【文章內容簡介】 乙醇等。④指示劑：常用的指示劑有酚紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍、甲基紅、酸性復紅、中國藍等。（2）制備程序：調配與溶化、調整pH、過濾澄清、分裝、滅菌、無菌檢測與質控、保存。（邵世和）第五章 微生物的保存與管理一、名詞解釋1. 液體石蠟覆蓋保藏法【答案】 液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。2. 載體保藏法【答案】 載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法等。3. 寄主保藏法【答案】 寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染并傳代，此法相當于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。4. 冷凍干燥保藏法【答案】 先使微生物在極低溫度（70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥）。5. 斜面低溫保藏法【答案】 將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2～8℃的冰箱中保藏。二、填空1. 微生物菌種保藏技術很多，其原理主要是采用 、 、 、 和230 / 230 等方法，使微生物生長在 ， 的環(huán)境中。2. 微生物的代謝處于 或 的狀態(tài)，才能在一定的時間內使其不發(fā)生 而又保持 。3. 冷凍保藏法可分 、 和 等保藏法。4. 保存病毒應遵循 ， ， ， ， ， 和 等原則?！敬鸢浮?. 低溫，干燥，隔絕氧氣，減少營養(yǎng)供給，添加保護劑，代謝不活潑，生長受抑制。2. 不活躍，相對靜止，變異，生活能力。3. 低溫冰箱（20～30℃，50～80℃），干冰酒精快速凍結（約70℃），液氮（196℃）。4. 低溫，定期活化增殖，盡量減少不必要的傳代，嚴格按規(guī)范操作，避免毒種相互交叉污染，使病毒不產生變異，保持病毒的遺傳穩(wěn)定性。三、單選題1. 哪一項不是微生物菌種保藏技術原理（ ）A. 低溫B. 增加水分C. 隔絕氧氣D. 減少營養(yǎng)供給E. 添加保護劑【答案】B2. 傳代培養(yǎng)保藏法中冰箱溫度一般為（ ）A. 0～2℃B. 4～6℃C. 8～10℃D. 12～14℃E. 30～36℃【答案】B 3. 哪種方法是傳代培養(yǎng)的變相方法（ ）A. 傳代培養(yǎng)保藏法B. 載體保藏法C. 寄主保藏法D. 冷凍保藏法E. 液體石蠟覆蓋保藏法【答案】E4. 可作保藏厭氧細菌用的方法是（ ）A. 斜面培養(yǎng)B. 穿刺培養(yǎng)C. 寄主保藏法D. 皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)E. 載體保藏法【答案】D5. 濾紙保藏法屬于下列哪種方法（ ）A. 寄主保藏法B. 載體保藏法C. 穿刺培養(yǎng)D. 液體石蠟覆蓋保藏法E. 冷凍保藏法【答案】B6. 下列哪種可以用于保存目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物（ ）A. 寄主保藏法B. 載體保藏法C. 液體石蠟覆蓋保藏法D. 傳代培養(yǎng)保藏法E. 冷凍保藏法【答案】A7. 沙土保藏法（ ）A. 寄主保藏法B. 冷凍保藏法C. 載體保藏法D. 液體石蠟覆蓋保藏法E. 穿刺培養(yǎng)【答案】C8. 干冰酒精快速凍結的溫度是（ ）A. 50～80℃B. 20～30℃C. 196℃D. 70℃E. 50℃【答案】D9. 下列哪項不是保護劑（ ） A. 牛乳B. 血清C. 甲醛D. 糖類E. 甘油【答案】C10. 關于保存病毒的原則，下列說法錯誤的是（ ）A. 高溫B. 定期活化增殖C. 盡量減少不必要的傳代D. 避免毒種相互交叉污染E. 保持病毒的遺傳穩(wěn)定性【答案】A11. 超低溫冰箱保藏病毒的溫度是（ ）A. 4～8℃B. 20～40℃C. 85℃D. 100℃E. 110℃【答案】C12. 液氮保藏病毒方法中，液態(tài)氮內為（ ）A. 150℃B. 196℃C. 250℃D. 300℃E. 350℃【答案】B13. 哪項是實驗室和工廠菌種室常用的保藏法（ ）A. 斜面低溫保藏法B. 液體石蠟保藏法C. 濾紙保藏法D. 沙土保藏法E. 液氮冷凍保藏法【答案】A14. 哪項為菌種保藏方法中最有效的方法之一，對一般生活力強的微生物及其孢子以及無芽胞菌和難保存的致病菌都適用（ ）A. 斜面低溫保藏法B. 冷凍干燥保藏法C. 液體石蠟保藏法D. 濾紙保藏法E. 沙土保藏法【答案】B15. 目前臨床真菌實驗室普遍采用的保存方法有（ ）A. 斜面低溫保藏法B. 冷凍干燥保藏法C. 液體石蠟保藏法D. 濾紙保藏法E. 蒸餾水保存法【答案】E16. 關于微生物的保管規(guī)則和制度，哪項是錯誤的（ ）A. 菌種應專人負責保管B. 若要運輸或攜帶必須置于金屬罐內密封，由專人領取C. 保存的菌種應于規(guī)定時間定期移種，每移種一代作一次鑒定D. 實驗室用培養(yǎng)基保存菌種時，應保存兩套，一套供保存?zhèn)鞔涣硪惶坠┤粘肊. 菌種保存范圍，轉移和銷毀等必須嚴格遵守衛(wèi)生部有關規(guī)定【答案】C17. 哪項是在我國的國際菌種保藏中心（ ）A. CCCCMB. ATCCC. JFCCD. JCME. NCCB【答案】A18. 哪項是中國醫(yī)學微生物菌種保藏中心的英文縮寫（ ） A. ACCCB. CGMCCC. CMCCD. CVCCE. CFCC【答案】C19. 關于保存病毒，哪項是錯誤的（ ）A. 定期活化增殖B. 嚴格按規(guī)范操作C. 盡量減少不必要的傳代D. 避免毒種相互交叉污染E. 常溫【答案】D20. 關于微生物菌種保藏中菌種的狀態(tài)，哪項是錯誤的（ ）A. 相對靜止B. 不活躍C. 生長受抑制D. 仍保持生命活力E. 代謝旺盛【答案】E四、問答1. 微生物菌種保藏的目的及其原理?！敬鸢浮? 微生物具有容易變異的特性，因此，必須重視微生物的保存，使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài)，使其盡可能不發(fā)生變異或死亡，為科學研究與實驗鑒定提供良好的菌種。微生物菌種保藏技術原理主要是采用低溫、干燥、隔絕氧氣、減少營養(yǎng)供給和添加保護劑等方法，使微生物生長在代謝不活潑，生長受抑制的環(huán)境中。常用的方法有：蒸餾水懸浮或斜面?zhèn)鞔２兀桓稍镙d體保藏或冷凍干燥保藏；超低溫或在液氮中冷凍保藏等方法。2. 微生物常用保存方法有哪些？【答案】 微生物常用保存方法可分為以下幾種：（1）傳代培養(yǎng)保藏法有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細菌用），培養(yǎng)后于4～6℃冰箱內保存。（2）液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。（3）載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法等。（4）寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染并傳代，此法相當于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進行保藏。（5）冷凍保藏法可分低溫冰箱（20～30℃，50～80℃）、干冰酒精快速凍結（約70℃）和液氮（196℃）等保藏法。（6）冷凍干燥保藏法先使微生物在極低溫度（70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥）。3. 何謂斜面低溫保藏法？試述其優(yōu)、缺點?！敬鸢浮? 斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2～8℃的冰箱中保藏。保藏時間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細菌保存2～4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每月移種一次。此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養(yǎng)基的物理、化學特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機會亦較多。4. 試述液氮冷凍保藏法的基本步驟及適用范圍?！敬鸢浮? 液氮冷凍保藏法的基本步驟： （1）選擇安瓿管（2）加保護劑（3）接入菌種（4）凍結（5）保藏（6）恢復培養(yǎng)此法除適宜于一般微生物的保藏外，對一些用冷凍干燥法難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。5. 試述真菌的蒸餾水保存法的適用范圍、優(yōu)點及簡要操作步驟。【答案】 真菌的種類繁多，而蒸餾水保存法則適用于淺部和深部真菌菌株絕大多數的菌種，此方法存活率高、污染少、保存時間長，是目前臨床真菌實驗室普遍采用的方法。（1） 用移液器吸取4mL無菌蒸餾水注入安瓶中。將發(fā)育成熟的菌落用無菌接種針挑取數塊放入安瓶中，加蓋密封，貼上日期標簽，注明菌株名稱、編號，置室溫保存。（2） 念珠菌屬可將無菌蒸餾水4mL用移液器注入發(fā)育成熟的菌落試管后輕輕搖勻，使之形成菌懸液后，再注入安瓶中。6. 病毒常用保存方法有哪些，各自有哪些特點？【答案】 （1）冰箱保藏法 普通冰箱保藏：4～8℃；低溫冰箱保藏：20～40℃；超低溫冰箱保藏：85℃。特點：方便、價格相對較便宜。此法保存要注意停電和冰箱的故障?！。ǎ玻┮旱２胤椒? 置液氮保藏器中保存，保藏器內的氣相為150℃，液態(tài)氮內為196℃。注意定期補充液氮。?。?）冷凍真空干燥保藏法 先將液態(tài)的樣品凍結成固態(tài)，在真空條件下使溫度下降，通過直接升華抽去水分，從而使物質脫水干燥，簡稱凍干法。特點：凍干法保藏是在低溫，干燥和隔絕空氣的條件下，使病毒處于休眠狀態(tài)，它的代謝是相對靜止的，因而使病毒可以保存較長的時間。7. 試述微生物保管規(guī)則和制度?！敬鸢浮? （1）菌種應專人負責保管，并由部門負責人經常督促檢查。若因工作變動，應及時作好全面交接工作。（２）菌種應保存于安全的地方，所用冰箱等保存容器均應加鎖。若要運輸或攜帶必須置于金屬罐內密封，由專人領取。（3）菌種必須設記錄卡，內容包括菌種名稱、編號、來源、分離日期、鑒定日期、鑒定者、鑒定結果、傳代情況及所用培養(yǎng)基，保存方法、溫度、轉移及銷毀情況和原因、保存者、部門負責人等。（4）保存的菌種應于規(guī)定時間定期移種，每移種三代作一次鑒定。如發(fā)現污染或變異應及時處理。（5）實驗室用培養(yǎng)基保存菌種時，應保存兩套，一套供保存?zhèn)鞔?；另一套供日常應用。?）菌種保存范圍，轉移和銷毀等必須嚴格遵守衛(wèi)生部有關規(guī)定。（7）培養(yǎng)菌種的試管和干燥菌種的安瓿上應貼標簽，寫明編號、菌名及日期。8. 試列舉出6個菌種保藏機構?！敬鸢浮? American Type Culture Collection(ATCC) 、Japan Collection of Microorganisms、German Collection of Microorganisms and Cell Cultures、Centraalbureau voor Schimmelcultures、Belgian Coordinated Collections of Microorganisms、中國微生物菌種保藏管理委員會(CCCCM)。（劉運德）第六章 臨床微生物實驗室的全面質量管理一、名詞解釋1. 室內質量控制【答案】 室內質量控制（Internal quality control ，IQC） 是實驗室人員嚴格按照規(guī)定所執(zhí)行的，確保整個檢測過程中所使用的試劑、設備和所執(zhí)行的操作符合既定要求的質量標準。室內質量控制應該貫穿于標本進入實驗室到檢測結果出來的整個檢測過程。2. 室間質量評估【答案】 室間質量評估（External Quality Assessment，EQA）是實驗室以外的有一定資質的機構組織實施的，通過比較不同實驗室之間檢測結果的差異，對實驗室檢測結果的準確性進行第三方評價，EQA又稱作比對試驗（proficiency testing ,PT）。EQA 是實驗室質量認可的需要，可有效評價實驗室質量管理的水平,同時也是對室內質量控制的有效檢驗，臨床微生物實驗室應參加與本實驗室有關的EQA 計劃，并獲得滿意的成績。二、填空題1. 微生物檢驗標本的質量控制內容包括標本的正確 、 、 。2. 藥敏試驗用MH瓊脂的厚度為 。3. 西蒙枸櫞酸瓊脂質量控制時，通常選肺炎克雷伯菌作為 質控菌株，培養(yǎng)后呈 ，選大腸埃希菌作為陰性質控菌株，培養(yǎng)后仍保持 。4. 常規(guī)紙片法藥敏試驗的質量控制菌株為 、 和 。5. 室間質量評估的基本模式有 和 。6. 分析后質量管理的主要內容是 的質量管理和為醫(yī)護人員和患者提供與項目結果有關的滿意的 服務【答案】1. 采集，保存，標識，運送。2. 4 mm。3. 陽性，藍色，陰性，綠色。4. 大腸埃希菌 ATCC 25922，金黃色葡萄球菌 ATCC 2592