【正文】 （二）離體蛙心灌流蛙心插管的制備用毀髓針破壞蛙的腦和脊髓，將其仰臥固定于蛙板上，用鐵剪刀剪去胸壁，暴露心臟；剪開(kāi)心包膜，識(shí)別心房、心室動(dòng)脈圓錐、主動(dòng)脈、靜脈竇、前后腔靜脈等（圖5－2）。經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的間歇后，心室又開(kāi)始跳動(dòng)，記錄心室復(fù)跳時(shí)間及蛙心各部分的跳動(dòng)頻率（）?！锉容^結(jié)扎前后有何變化？為什么？圖5－1 斯氏結(jié)扎部位（自解景田）； 斯氏第二結(jié)扎第一結(jié)扎實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目完成后，再在心房與心室之間即房室溝用線作第二結(jié)扎（即斯氏第二結(jié)扎，圖5－1）。觀察蛙心各部分的搏動(dòng)節(jié)律有何變化，并記錄各自的跳動(dòng)頻率（）。 斯氏第一結(jié)扎分離主動(dòng)脈兩分支的基部，用眼科剪在主動(dòng)脈干下引一細(xì)線。六、實(shí)驗(yàn)方法（一）、蛙心起搏點(diǎn)觀察將蛙清洗干凈→用毀髓針徹底搗毀腦脊髓→背位固定蛙四肢→剖開(kāi)胸腔→剪開(kāi)心包膜、暴露心臟。五、實(shí)驗(yàn)用品常用蛙類手術(shù)器械、毀髓針，蛙釘、滴管、絲線、蛙板、培養(yǎng)皿、大瓷盤、斯氏蛙心套管、蛙心夾、長(zhǎng)細(xì)滴管、鐵支架、任氏液（共用）、計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)。改變灌流液的組成成分，心臟跳動(dòng)的頻率和幅度會(huì)隨之發(fā)生改變。心臟受植物性神經(jīng)的雙重支配，交感神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋放去甲腎上腺素使心肌收縮力增強(qiáng)，傳導(dǎo)增快，心率加快；而迷走神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋放乙酰膽堿，使心肌收縮力減弱，心率減慢。這種有節(jié)律的活動(dòng)可以用機(jī)械方法或通過(guò)換能器記錄下來(lái)，稱為心搏曲線。靜脈竇的自動(dòng)節(jié)律最高，心房次之，心室最低。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 蛙心起博點(diǎn)觀察； 離體蛙心灌流。實(shí)驗(yàn)5 蛙類心博觀察及離體蛙心灌流一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察蛙心起搏點(diǎn)和蛙心臟不同部位的自律性，加深對(duì)心臟自動(dòng)節(jié)律性、正常起搏點(diǎn)和潛在起搏點(diǎn)的理解； 觀察細(xì)胞外液鉀離子、鈣離子以及去甲腎上腺素、乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)心臟活動(dòng)的影響，理解內(nèi)環(huán)境理化因素相對(duì)穩(wěn)定對(duì)維持心臟正常節(jié)律性活動(dòng)的重要意義。如果次側(cè)配血發(fā)生凝集反應(yīng)，只有在緊急情況下才有可能考慮是否輸血。如果兩次交叉配血均無(wú)凝集反應(yīng)，說(shuō)明配血相合，能夠輸血。供血者的紅細(xì)胞懸浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（稱為主側(cè)配血）；將受血者的紅細(xì)胞懸浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（稱為次側(cè)配血），混合。紅細(xì)胞懸浮液是將受檢者的血液一滴，加入裝有生理鹽水約1mL的小試管中，即為2％的紅細(xì)胞懸浮液，加蓋備用。 觀察判定：如果紅細(xì)胞聚集成團(tuán)，雖經(jīng)振蕩或輕輕攪動(dòng)亦不散開(kāi)，為“凝集”現(xiàn)象(見(jiàn)圖4－1)，紅細(xì)胞散在均勻分布或雖似成團(tuán)，一經(jīng)振蕩即散開(kāi)，則為未凝集或“假凝集”。 人指尖、采血針消毒，待酒精揮發(fā)后采血。 如果加肝素和草酸鉀的試管不出現(xiàn)血凝，～3滴，觀察血液是否發(fā)生凝固？將實(shí)驗(yàn)結(jié)果及各種條件下的凝血時(shí)間按表2－1填寫，并進(jìn)行比較、分析解釋產(chǎn)生差異的原因。 記錄凝血時(shí)間每個(gè)試管加血2 mL后，即刻開(kāi)始計(jì)時(shí)，每隔15s傾斜一次，觀察血液是否凝固，至血液成為凝膠狀不再流動(dòng)為止，記錄所經(jīng)歷的時(shí)間。 準(zhǔn)備好下列試管試管1 不加任何處理（對(duì)照管）；試管2 用液狀石蠟潤(rùn)滑整個(gè)試管內(nèi)表面；試管3 放少許棉花；試管4 置于有冰塊的小燒杯中；試管5 加肝素8U；試管6 加草酸鉀1～2mL；試管7 ； 放開(kāi)動(dòng)脈夾，每管加入血液2 mL。正中切開(kāi)頸部，分離一側(cè)頸總動(dòng)脈，遠(yuǎn)心端用線結(jié)扎阻斷血流，近心端夾上動(dòng)脈夾?！飳?shí)驗(yàn)中取血、滴血、混勻時(shí)避免用力震蕩，以免引起非滲透脆性溶血。呈現(xiàn)不完全溶血的最高NaCl濃度為“最小抵抗”，呈現(xiàn)完全溶血的最高NaCl濃度為“最大抵抗”。 表4－1 試管加樣順序管 號(hào)123456789101%NaCl(mL)蒸餾水(mL)NaCl濃度(%) 采取新鮮血液(或去纖維蛋白血)，在上列試管中各加1滴，雙手搓動(dòng)，混勻。去纖維蛋白血不再凝固。取新鮮血置小燒杯中，立即用小竹刷攪動(dòng)。可見(jiàn)渾濁的血變?yōu)橐粭l血凝塊，周圍有清亮的血清析出。觀察比容管中血液，上層為血漿，下層為紅細(xì)胞，中間一白色薄層為白細(xì)胞和血小板。六、實(shí)驗(yàn)方法（一）、血液的組成采兔心血，混抗凝劑后用注射器徐徐注入溫氏管，定容至刻度“0”,3000r/min離心30min。四、實(shí)驗(yàn)材料家兔和人。由于對(duì)動(dòng)物的天然血型抗體了解不多，而且免疫效價(jià)也很低，所以同種動(dòng)物第一次輸血，一般不會(huì)引起嚴(yán)重后果。同種動(dòng)物不同個(gè)體的紅細(xì)胞凝集稱為同族血細(xì)胞凝集作用。而血清中還存在凝集素，當(dāng)A凝集原與抗A凝集素相遇或B凝集原與抗B凝集素相遇時(shí)，會(huì)發(fā)生紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。ABO血型是根據(jù)紅細(xì)胞表面存在的凝集原決定的。內(nèi)源性激活途徑是指參與血液凝固的所有凝血因子都在血漿中。血液凝固是一個(gè)酶的有限水解激活過(guò)程，在此過(guò)程中有多種凝血因子參與。生理學(xué)上將與血漿滲透壓相等的溶液稱為等滲溶液；而將能維持紅細(xì)胞正常形態(tài)、大小和懸浮于其中的溶液稱為等張溶液。將血液滴入不同的低滲溶液中，可檢查紅細(xì)胞膜對(duì)于低滲溶液抵抗力的大小。紅細(xì)胞膜對(duì)低滲溶液具有一定的抵抗力，這一特征稱為紅細(xì)胞的滲透脆性。若不加抗凝劑，血液凝固會(huì)析出血清?？鼓闆r下離心，由于血細(xì)胞比重略大于血漿，將出現(xiàn)分層，上部為血漿。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 血液組成的觀察； 紅細(xì)胞脆性的測(cè)定； 觀察并分析影響血液凝固的因素； ABO血型鑒定 交叉配血實(shí)驗(yàn)。六、結(jié)果與分析提示：根據(jù)實(shí)驗(yàn)波形結(jié)果，分析刺激強(qiáng)度和刺激頻率的改變將對(duì)骨骼肌的收縮會(huì)產(chǎn)生什么影響，為什么？實(shí)驗(yàn)4 血液生理一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解血液的組成，區(qū)別血漿、血清、血細(xì)胞及纖維蛋白； 學(xué)習(xí)測(cè)定紅細(xì)胞滲透脆性的方法，了解細(xì)胞外液滲透張力對(duì)維持細(xì)胞正常形態(tài)與功能的重要性。觀察刺激強(qiáng)度對(duì)骨骼肌收縮的影響。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)及使用蛙坐骨神經(jīng)－腓腸肌肌肉標(biāo)本的制備生物信號(hào)的采集四、實(shí)驗(yàn)材料及用具蛙、常用蛙類手術(shù)器械（手術(shù)剪、手術(shù)鑷、毀髓針、玻璃解剖針）、蠟盤、蛙板、固定針、鋅銅弓、培養(yǎng)皿、滴管、紗棉、粗棉線、任氏液、坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本屏蔽盒、鐵支架、張力傳感器、計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)(PclabUE)。在一定范圍內(nèi)，收縮幅值隨刺激頻率增加而增加。增大刺激頻率，使后一刺激落在前一收縮的舒張期，肌肉收縮出現(xiàn)總和，此時(shí)記錄到鋸齒狀曲線稱為不完全強(qiáng)直收縮。當(dāng)縮短刺激間隔時(shí)間使第二次刺激落在前一次收縮的舒張期，就會(huì)使兩次收縮總和起來(lái)，稱為不完全復(fù)合收縮；當(dāng)?shù)诙未碳ぢ湓谇耙淮问湛s的縮短期，則只形成一個(gè)波，看不到第一次收縮的舒張期，稱為完全復(fù)合收縮，復(fù)合收縮的幅度比單收縮大?？梢?jiàn)，在一定范圍內(nèi)，骨骼肌收縮的大小決定于刺激強(qiáng)度，這是刺激與組織反應(yīng)之間的一個(gè)普遍規(guī)律。這種能使肌肉發(fā)生最大收縮反應(yīng)的最小刺激強(qiáng)度稱為最適強(qiáng)度。這種剛能引起最小反應(yīng)的最小刺激強(qiáng)度稱閾強(qiáng)度，而剛達(dá)到閾強(qiáng)度的刺激叫做閾刺激，這時(shí)引起的肌肉收縮稱閾收縮。軟件主要用來(lái)對(duì)已經(jīng)數(shù)字化了的生物信號(hào)進(jìn)行顯示、記錄、存儲(chǔ)、處理及打印輸出，同時(shí)對(duì)系統(tǒng)各部分進(jìn)行控制，與操作者進(jìn)行對(duì)話。硬件主要完成對(duì)各種生物電信號(hào)（如心電、肌電、腦電）與非生物電信號(hào)（如血壓、張力、呼吸）的采集。（三）引起肌肉收縮變化的因素有哪些？（四）強(qiáng)直收縮有何生理意義？肌肉發(fā)生強(qiáng)直收縮時(shí)，動(dòng)作電位是否發(fā)生融合？實(shí)驗(yàn)3 生物信號(hào)的采集與分析（公選實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庥?jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的基本原理、組成與基本操作；學(xué)習(xí)生物信號(hào)的采集方法及對(duì)采集生物信號(hào)的初步分析。觀察刺激頻率對(duì)骨骼肌收縮的影響用一個(gè)閾上刺激刺激坐骨神經(jīng)，刺激頻率不斷增加，觀察肌肉的單收縮、不完全強(qiáng)直收縮和完全強(qiáng)直收縮。推薦刺激參數(shù)見(jiàn)下表： 刺激波寬 刺激時(shí)間間隔 起始刺激強(qiáng)度 刺激強(qiáng)度增量 2s 20mV刺激強(qiáng)度從小到大，采集20～30個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，存盤。觀察刺激強(qiáng)度對(duì)骨骼肌收縮的影響 按常規(guī)進(jìn)入計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的工作界面，按以下提示操作：選擇：通道功能張力；輸入范圍50Hz；時(shí)間常數(shù)直流；低通濾波10Hz；50Hz陷波打開(kāi)。系統(tǒng)的刺激輸出與標(biāo)本盒上的刺激電極相連。坐骨神經(jīng)干置于刺激電極的電極上，接觸良好。圖2－3 分離坐骨神經(jīng)（A）和坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本（B）（自解景田）（二）、刺激神經(jīng)誘發(fā)肌肉收縮現(xiàn)象觀察坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本與儀器的連接將標(biāo)本的股骨固定在標(biāo)本盒的股骨固定孔內(nèi)。將其放入裝有任氏液的培養(yǎng)皿中備用。把游離的坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上，從膝關(guān)節(jié)周圍開(kāi)始剪掉大腿所有的肌肉，用粗剪刀將股骨刮干凈，然后在股骨中部剪去上端股骨（），沿膝關(guān)節(jié)剪去小腿（注意保留完整的腓腸肌）。然后，分離腓腸肌肌腱，穿線結(jié)扎牢固。用鑷子提起尾骨干，向上剪斷，露出坐骨神經(jīng)。在坐骨神經(jīng)穿出脊椎處截一小段椎骨，用鑷子夾住，輕輕提起神經(jīng)，用眼科剪靠近神經(jīng)干剪斷神經(jīng)分支，直到腹股溝處。用大頭針固定脊柱和后肢末端，此時(shí)清楚可見(jiàn)白色粗大的坐骨神經(jīng)自脊柱側(cè)面發(fā)出。滴加少許任氏液于標(biāo)本上。制備坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本。洗凈用過(guò)的所有器具、實(shí)驗(yàn)臺(tái)和操作者的手。自脊柱斷端開(kāi)始，剝離下肢皮膚（圖2－2）。用手術(shù)剪沿脊柱兩側(cè)剪斷腹部軟組織，直至恥骨聯(lián)合。用中式剪刀自胸髓下部剪斷脊髓。蟾蜍下肢肌肉松軟，表明脊髓損毀完全。此時(shí)蟾蜍四肢僵直。以雙眼之間長(zhǎng)度為邊長(zhǎng)，向尾部組成一個(gè)等邊三角形，其頂點(diǎn)所在位置即枕骨大孔位置（圖2－1）。將蟾蜍俯臥于手掌中，用中指和無(wú)名指夾住兩個(gè)前肢，小指壓住兩后肢，拇指自然放在脊柱上，食指放在雙眼后方頭上，向下壓使頭部與脊柱呈一角度，充分暴露枕骨大孔。六、實(shí)驗(yàn)方法（一）蟾蜍（或蛙）坐骨神經(jīng)－腓腸肌肌肉標(biāo)本的制備雙毀髓法搗毀蟾蜍（或蛙）的腦和脊髓。正常機(jī)體自然狀態(tài)下的肌肉收縮，幾乎都是強(qiáng)直收縮形式。再增大頻率，使后一刺激落在前一收縮的縮短期，此時(shí)肌肉處于完全收縮的狀態(tài)，不出現(xiàn)單收縮的痕跡，即完全強(qiáng)直收縮，其收縮幅值大于單收縮。用一串最大電刺激作用于肌肉，頻率很低時(shí)（刺激間隔大于單收縮的時(shí)間），出現(xiàn)一連串單收縮。用相繼兩個(gè)最大電刺激作用于肌肉，當(dāng)刺激間隔大于肌肉單收縮的時(shí)間，可出現(xiàn)兩次波形完全分開(kāi)的單收縮。具有這種強(qiáng)度的刺激稱為最大刺激，最大刺激引起的肌肉收縮稱最大收縮。以后隨著刺激強(qiáng)度的增加，越來(lái)越多的肌纖維被興奮，肌肉收縮也相應(yīng)地逐步增大（閾強(qiáng)度以上的刺激稱為閾上刺激）；當(dāng)刺激強(qiáng)度增大到某一個(gè)強(qiáng)度時(shí)，整塊骨骼肌中所有的肌纖維均產(chǎn)生了興奮，肌肉出現(xiàn)最大的收縮反應(yīng)；此時(shí)，如再繼續(xù)增大刺激強(qiáng)度，肌肉的收縮卻不再增大。因此，用持續(xù)時(shí)間一定的單個(gè)刺激直接刺激腓腸肌時(shí)，如刺激強(qiáng)度太弱，不能引起肌肉收縮，只有當(dāng)強(qiáng)度達(dá)到一定的數(shù)值時(shí)，才能引起肌肉發(fā)生最微弱的收縮，此時(shí)只是少數(shù)興奮性最高的肌纖維產(chǎn)生了收縮。興奮性不同的組織其閾值大小亦不相同，興奮性高的閾值低，因此，閾值常作為衡量組織興奮性大小的客觀指標(biāo)。活的神經(jīng)肌肉組織具有興奮性，能接受刺激發(fā)生興奮反應(yīng)。在神經(jīng)－肌肉標(biāo)本中經(jīng)歷了興奮在神經(jīng)纖維上的產(chǎn)生、傳導(dǎo)，興奮在神經(jīng)－肌肉接頭處的傳遞，肌纖維的興奮產(chǎn)生、傳導(dǎo)、興奮－收縮偶聯(lián)及肌絲相對(duì)滑行等一系列生理過(guò)程。因此，在生理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用蟾蜍或蛙坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本來(lái)觀察研究神經(jīng)－肌肉的興奮性、刺激與反應(yīng)的規(guī)律以及骨骼肌的收縮特點(diǎn)等。蟾蜍或蛙等兩棲類動(dòng)物的一些基本生命活動(dòng)及生理功能與溫血?jiǎng)游锝疲潆x體組織所需的條件較簡(jiǎn)單，易于控制和掌握。對(duì)標(biāo)本最基本的要求是保持標(biāo)本的正常功能。三、實(shí)驗(yàn)原理制備實(shí)驗(yàn)標(biāo)本是生理實(shí)驗(yàn)的一項(xiàng)基本操作。實(shí)驗(yàn)2 神經(jīng)－肌肉標(biāo)本的制備及刺激 神經(jīng)誘發(fā)肌肉收縮現(xiàn)象觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)蛙類動(dòng)物雙毀髓的實(shí)驗(yàn)方法；熟悉并掌握蟾蜍或蛙坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本制備的原則和方法；學(xué)習(xí)神經(jīng)－肌肉實(shí)驗(yàn)的電刺激方法，觀察刺激強(qiáng)度與組織反應(yīng)（肌肉收縮）間的關(guān)系；觀察刺激頻率和肌肉收縮形式之間的關(guān)系。（也可以通過(guò)打印預(yù)覽中的“打印”直接進(jìn)行打印輸出）五、作業(yè)與思考（一）簡(jiǎn)述計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的組成及基本原理。通過(guò)以上三種方式，可以放心地保存實(shí)驗(yàn)所采樣的數(shù)據(jù)，若是PclabUE軟件下載了保存在UserData文件夾的數(shù)據(jù)也不會(huì)丟失。它是對(duì)采樣后的波形進(jìn)行涂黑，然后按工具欄的“選存”按扭就會(huì)彈出一個(gè)對(duì)話框讓您輸入文件名。在采樣的過(guò)程當(dāng)中用戶可以多次通過(guò)此按鈕來(lái)記錄數(shù)據(jù)，當(dāng)停止采樣后，用戶可通過(guò)工具欄上的“存盤”按鈕或“文件”菜單中的“實(shí)驗(yàn)記錄保存”菜單項(xiàng)來(lái)保存所記錄下來(lái)的文件，用戶只需要輸入文件名即可，文件將被自動(dòng)存放在本系統(tǒng)安裝后的UserData文件夾中以便用戶集中管理。一是通過(guò)停止采樣后“文件”菜單中的“所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)保存”菜單項(xiàng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的；二是在“新建實(shí)驗(yàn)”或關(guān)閉PclabUE界面時(shí)系統(tǒng)用戶只需要輸入一個(gè)文件名即可，文件將被自動(dòng)存放在本系統(tǒng)安裝后的UserData文件夾中以便用戶集中管理。I、全部數(shù)據(jù)保存是指從開(kāi)始波形采樣就對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所采集的全部波形數(shù)據(jù)的保存，其目的是在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后可再現(xiàn)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。根據(jù)用戶要保存的目的不同，本系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)的保存分三種，一種是整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的全部數(shù)據(jù)的保存；另一種是通過(guò)記錄保存；還有一種是對(duì)做完實(shí)驗(yàn)后的選擇保存。第三步：刺激標(biāo)記想要顯示在哪個(gè)通道上，就在相對(duì)應(yīng)的通道上打鉤，這樣在當(dāng)前通道上就可以顯示相應(yīng)的刺激幅度、波寬與標(biāo)記。為了正確使用刺激器可進(jìn)行如下設(shè)置：第一步：打開(kāi)刺激器設(shè)置面板，可以通過(guò)“設(shè)置”菜單下的“刺激器設(shè)置”菜單項(xiàng)來(lái)實(shí)現(xiàn)，也可以通過(guò)工具欄上的按鈕在控制面板和刺激面板間進(jìn)行切換，此時(shí)刺激面板就會(huì)代替放大器控制面板以方便您進(jìn)行刺激器的參數(shù)設(shè)置。共有七種不同的刺激方式，分別為單刺激、串刺激、周期刺激、自動(dòng)幅度、自動(dòng)間隔、自動(dòng)波寬、自動(dòng)頻率。4.