+?? ＝ ε adCa+ ε bdCb+ ε cdCc+?? I0 a、 b、 c I d 注：每種物質(zhì)的吸收度僅由本身的性質(zhì)和 C決定，與其它物質(zhì)無關(guān)。 33 吸光度 A具有加和性，對同一物質(zhì)來說 濃度（ C） 吸光度（ A） 0 0 1C A 2C 2A 3C 3A 4C 4A 工作曲線 C A 負(fù)偏離 正偏離 線性范圍：線性范圍越大越好。 C1 34 三、偏離 Beer定律的因素 1)化學(xué)因素：離解、締合、配位等化學(xué)變化，使吸光物質(zhì)形態(tài)發(fā)生變化。溶劑、 pH、溫度等影響 。 A＝ abc 影響吸收系數(shù) a的因素有： 物質(zhì)的性質(zhì) 波長的不同 其它因素 如溶劑的影響等 35 ε 104 亞甲藍(lán)陽離子水溶液的吸收光譜 a b c (a) 106mol/l (b) 104mol/l (c) 103mol/l C A 負(fù)偏離 610nm 660nm 36 光學(xué)因素 （ 1）單色光的純度 Λ2 λ1 A λ A λ Beer定律前題：入射光是單色光。 37 單色光 I0 I 單色器 復(fù)合光 狹縫 I0 比色池 760nm 400nm 可見光 I I/2 譜帶寬度 : 狹縫具有一定寬度，使分離出的光同時包含了所需波長的光和附近波長的光。 常用半峰寬來表示。 單色光的譜帶寬s=λ 2λ 1 1 2 λ 510520 透光強(qiáng)度 38 譜帶寬度的值愈小，單色性愈好。但因仍是復(fù)合光，故仍可以使吸光度變小而偏離 Beer定律。 39 （ 2）雜散光 :與所需波長相隔較遠(yuǎn)的光。 Io Is I Is ssIIIIA??? 0lg1 IIA 0lg2 ? 40 （ 4）非平行光 （ 3）散射、反射 克服方法： 比色池：擦干凈 溶液：溶液均一，透明；用空白作參比。 克服方法：比色池位置放正確，與光路垂直。 41 ： △ T （ 是偶然誤差，來自噪聲 ） TTl ogTccdTTl ogTel ogcdc)3(dTTel ogla1dc)2(laTl ogcTl oglca????????????????讀數(shù)精度 42 透光率 T% 吸光度 A △ C/C 100% 95 177。 80 70 60 40 30 20 10 不同 T%或 A時的濃度相對誤差（ △ T= 177。 %） 43 結(jié)論：當(dāng) A值在 ， 相對誤差較小，是測量最適宜范圍。 △ C/C A A= T%=% 44 167。 3 顯色反應(yīng)及其顯色條件的選擇 一、有色物質(zhì)的測定 二、顯色后物質(zhì)的測定 45 顯色劑與顯色反應(yīng) 顯色反應(yīng)：在光度分析中將被測組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔锏姆磻?yīng)。 顯色劑：與被測組分反應(yīng)生成有色化合物的試劑，稱為顯色劑。 二、顯色后物質(zhì)的測定 46 靈敏度高 從 ε來判斷 選擇性好 穩(wěn)定性好 顯色反應(yīng)生成有色化合物組 成穩(wěn)定。 顯色劑在測定波長處無明顯吸收 一般要求兩者最大吸收波長相差 60nm 反應(yīng)具化學(xué)計(jì)量關(guān)系 顯色反應(yīng)的選擇原則 47 1）顯色劑的選擇：生成物穩(wěn)定，且有一定的計(jì)量關(guān)系。 2）溶劑：根據(jù)反應(yīng)物、生成物的溶解度確定。 顯色條件的選擇 48 3）顯色劑的用量：應(yīng)加入略過量的顯色劑。 a b a b A A C C 49 4）酸度 溶液酸度的影響是多方面的。 （ 1）對顯色劑顏色的影響 （ 2）對顯色反應(yīng)影響 5） 顯色時間： a b A t 注：確定實(shí)驗(yàn)方法要考察穩(wěn)定性。 6） 顯色溫度：顯色反應(yīng)進(jìn)行與溫度有關(guān)。 50 反應(yīng)條件的控制 確定反應(yīng)條件，需通過實(shí)驗(yàn)考察，已確定 的實(shí)驗(yàn)條件，不應(yīng)隨意更改條件。 51 167。 4 測量條件的選擇 測定波長的選擇： 選擇原則 “ 吸收最大，干擾最小 ” 。如出現(xiàn)幾個最大吸收波長時，選擇干擾最小，吸光度較大而且平坦的最大吸收波長。 控制吸光度測量范圍 吸光度控制在 。 方法：調(diào)節(jié)溶液的濃度 改變吸收池的厚度 52 選擇適宜的空白（參比）溶液 種類： （ 1）溶劑空白：溶劑作為空白。
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