【文章內容簡介】 用是可逆的還是不可逆轉的、它們是否可以預防的、（如果可能的話）毒理學作用機制的確定，是重要的。使藥物在人類的血中濃度和各種動物物種的血中濃度的響應建立相互關聯也是重要的。 對于人在候選藥物評價所需的毒理學研究，將與所推薦的臨床應用時的給藥途徑和臨床研究的治療持續(xù)時間有關。劑量的大小和使用頻率，以及毒理學研究的持續(xù)時間在人體獲準測試的主要決定因素。許多國家，包括英國、美國、澳大利亞和北歐國家，都有涉及在人類治療持續(xù)時間和需要在兩個物種中進行的毒性研究的時間長短的監(jiān)管指南。指南的要點引用在隨后的章節(jié)里。 最初，增加測試物質劑量的藥理作用建立于少量動物的急性毒性研究，一般采用兩種給藥途徑（一種用于人體）。（所得的）結果給隨后的慢性毒性試驗，提供了一個最大耐受劑量的參考值，有助于劑量水平的選擇，以及確定靶標器官。 隨后的亞急性毒性試驗的主要目的是確定候選藥物在動物長期給藥后是否有足夠的耐受性，從而作為對人類可能產生的不良反應的參考。使用與人相同的給藥途徑，在先于人的該化合物的給藥前，兩個物種（一個為非嚙齒類）的兩到四個星期（每日劑量）的研究是必需的。三個劑量水平通常是必要的：每天的低劑量應是所期望的治療劑量的低一數量級，最高劑量應顯示出一定的毒性。 評價新化學實體的通用指南應該是一個為期14天以上毒理學研究需要支持正常的志愿者在第I階段的單劑量接觸一個新的候選藥物。支持7至10天時間的臨床研究，要求為期30天的毒理學研究。而超過7至10天直至30天的臨床研究則需要有至少90天的毒理學研究的支持。 這些要求應在計劃藥物開發(fā)之前就明確說明。未來臨床試驗的持續(xù)時間和大概的時序安排需要提前好好地深思熟慮，以便做好安排并進行適當的毒理學研究，以支持臨床計劃并避免任何延誤。 兩種類型的安全測試是用來檢測候選藥物在人體產生腫瘤的能力。第一類是短期的體外遺傳毒性試驗，例如細菌試驗。第二類是是在小鼠和大鼠身上進行的動物長期致癌性研究；他們往往二年的時間長度覆蓋了動物壽命的很大一部分。小鼠和大鼠的使用，因為他們的壽命相對較短，體積小，容易獲得。此外，有關這些物種的特定種族的自發(fā)疾病及腫瘤所積累的知識，大大有助于解釋研究結果。 開展長期毒理學和致癌性研究是為了獲得試驗的批準，并最終向市場推出了人類長期服藥的產品。這些研究可能需要在后期臨床前/早期臨床階段就開始，以“支持”隨后的臨床計劃。長期毒性試驗通常包括兩個物種（一個為非嚙齒類）的612個月持續(xù)時間的毒性研究。以前測試到的任何毒性會進行更密切地調查，例如在血液樣本中觀測到額外的酶。生殖毒理學則是指涉及化合物對繁殖能力、胎兒畸形，產后發(fā)育的影響的部分毒理學。在育齡婦女的臨床研究之前，監(jiān)管部門要求有兩個物種（通常是大鼠和家兔）以及男性志愿者的臨床資料畸形學的數據。在男性受試者的臨床研究之前，則不要求生殖方面的數據。化合物對生殖的影響隨著暴露發(fā)生的生殖周期而不同，要設計研究來觀測這些階段。要設計畸形學研究來檢測胎兒畸形，生殖研究來調查化合物對繁殖性能的影響，產前和產后研究來研究幼崽的發(fā)育。第六單元 從茶葉中提取咖啡因 在本實驗中，將從茶葉中提取咖啡因。分離時存在的主要問題在于：咖啡因在茶葉中并非單獨存在，而是伴隨有其他的天然物質，故咖啡因必須與這些物質分離開來。茶葉的主要成分是纖維素，是所有植物細胞的主要結構材料。由于纖維素幾乎不溶于水，故在分離操作過程中不會產生問題。另一方面，咖啡因是水溶性的，是被提取到被稱為“茶”的溶液里的主要物質之一。在茶類植物的樹葉材料中，咖啡因的組成高達5%重量。單寧也溶于用于提取茶葉的熱水中。單寧這個術語并不是指一個單一均勻的化合物，或甚至一些具有相似化學結構的物質。它是指一類具有某些共同屬性的化合物。 丹寧是分子量在500至3000之間的酚類化合物。它們被廣泛用于“鞣制”皮革。他們能將生物堿和蛋白質從水溶液中沉淀析出。丹寧通常分為兩類：能被水解的丹寧和不能被水解的丹寧。 存在于茶葉中的第一種類型的丹寧，水解時通常會產生葡萄糖和五倍子酸（沒食子酸）。這類丹寧是五倍子酸和葡萄糖的酯。它們代表著葡萄糖中的幾個羥基被二糅?；セ慕Y構。存在于茶葉中的非水解性的丹寧是兒茶酸的縮合聚合物。這些聚合物的結構不一一致，但兒茶酸分子通常都以在環(huán)的4和8位（成鍵）而連接在一起。 當丹寧被萃取到熱水里，能水解的部分發(fā)生部分水解，這意味著游離的五倍子酸存在于茶中。丹寧，由于它們的酚羥基；五倍子酸有羧基，兩者都是酸性的。如果把碳酸鈣，一種堿，加到茶水中，就形成這些酸的鈣鹽。用氯仿可以從堿性茶溶液中萃取出咖啡因，但五倍子酸和丹寧的鈣鹽都不溶于氯仿，因而留在水溶液中。 茶溶液的褐色是由于黃酮類色素、葉綠素，以及他們各自的氧化產物所造成的。葉綠素雖然有點溶于氯仿，但茶葉中的其它物質大多數都不溶。因此，堿性茶溶液的氯仿萃取層可以得到幾乎純凈的咖啡因。氯仿（沸點61oC）很容易蒸餾祛除去而留下咖啡因粗品。咖啡因可用重結晶法或升華法來純化。在本實驗的第二部分中，咖啡因會被轉化為一種衍生物?；衔锏囊环N衍生物是通過一個簡單的化學反應由原始化合物形成的第二種化合物，具有已知的熔點。試圖明確鑒定一個有機化合物時，往往是習慣性地將它轉化成一個衍生物。如果第一個化合物，此處為咖啡因，和它的衍生物都與在化學文獻（例如，一本手冊）已報道的熔點相匹配，就可以認為其間決不能存在巧合，而最初化合物——咖啡因的身份也就被確切地證實（確證）了。 咖啡因是一種堿，能與酸反應生成鹽。使用水楊酸制成咖啡因的衍生鹽，即咖啡因水楊酸鹽，以鑒定從茶葉分離出來的咖啡因的身份。特別說明 處理氯仿時要小心。它是一種有毒溶劑，你不應該過度呼吸它或把它濺在自己身上。當丟棄廢茶葉，不要將其放在水槽里，因為它們會阻塞排水管。應將它們丟入垃圾容器。 程序 在一個裝有回流冷凝器的500 ml三頸圓底燒瓶中放入25 g干茶葉，25 g碳酸鈣粉末和250 ml水。塞住燒瓶中未使用的開口，回流加熱混合物20分鐘左右。使用本生燈加熱。乘熱將溶液用槽紋濾紙靠重力過濾，使用諸如E＆D 617和S ＆S 595號快速濾紙。如果有堵塞，就需要更換濾紙。冷卻過濾（過濾液體）到室溫，用分液漏斗將此濾液用每份25ml 氯仿提取兩次。合并的兩份氯仿于100ml 圓底燒瓶中，組裝一個簡單的蒸餾裝置，通過蒸餾除去氯仿。使用熱蒸汽浴加熱。蒸餾燒瓶中的殘留物含有咖啡因和可按如下（結晶法）中所述進行提純。保存蒸餾出的氯仿。在下一步中會使用一些氯仿。剩余的氯仿應放置在一個收集容器中。結晶（純化） 將氯仿萃取茶溶液操作中所得到的殘渣，溶于你從萃取從蒸餾操作中所保存的10m1 氯仿中。它可能需要在蒸氣浴上加熱混合物。將溶液轉移到一個50ml 燒杯中。再用5m1 氯仿燒沖洗燒瓶，并將其并入到燒杯中。在通風櫥里將現在呈淺綠色的溶液在蒸汽浴上加熱蒸發(fā)至干。 蒸發(fā)氯仿所得到的殘渣再通過混合溶劑法來結晶。將殘渣溶解在少量（約24 ml）熱苯中，并添加剛好足量的高沸點(60 oC to 90 oC)石油醚（或輕汽油）以使溶液變成輕微渾濁狀。另外，丙酮也可用于簡單的結晶，而無需第二中溶劑。冷卻溶液，用赫爾什漏斗通過真空過濾收集晶狀產品。如果有必要，可采用相同的方法將產品再次結晶，并讓產品在吸濾漏斗中保持（即抽濾）一段時間至干。稱重產品。以茶葉為基準，計算