谷胱甘肽生物轉(zhuǎn)化研究(編輯修改稿)
2025-05-01 23:52 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 g/ml菌體等量加入4種不同pH轉(zhuǎn)化液中，溫度37℃搖床轉(zhuǎn)速180r/min，6小時(shí)后測(cè)轉(zhuǎn)化液GHS產(chǎn)量。發(fā)酵液按100mg/，取250ml瓶4個(gè)，每瓶加入15ml含濕菌的TLo轉(zhuǎn)化液，搖床設(shè)定37℃、180r/min，轉(zhuǎn)化時(shí)間為3h、6h、9h、12h后各取出一瓶測(cè)轉(zhuǎn)化液GHS產(chǎn)量。 按100mg/，取250ml的三角瓶4個(gè)，每瓶用移液管移取15ml含濕菌轉(zhuǎn)化液，放入溫度為37℃轉(zhuǎn)速分別設(shè)為150r/min、180r/min、200r/min、230r/min的搖床，轉(zhuǎn)化6h然后測(cè)轉(zhuǎn)化液GHS產(chǎn)量。離心除去發(fā)酵液，對(duì)濕菌進(jìn)行分步同時(shí)實(shí)驗(yàn)如下: TLo轉(zhuǎn)化液15ml，用超聲波破壁20min，試驗(yàn)號(hào)記為d搖勻用超聲波破壁10min，加轉(zhuǎn)化液至30ml（即含濕菌100mg/ml）分入兩個(gè)三角瓶，15ml/瓶，試驗(yàn)號(hào)記a、ba放入冰箱冷凍，b、c、d放入37℃ 速200r/min搖床轉(zhuǎn)化6h后，C用超聲波破壁10min后和b、c、d同時(shí)以3500r/min離心機(jī)離心15min 測(cè)轉(zhuǎn)化液GHS產(chǎn)量。 轉(zhuǎn)化化學(xué)因素的研究 用正交試驗(yàn)方法對(duì)轉(zhuǎn)化液中葡萄糖、MgCl底物氨基酸的濃度的比例進(jìn)行優(yōu)化。酶激活劑一般以無(wú)機(jī)鹽離子為主，本文選用生物實(shí)驗(yàn)中常用無(wú)機(jī)鹽微量元素進(jìn)行研究，欲尋找能激活胞內(nèi)谷胱甘肽酶的微量元素。 微量元素的種類(lèi)和濃度 Species and consistency of micromineral編號(hào) 12345678化合物名稱(chēng)H3BO3CoCl2FeCl3ZnSO4MnCl2(NH4)6Mo7O24CuSO45N2OCaCl2化合物濃度(mg/L)在發(fā)酵進(jìn)行到18h時(shí)，用離心機(jī)離心得具有最大酶活的濕菌，按100mg濕菌/ml加入新配制的轉(zhuǎn)化液，分裝入9個(gè)三角瓶，15ml/瓶，編號(hào)08，0號(hào)為對(duì)照樣不加其他微量元素，18號(hào)按表1加入微量元素。轉(zhuǎn)化后測(cè)GSN含量。 轉(zhuǎn)化生物因素的研究二步轉(zhuǎn)化①、c的實(shí)驗(yàn)三角瓶制做方法加新配制轉(zhuǎn)化液轉(zhuǎn)化后記編號(hào)為ac1 。 測(cè)a1（只發(fā)酵不轉(zhuǎn)化）和c1（發(fā)酵后轉(zhuǎn)化一步）的GSM產(chǎn)量。②c1用轉(zhuǎn)速3500r/min離心15min后去除第一步轉(zhuǎn)化時(shí)的殘菌體，上清液繼續(xù)按100mg/ml 加入發(fā)酵成熟的新菌種，取3個(gè)三角瓶，15mg/瓶編號(hào)H1，H2，H3進(jìn)行第二步轉(zhuǎn)化，測(cè)GSN產(chǎn)量。3 結(jié)果與討論： 物理因素對(duì)GSH產(chǎn)量的影響: 轉(zhuǎn)化溫度對(duì)GSH產(chǎn)量的影響： 溫度上升對(duì)GSH產(chǎn)量的影響 Effect of increased temperature on production of GSH pH改變對(duì)GSH產(chǎn)量的影響 Effect of changed pH on production of GSH在轉(zhuǎn)化過(guò)程中選擇一般適合細(xì)菌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)室有培養(yǎng)箱的幾個(gè)溫度點(diǎn)如28℃、30℃、37℃、50℃進(jìn)行轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表2),GSH在溫度較低時(shí)隨溫度升高而增加，37℃時(shí)產(chǎn)量達(dá)到最大，溫度再升高，到50℃GSH的產(chǎn)量下降了。這表明，在37℃谷胱甘肽合成酶具有最大活性。如有機(jī)會(huì)可進(jìn)行37℃—50℃之間的溫度試驗(yàn)，以尋找更精確的溫度點(diǎn)。編號(hào)pH1pH2pH3pH4pHA305C(mg/L)編號(hào)T1T2T3T4T(℃)28303750A305C(mg/L) 轉(zhuǎn)化液pH對(duì)GSH產(chǎn)量的影響: 試驗(yàn)結(jié)果顯示（見(jiàn)表3）,pH從弱酸性到中性過(guò)程,。 轉(zhuǎn)化時(shí)間對(duì)GSH產(chǎn)量的影響：編號(hào)R1R2R3R4轉(zhuǎn)速(r/min)
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