【文章內(nèi)容簡介】 乙醇等。④指示劑：常用的指示劑有酚紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、甲基紅、酸性復(fù)紅、中國藍(lán)等。（2）制備程序：調(diào)配與溶化、調(diào)整pH、過濾澄清、分裝、滅菌、無菌檢測與質(zhì)控、保存。（邵世和）第五章 微生物的保存與管理一、名詞解釋1. 液體石蠟覆蓋保藏法【答案】 液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。2. 載體保藏法【答案】 載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法等。3. 寄主保藏法【答案】 寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。4. 冷凍干燥保藏法【答案】 先使微生物在極低溫度（70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。5. 斜面低溫保藏法【答案】 將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2～8℃的冰箱中保藏。二、填空1. 微生物菌種保藏技術(shù)很多，其原理主要是采用 、 、 、 和230 / 230 等方法，使微生物生長在 ， 的環(huán)境中。2. 微生物的代謝處于 或 的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生 而又保持 。3. 冷凍保藏法可分 、 和 等保藏法。4. 保存病毒應(yīng)遵循 ， ， ， ， ， 和 等原則?！敬鸢浮?. 低溫，干燥，隔絕氧氣，減少營養(yǎng)供給，添加保護(hù)劑，代謝不活潑，生長受抑制。2. 不活躍，相對靜止，變異，生活能力。3. 低溫冰箱（20～30℃，50～80℃），干冰酒精快速凍結(jié)（約70℃），液氮（196℃）。4. 低溫，定期活化增殖，盡量減少不必要的傳代，嚴(yán)格按規(guī)范操作，避免毒種相互交叉污染，使病毒不產(chǎn)生變異，保持病毒的遺傳穩(wěn)定性。三、單選題1. 哪一項(xiàng)不是微生物菌種保藏技術(shù)原理（ ）A. 低溫B. 增加水分C. 隔絕氧氣D. 減少營養(yǎng)供給E. 添加保護(hù)劑【答案】B2. 傳代培養(yǎng)保藏法中冰箱溫度一般為（ ）A. 0～2℃B. 4～6℃C. 8～10℃D. 12～14℃E. 30～36℃【答案】B 3. 哪種方法是傳代培養(yǎng)的變相方法（ ）A. 傳代培養(yǎng)保藏法B. 載體保藏法C. 寄主保藏法D. 冷凍保藏法E. 液體石蠟覆蓋保藏法【答案】E4. 可作保藏厭氧細(xì)菌用的方法是（ ）A. 斜面培養(yǎng)B. 穿刺培養(yǎng)C. 寄主保藏法D. 皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)E. 載體保藏法【答案】D5. 濾紙保藏法屬于下列哪種方法（ ）A. 寄主保藏法B. 載體保藏法C. 穿刺培養(yǎng)D. 液體石蠟覆蓋保藏法E. 冷凍保藏法【答案】B6. 下列哪種可以用于保存目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物（ ）A. 寄主保藏法B. 載體保藏法C. 液體石蠟覆蓋保藏法D. 傳代培養(yǎng)保藏法E. 冷凍保藏法【答案】A7. 沙土保藏法（ ）A. 寄主保藏法B. 冷凍保藏法C. 載體保藏法D. 液體石蠟覆蓋保藏法E. 穿刺培養(yǎng)【答案】C8. 干冰酒精快速凍結(jié)的溫度是（ ）A. 50～80℃B. 20～30℃C. 196℃D. 70℃E. 50℃【答案】D9. 下列哪項(xiàng)不是保護(hù)劑（ ） A. 牛乳B. 血清C. 甲醛D. 糖類E. 甘油【答案】C10. 關(guān)于保存病毒的原則，下列說法錯(cuò)誤的是（ ）A. 高溫B. 定期活化增殖C. 盡量減少不必要的傳代D. 避免毒種相互交叉污染E. 保持病毒的遺傳穩(wěn)定性【答案】A11. 超低溫冰箱保藏病毒的溫度是（ ）A. 4～8℃B. 20～40℃C. 85℃D. 100℃E. 110℃【答案】C12. 液氮保藏病毒方法中，液態(tài)氮內(nèi)為（ ）A. 150℃B. 196℃C. 250℃D. 300℃E. 350℃【答案】B13. 哪項(xiàng)是實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法（ ）A. 斜面低溫保藏法B. 液體石蠟保藏法C. 濾紙保藏法D. 沙土保藏法E. 液氮冷凍保藏法【答案】A14. 哪項(xiàng)為菌種保藏方法中最有效的方法之一，對一般生活力強(qiáng)的微生物及其孢子以及無芽胞菌和難保存的致病菌都適用（ ）A. 斜面低溫保藏法B. 冷凍干燥保藏法C. 液體石蠟保藏法D. 濾紙保藏法E. 沙土保藏法【答案】B15. 目前臨床真菌實(shí)驗(yàn)室普遍采用的保存方法有（ ）A. 斜面低溫保藏法B. 冷凍干燥保藏法C. 液體石蠟保藏法D. 濾紙保藏法E. 蒸餾水保存法【答案】E16. 關(guān)于微生物的保管規(guī)則和制度，哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的（ ）A. 菌種應(yīng)專人負(fù)責(zé)保管B. 若要運(yùn)輸或攜帶必須置于金屬罐內(nèi)密封，由專人領(lǐng)取C. 保存的菌種應(yīng)于規(guī)定時(shí)間定期移種，每移種一代作一次鑒定D. 實(shí)驗(yàn)室用培養(yǎng)基保存菌種時(shí)，應(yīng)保存兩套，一套供保存?zhèn)鞔?；另一套供日常?yīng)用E. 菌種保存范圍，轉(zhuǎn)移和銷毀等必須嚴(yán)格遵守衛(wèi)生部有關(guān)規(guī)定【答案】C17. 哪項(xiàng)是在我國的國際菌種保藏中心（ ）A. CCCCMB. ATCCC. JFCCD. JCME. NCCB【答案】A18. 哪項(xiàng)是中國醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏中心的英文縮寫（ ） A. ACCCB. CGMCCC. CMCCD. CVCCE. CFCC【答案】C19. 關(guān)于保存病毒，哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的（ ）A. 定期活化增殖B. 嚴(yán)格按規(guī)范操作C. 盡量減少不必要的傳代D. 避免毒種相互交叉污染E. 常溫【答案】D20. 關(guān)于微生物菌種保藏中菌種的狀態(tài)，哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的（ ）A. 相對靜止B. 不活躍C. 生長受抑制D. 仍保持生命活力E. 代謝旺盛【答案】E四、問答1. 微生物菌種保藏的目的及其原理?！敬鸢浮? 微生物具有容易變異的特性，因此，必須重視微生物的保存，使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài)，使其盡可能不發(fā)生變異或死亡，為科學(xué)研究與實(shí)驗(yàn)鑒定提供良好的菌種。微生物菌種保藏技術(shù)原理主要是采用低溫、干燥、隔絕氧氣、減少營養(yǎng)供給和添加保護(hù)劑等方法，使微生物生長在代謝不活潑，生長受抑制的環(huán)境中。常用的方法有：蒸餾水懸浮或斜面?zhèn)鞔２?；干燥載體保藏或冷凍干燥保藏；超低溫或在液氮中冷凍保藏等方法。2. 微生物常用保存方法有哪些？【答案】 微生物常用保存方法可分為以下幾種：（1）傳代培養(yǎng)保藏法有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4～6℃冰箱內(nèi)保存。（2）液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。（3）載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法等。（4）寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。（5）冷凍保藏法可分低溫冰箱（20～30℃，50～80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約70℃）和液氮（196℃）等保藏法。（6）冷凍干燥保藏法先使微生物在極低溫度（70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。3. 何謂斜面低溫保藏法？試述其優(yōu)、缺點(diǎn)?！敬鸢浮? 斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2～8℃的冰箱中保藏。保藏時(shí)間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌保存2～4個(gè)月，移種一次。酵母菌兩個(gè)月，細(xì)菌最好每月移種一次。此法為實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異，因?yàn)榕囵B(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機(jī)會亦較多。4. 試述液氮冷凍保藏法的基本步驟及適用范圍。【答案】 液氮冷凍保藏法的基本步驟： （1）選擇安瓿管（2）加保護(hù)劑（3）接入菌種（4）凍結(jié)（5）保藏（6）恢復(fù)培養(yǎng)此法除適宜于一般微生物的保藏外，對一些用冷凍干燥法難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細(xì)菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細(xì)胞均可長期保藏，而且性狀不變異。5. 試述真菌的蒸餾水保存法的適用范圍、優(yōu)點(diǎn)及簡要操作步驟。【答案】 真菌的種類繁多，而蒸餾水保存法則適用于淺部和深部真菌菌株絕大多數(shù)的菌種，此方法存活率高、污染少、保存時(shí)間長，是目前臨床真菌實(shí)驗(yàn)室普遍采用的方法。（1） 用移液器吸取4mL無菌蒸餾水注入安瓶中。將發(fā)育成熟的菌落用無菌接種針挑取數(shù)塊放入安瓶中，加蓋密封，貼上日期標(biāo)簽，注明菌株名稱、編號，置室溫保存。（2） 念珠菌屬可將無菌蒸餾水4mL用移液器注入發(fā)育成熟的菌落試管后輕輕搖勻，使之形成菌懸液后，再注入安瓶中。6. 病毒常用保存方法有哪些，各自有哪些特點(diǎn)？【答案】 （1）冰箱保藏法 普通冰箱保藏：4～8℃；低溫冰箱保藏：20～40℃；超低溫冰箱保藏：85℃。特點(diǎn)：方便、價(jià)格相對較便宜。此法保存要注意停電和冰箱的故障?！。ǎ玻┮旱２胤椒? 置液氮保藏器中保存，保藏器內(nèi)的氣相為150℃，液態(tài)氮內(nèi)為196℃。注意定期補(bǔ)充液氮?！。?）冷凍真空干燥保藏法 先將液態(tài)的樣品凍結(jié)成固態(tài)，在真空條件下使溫度下降，通過直接升華抽去水分，從而使物質(zhì)脫水干燥，簡稱凍干法。特點(diǎn)：凍干法保藏是在低溫，干燥和隔絕空氣的條件下，使病毒處于休眠狀態(tài)，它的代謝是相對靜止的，因而使病毒可以保存較長的時(shí)間。7. 試述微生物保管規(guī)則和制度?！敬鸢浮? （1）菌種應(yīng)專人負(fù)責(zé)保管，并由部門負(fù)責(zé)人經(jīng)常督促檢查。若因工作變動，應(yīng)及時(shí)作好全面交接工作。（２）菌種應(yīng)保存于安全的地方，所用冰箱等保存容器均應(yīng)加鎖。若要運(yùn)輸或攜帶必須置于金屬罐內(nèi)密封，由專人領(lǐng)取。（3）菌種必須設(shè)記錄卡，內(nèi)容包括菌種名稱、編號、來源、分離日期、鑒定日期、鑒定者、鑒定結(jié)果、傳代情況及所用培養(yǎng)基，保存方法、溫度、轉(zhuǎn)移及銷毀情況和原因、保存者、部門負(fù)責(zé)人等。（4）保存的菌種應(yīng)于規(guī)定時(shí)間定期移種，每移種三代作一次鑒定。如發(fā)現(xiàn)污染或變異應(yīng)及時(shí)處理。（5）實(shí)驗(yàn)室用培養(yǎng)基保存菌種時(shí)，應(yīng)保存兩套，一套供保存?zhèn)鞔?；另一套供日常?yīng)用。（6）菌種保存范圍，轉(zhuǎn)移和銷毀等必須嚴(yán)格遵守衛(wèi)生部有關(guān)規(guī)定。（7）培養(yǎng)菌種的試管和干燥菌種的安瓿上應(yīng)貼標(biāo)簽，寫明編號、菌名及日期。8. 試列舉出6個(gè)菌種保藏機(jī)構(gòu)?！敬鸢浮? American Type Culture Collection(ATCC) 、Japan Collection of Microorganisms、German Collection of Microorganisms and Cell Cultures、Centraalbureau voor Schimmelcultures、Belgian Coordinated Collections of Microorganisms、中國微生物菌種保藏管理委員會(CCCCM)。（劉運(yùn)德）第六章 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的全面質(zhì)量管理一、名詞解釋1. 室內(nèi)質(zhì)量控制【答案】 室內(nèi)質(zhì)量控制（Internal quality control ，IQC） 是實(shí)驗(yàn)室人員嚴(yán)格按照規(guī)定所執(zhí)行的，確保整個(gè)檢測過程中所使用的試劑、設(shè)備和所執(zhí)行的操作符合既定要求的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。室內(nèi)質(zhì)量控制應(yīng)該貫穿于標(biāo)本進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室到檢測結(jié)果出來的整個(gè)檢測過程。2. 室間質(zhì)量評估【答案】 室間質(zhì)量評估（External Quality Assessment，EQA）是實(shí)驗(yàn)室以外的有一定資質(zhì)的機(jī)構(gòu)組織實(shí)施的，通過比較不同實(shí)驗(yàn)室之間檢測結(jié)果的差異，對實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)行第三方評價(jià)，EQA又稱作比對試驗(yàn)（proficiency testing ,PT）。EQA 是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量認(rèn)可的需要，可有效評價(jià)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的水平,同時(shí)也是對室內(nèi)質(zhì)量控制的有效檢驗(yàn)，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加與本實(shí)驗(yàn)室有關(guān)的EQA 計(jì)劃，并獲得滿意的成績。二、填空題1. 微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的質(zhì)量控制內(nèi)容包括標(biāo)本的正確 、 、 。2. 藥敏試驗(yàn)用MH瓊脂的厚度為 。3. 西蒙枸櫞酸瓊脂質(zhì)量控制時(shí)，通常選肺炎克雷伯菌作為 質(zhì)控菌株，培養(yǎng)后呈 ，選大腸埃希菌作為陰性質(zhì)控菌株，培養(yǎng)后仍保持 。4. 常規(guī)紙片法藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控制菌株為 、 和 。5. 室間質(zhì)量評估的基本模式有 和 。6. 分析后質(zhì)量管理的主要內(nèi)容是 的質(zhì)量管理和為醫(yī)護(hù)人員和患者提供與項(xiàng)目結(jié)果有關(guān)的滿意的 服務(wù)【答案】1. 采集，保存，標(biāo)識，運(yùn)送。2. 4 mm。3. 陽性，藍(lán)色，陰性，綠色。4. 大腸埃希菌 ATCC 25922，金黃色葡萄球菌 ATCC 2592