【文章內(nèi)容簡介】 現(xiàn)單收縮的痕跡，即完全強(qiáng)直收縮，其收縮幅值大于單收縮。在一定范圍內(nèi)，收縮幅值隨刺激頻率增加而增加。正常機(jī)體自然狀態(tài)下的肌肉收縮，幾乎都是強(qiáng)直收縮形式。三、實驗內(nèi)容計算機(jī)生物信號采集處理系統(tǒng)的認(rèn)識及使用蛙坐骨神經(jīng)－腓腸肌肌肉標(biāo)本的制備生物信號的采集四、實驗材料及用具蛙、常用蛙類手術(shù)器械（手術(shù)剪、手術(shù)鑷、毀髓針、玻璃解剖針）、蠟盤、蛙板、固定針、鋅銅弓、培養(yǎng)皿、滴管、紗棉、粗棉線、任氏液、坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本屏蔽盒、鐵支架、張力傳感器、計算機(jī)生物信號采集處理系統(tǒng)(PclabUE)。五、方法與步驟 計算機(jī)生物信號采集處理系統(tǒng)的認(rèn)識與使用 蛙的坐骨神經(jīng)－腓腸肌肌肉標(biāo)本的制備 骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本與儀器的連接 刺激神經(jīng)誘發(fā)肌肉收縮現(xiàn)象觀察（1） 刺激強(qiáng)度對骨骼肌收縮的影響選擇單刺激，起始刺激強(qiáng)度為0V ，刺激強(qiáng)度依次增加。觀察刺激強(qiáng)度對骨骼肌收縮的影響。（2） 刺激頻率對骨骼肌收縮的影響 選擇串刺激，固定閾上刺激的強(qiáng)度（），改變刺激頻率（1－12HZ），觀察肌肉的單收縮、不完全強(qiáng)直收縮和完全強(qiáng)直收縮。六、結(jié)果與分析提示：根據(jù)實驗波形結(jié)果，分析刺激強(qiáng)度和刺激頻率的改變將對骨骼肌的收縮會產(chǎn)生什么影響，為什么？實驗4 血液生理一、實驗?zāi)康?了解血液的組成，區(qū)別血漿、血清、血細(xì)胞及纖維蛋白； 學(xué)習(xí)測定紅細(xì)胞滲透脆性的方法，了解細(xì)胞外液滲透張力對維持細(xì)胞正常形態(tài)與功能的重要性。以血液凝固時間作為指標(biāo)，了解對血液凝固影響的因素，加深對生理止血過程的理解；觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，學(xué)習(xí)人的ABO血型鑒定方法，掌握血型鑒定原理。二、實驗內(nèi)容 血液組成的觀察； 紅細(xì)胞脆性的測定； 觀察并分析影響血液凝固的因素； ABO血型鑒定 交叉配血實驗。三、實驗原理血液是一種廣義的結(jié)締組織，它是由液態(tài)的血漿和懸浮于其中的血細(xì)胞所組成。抗凝情況下離心，由于血細(xì)胞比重略大于血漿，將出現(xiàn)分層，上部為血漿。下部壓緊的血細(xì)胞占全血的體積比稱為紅細(xì)胞壓積（packedcellvolum,簡稱PCV），又叫比容。若不加抗凝劑，血液凝固會析出血清。正常紅細(xì)胞系混懸于等滲的血漿中，若置于高滲溶液內(nèi)，則紅細(xì)胞會失水皺縮；反之，置于不同濃度的低滲溶液中則會膨脹，乃至破裂，釋放血紅蛋白，發(fā)生溶血。紅細(xì)胞膜對低滲溶液具有一定的抵抗力，這一特征稱為紅細(xì)胞的滲透脆性。紅細(xì)胞對低滲溶液的抵抗力越大，紅細(xì)胞在低滲溶液中越不容易發(fā)生溶血，即紅細(xì)胞滲透脆性越小。將血液滴入不同的低滲溶液中，可檢查紅細(xì)胞膜對于低滲溶液抵抗力的大小。開始出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的低滲溶液濃度為該血液紅細(xì)胞的最小抵抗力；開始出現(xiàn)完全溶血時的低滲溶液濃度，則為該血液紅細(xì)胞的最大抵抗力。生理學(xué)上將與血漿滲透壓相等的溶液稱為等滲溶液；而將能維持紅細(xì)胞正常形態(tài)、大小和懸浮于其中的溶液稱為等張溶液。等滲溶液不一定是等張溶液（％的尿素溶液），但等張溶液一定是等滲溶液。血液凝固是一個酶的有限水解激活過程，在此過程中有多種凝血因子參與。根據(jù)凝血過程啟動時激活因子來源不同，可將血液凝固分為內(nèi)源性激活途徑和外源性激活途徑。內(nèi)源性激活途徑是指參與血液凝固的所有凝血因子都在血漿中。外源性激活途徑是指受損的組織中的組織因子進(jìn)入血管后，與血管內(nèi)的凝血因子共同作用而啟動的激活過程。ABO血型是根據(jù)紅細(xì)胞表面存在的凝集原決定的。存在A凝集原的稱為A型血，存在B凝集原的稱為B型血。而血清中還存在凝集素，當(dāng)A凝集原與抗A凝集素相遇或B凝集原與抗B凝集素相遇時，會發(fā)生紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。一般A型標(biāo)準(zhǔn)血清中含有抗B凝集素，B型標(biāo)準(zhǔn)血清中含有抗A凝集素，因此可以用標(biāo)準(zhǔn)血清中的凝集素與被測者紅細(xì)胞反應(yīng)，以確定其血型。同種動物不同個體的紅細(xì)胞凝集稱為同族血細(xì)胞凝集作用。不同動物的血液互相混合有時也可產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集，稱為異族血細(xì)胞凝集作用。由于對動物的天然血型抗體了解不多，而且免疫效價也很低，所以同種動物第一次輸血，一般不會引起嚴(yán)重后果。但第二次輸血就必須進(jìn)行交叉配血實驗，才能決定是否能相互輸血。四、實驗材料家兔和人。五、實驗用品注射器、溫（Wintrobe）氏比容管、吸管、離心機(jī)、肝素（）；試管架、小試管10支、2mL吸管2支、1%NaCl、蒸餾水、滴管；25％氨基甲酸乙酯溶液、2%草酸鉀溶液、生理鹽水、液狀石蠟、肺組織浸液（取兔肺剪碎，洗凈血液，浸泡于3～4倍量的生理鹽水中過夜，過濾收集的濾液即成肺組織浸液，存冰箱中備用）、兔手術(shù)臺、常用手術(shù)器械、動脈夾、動脈插管（或細(xì)塑料導(dǎo)管）、試管8支、小燒杯2個、竹簽1束、秒表；雙凹玻片(或載玻片)、一次性刺血針、玻璃棒、玻璃蠟筆（記號筆）、尖頭滴管、酒精棉球、標(biāo)準(zhǔn)血清、顯微鏡。六、實驗方法（一）、血液的組成采兔心血，混抗凝劑后用注射器徐徐注入溫氏管，定容至刻度“0”,3000r/min離心30min。取出，讀取血細(xì)胞柱刻度；再次離心5min,若刻度不變，即為血細(xì)胞壓積值。觀察比容管中血液，上層為血漿，下層為紅細(xì)胞，中間一白色薄層為白細(xì)胞和血小板。取新鮮血置試管中，靜置片刻。可見渾濁的血變?yōu)橐粭l血凝塊，周圍有清亮的血清析出。為加速此過程，可先離心幾分鐘或略加溫。取新鮮血置小燒杯中，立即用小竹刷攪動。取出竹刷，用自來水沖洗，可見上面纏繞的白色有韌性的纖維蛋白。去纖維蛋白血不再凝固。（二）、紅細(xì)胞滲透脆性實驗 將試管編號后排列在試管架上，按下表向各試管準(zhǔn)確加入1%NaCl溶液和蒸餾水，混勻。 表4－1 試管加樣順序管 號123456789101%NaCl(mL)蒸餾水(mL)NaCl濃度(%) 采取新鮮血液(或去纖維蛋白血)，在上列試管中各加1滴，雙手搓動，混勻。 室溫下靜置2小時，使細(xì)胞下沉(必要時可取一組離心沉淀，2000—3000r/min，3—5min) 結(jié)果判定：上層清液無色，試管下層為渾濁紅色，表明沒有溶血；上層清液呈淡紅色，試管下層仍為渾濁紅色為“不完全溶血”；管內(nèi)液體完全變成透明的紅色，管底無細(xì)胞沉積為“完全溶血”。呈現(xiàn)不完全溶血的最高NaCl濃度為“最小抵抗”，呈現(xiàn)完全溶血的最高NaCl濃度為“最大抵抗”。另，可將血液加到高滲液(%NaCl)中，置顯微鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)變化?！飳嶒炛腥⊙?、滴血、混勻時避免用力震蕩，以免引起非滲透脆性溶血。（三）、影響血液凝固的因素 靜脈注射氨基甲酸乙酯溶液，將兔麻醉，仰臥固定于兔手術(shù)臺上。正中切開頸部，分離一側(cè)頸總動脈，遠(yuǎn)心端用線結(jié)扎阻斷血流，近心端夾上動脈夾。在動脈當(dāng)中斜向剪一小切口，插入動脈插管（或細(xì)塑料導(dǎo)管），結(jié)扎導(dǎo)管以備取血。 準(zhǔn)備好下列試管試管1 不加任何處理（對照管）；試管2 用液狀石蠟潤滑整個試管內(nèi)表面；試管3 放少許棉花；試管4 置于有冰塊的小燒杯中；試管5 加肝素8U；試管6 加草酸鉀1～2mL；試管7 ； 放開動脈夾，每管加入血液2 mL。將多余的血盛于小燒杯中，并不斷用竹簽攪動直至纖維蛋白形成，取出纖維蛋白，將該血液取2 mL加入試管8中。 記錄凝血時間每個試管加血2 mL后，即刻開始計時，每隔15s傾斜一次，觀察血液是否凝固，至血液成為凝膠狀不再流動為止，記錄所經(jīng)歷的時間。7號試管加入血液后，用拇指蓋住試管口將試管顛倒兩次，使血液與藥物混合。 如果加肝素和草酸鉀的試管不出現(xiàn)血凝，～3滴，觀察血液是否發(fā)生凝固？將實驗結(jié)果及各種條件下的凝血時間按表2－1填寫，并進(jìn)行比較、分析解釋產(chǎn)生差異的原因。表4－2 血液凝固及其影響因素實驗管號實驗處理凝血時間1不加任何處理（對照管）2用液狀石蠟潤滑整個試管內(nèi)表面3放少許棉花4置于有冰塊的小燒杯中5加肝素8U6加草酸鉀1～2mL78去纖維蛋白血液（四）、紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象及人ABO血型鑒定 取一干潔雙凹玻片，在左、右上角標(biāo)好“Ａ”、“Ｂ”字樣，分別滴入抗Ａ(即Ｂ型)、抗Ｂ(即Ａ型)標(biāo)準(zhǔn)血清1滴。 人指尖、采血針消毒，待酒精揮發(fā)后采血。用兩支干潔竹簽各蘸取一滴血液，分別與一種標(biāo)準(zhǔn)血清混勻(切勿混用)，室溫下靜置幾分鐘，觀察。 觀察判定：如果紅細(xì)胞聚集成團(tuán)，雖經(jīng)振蕩或輕輕攪動亦不散開，為“凝集”現(xiàn)象(見圖4－1)，紅細(xì)胞散在均勻分布或雖似成團(tuán)，一經(jīng)振蕩即散開，則為未凝集或“假凝集”。4－1 紅細(xì)胞凝集實驗（自解景田）按表4－3判定血型：表4－3 血型判定現(xiàn)象受試血加抗Ａ血清加抗Ｂ血清＋－－＋＋＋－－血型ＡＢＡＢＯ注“＋”為凝集，“－”為不凝集（五）交叉配血實驗 分別對供血動物和受血動物消毒、靜脈取血，制備成血清和紅細(xì)胞懸浮液。紅細(xì)胞懸浮液是將受檢者的血液一滴，加入裝有生理鹽水約1mL的小試管中，即為2％的紅細(xì)胞懸浮液，加蓋備用。 取雙凹玻片一塊，在兩端分別標(biāo)上供血動物和受血動物的名稱或代號，分別滴上它們的血清少許。供血者的紅細(xì)胞懸浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（稱為主側(cè)配血）；將受血者的紅細(xì)胞懸浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（稱為次側(cè)配血），混合。放置10～30min后，肉眼觀察有無凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨的用顯徽鏡觀察。如果兩次交叉配血均無凝集反應(yīng)，說明配血相合，能夠輸血。如果主側(cè)發(fā)生凝集反應(yīng)，說明配血不合，不論次側(cè)配血如何都不能輸血。如果次側(cè)配血發(fā)生凝集反應(yīng)，只有在緊急情況下才有可能考慮是否輸血。七、作業(yè)與思考（一） 、血漿與血清有哪些區(qū)別？如何區(qū)別血液的凝集與凝固，其機(jī)理是否一樣？（二） 、為何同一個體的紅細(xì)胞滲透脆性不同？ （三） 、血液凝固的機(jī)制及影響血凝的外界因素？（四） 、如果只知1人為Ａ型血，請你設(shè)計無標(biāo)準(zhǔn)血清情況下測知全班人血型方案。實驗5 蛙類心博觀察及離體蛙心灌流一、實驗?zāi)康?觀察蛙心起搏點和蛙心臟不同部位的自律性，加深對心臟自動節(jié)律性、正常起搏點和潛在起搏點的理解； 觀察細(xì)胞外液鉀離子、鈣離子以及去甲腎上腺素、乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)對心臟活動的影響，理解內(nèi)環(huán)境理化因素相對穩(wěn)定對維持心臟正常節(jié)律性活動的重要意義。 學(xué)習(xí)離體蛙心灌流，了解離體器官的研究方法。二、實驗內(nèi)容 蛙心起博點觀察； 離體蛙心灌流。三、實驗原理兩棲類動物的心臟為兩心房、一心室，心臟的起搏點是靜脈竇。靜脈竇的自動節(jié)律最高，心房次之，心室最低。正常情況下，心臟的活動節(jié)律服從靜脈竇的節(jié)律，其活動順序為：靜脈竇、心房、心室。這種有節(jié)律的活動可以用機(jī)械方法或通過換能器記錄下來，稱為心搏曲線。心臟的正常節(jié)律性活動必須在適宜的理化環(huán)境里才能維持，一旦適宜的環(huán)境被干擾破壞，心臟活動就會受到影響。心臟受植物性神經(jīng)的雙重支配，交感神經(jīng)興奮時，其末梢釋放去甲腎上腺素使心肌收縮力增強(qiáng)，傳導(dǎo)增快，心率加快；而迷走神經(jīng)興奮時，其末梢釋放乙酰膽堿，使心肌收縮力減弱，心率減慢。蛙心臟離體后，用理化特性近似于其血漿的任氏液灌流，在一定時間內(nèi)，可保持節(jié)律性收縮和舒張。改變灌流液的組成成分，心臟跳動的頻率和幅度會隨之發(fā)生改變。四、實驗材料蟾蜍或蛙。五、實驗用品常用蛙類手術(shù)器械、毀髓針，蛙釘、滴管、絲線、蛙板、培養(yǎng)皿、大瓷盤、斯氏蛙心套管、蛙心夾、長細(xì)滴管、鐵支架、任氏液（共用）、計算機(jī)生物信號采集處理系統(tǒng)。%NaCl、2%CaCl%NaHCO3%乳酸、1%KCl、1：10000去甲腎上腺素、1：100000乙酰膽堿、1：1000普萘洛爾、1：2000阿托品。六、實驗方法（一）、蛙心起搏點觀察將蛙清洗干凈→用毀髓針徹底搗毀腦脊髓→背位固定蛙四肢→剖開胸腔→剪開心包膜、暴露心臟。 觀察和記錄蛙心各部位（靜脈竇、心房和心室）收縮的順序從心臟背面觀察靜脈竇、心房和心室的跳動，記錄每分鐘的收縮次數(shù)（）,注意它們的跳動次數(shù)。 斯氏第一結(jié)扎分離主動脈兩分支的基部，用眼科剪在主動脈干下引一細(xì)線。將蛙心心尖翻向頭端，暴露心臟背面，在靜脈竇和心房交界處的半月形白線（即竇房溝）處將預(yù)先穿入的線作一結(jié)扎（即斯氏第一結(jié)扎，圖5－1）以阻斷靜脈竇和心房之間的傳導(dǎo)。觀察蛙心各部分的搏動節(jié)律有何變化，并記錄各自的跳動頻率（）。待心房、心室復(fù)跳后，再分別記錄心房、心室的復(fù)跳時間和蛙心各部分的搏動頻率（）。★比較結(jié)扎前后有何變化？為什么？圖5－1 斯氏結(jié)扎部位（自解景田）； 斯氏第二結(jié)扎第一結(jié)扎實驗項目完成后，再在心房與心室之間即房室溝用線作第二結(jié)扎（即斯氏第二結(jié)扎，圖5－1）。結(jié)扎后，心臟停止跳動，而靜脈竇和心房繼續(xù)跳動，記錄其各自的跳動頻率（）。經(jīng)過較長時間的間歇后，心室又開始跳動，記錄心室復(fù)跳時間及蛙心各部分的跳動頻率（）。記錄并分析各項結(jié)果。實驗項目靜脈竇頻率/心 房心 室對照第一結(jié)扎第二結(jié)扎（二）離體蛙心灌流蛙心插管的制備用毀髓針破壞蛙的腦和脊髓，將其仰臥固定于蛙板上，用鐵剪刀剪去胸壁，暴露心臟；剪開心包膜，識別心房、心室動脈圓錐、主動脈、靜脈竇、前后腔靜脈等（圖5－2）。圖5－2 蛙心外形及插管方向（自解景田）a、胸面（箭頭示剪刀位置及插管路徑） b、背面 c、縱剖面（示螺旋瓣） 用蛙心夾夾住蛙心尖部，蛙心夾用線固定在蛙板上，松緊以動脈、心房、心室拉直呈水平位為合適。于主動脈分支下預(yù)埋一條棉線做一虛結(jié)備用。把主動脈左支上端結(jié)扎，在近動脈球處剪一向心斜切口。★注意要剪破血管內(nèi)膜，每次心縮時有血自切口涌出，但不要把血管剪斷，剪口