微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱(編輯修改稿)
2025-05-01 23:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)番紅復(fù)染后就成紅色。G＋菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的顏色。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容革蘭氏染色法基本步驟：制片→初染→媒染→脫色→復(fù)染→鏡檢；染色成敗原因分析；實(shí)驗(yàn)操作考核一。實(shí)驗(yàn)材料和用品材料：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌；用品：學(xué)生顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦鏡紙；革蘭氏染色液(結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95％乙醇、番紅液)。（六）實(shí)驗(yàn)六 細(xì)菌的芽孢染色法目的要求學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法。觀察芽孢的形態(tài)特征：形狀、大小及著生位置。實(shí)驗(yàn)原理芽孢染色法是利用芽孢和菌體對(duì)染色體的親合力的不同的原理，用不同的染色體進(jìn)行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。芽孢壁厚，透性低，著色、脫色均較困難，所以我們必須采取著色力強(qiáng)、濃度高的孔雀綠染液（5%）進(jìn)行染色：染色過程中延長(zhǎng)染色時(shí)間，10分鐘（一般為2～3分鐘）并且在加熱條件下進(jìn)行染色。進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染料則難以透出，若再利用復(fù)染液進(jìn)行復(fù)染，此時(shí)菌體就被染成紅色，而芽孢難以著色，仍呈綠色。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容涂片：將培養(yǎng)24小時(shí)枯草桿菌作涂片、干燥、固定。 染色：2cm濾紙片，在上面滴加5～6滴孔雀綠（不易過多，以鋪滿濾紙為宜），用鑷子加在載玻片在火焰上徐徐加熱，使燃料冒蒸汽（但不沸騰），切勿使燃料蒸干，隨時(shí)添加染色液，保持10分鐘（從冒蒸汽時(shí)開始計(jì)時(shí)）。 沖洗：取下冷卻，取掉濾紙，沖洗至孔雀綠不再退色為止。 復(fù)染：用番紅液復(fù)染1～2分鐘，水洗，氣干。 鏡檢：待干燥后，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。實(shí)驗(yàn)材料和用品材料：枯草芽孢桿菌12d牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物、梭狀芽胞桿菌12d牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物；用品：5％孔雀綠水溶液、%番紅水溶液、無菌水、香柏油、二甲苯；普通光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙、綢布、酒精燈、載玻片、接種針、培養(yǎng)皿、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、試管夾等。 （七）實(shí)驗(yàn)七 細(xì)菌鞭毛染色及運(yùn)動(dòng)性觀察目的要求學(xué)習(xí)并初步掌握鞭毛染色法，觀察細(xì)菌鞭毛的形態(tài)特征；學(xué)習(xí)用壓滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。實(shí)驗(yàn)原理鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)“器官”，細(xì)菌是否具有鞭毛，以及鞭毛著生的位置和數(shù)目是細(xì)菌的一項(xiàng)重要形態(tài)特征。細(xì)菌的鞭毛很纖細(xì)，～，所以，除了很少數(shù)能形成鞭毛束(由許多根鞭毛構(gòu)成)的細(xì)菌可以用相差顯微鏡直接觀察到鞭毛束的存在外，一般細(xì)菌的鞭毛均不能用光學(xué)顯微鏡直接觀察到，而只能用電子顯微鏡觀察。要用普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)菌的鞭毛，必須用鞭毛染色法。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容硝酸銀染色法染色；壓滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。實(shí)驗(yàn)材料和用品材料：變形桿菌；用品：學(xué)生顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦鏡紙；鞭毛染色液(鞭毛染色液A、鞭毛染色液B)。（八）實(shí)驗(yàn)八 酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別目的要求觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別。實(shí)驗(yàn)原理酵母菌是不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，其大小通常比常見細(xì)菌大幾倍甚至十幾倍。美藍(lán)是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞是無色的、而死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，借此即可對(duì)酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別。實(shí)驗(yàn)材料和用品材料：釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；用品：學(xué)生顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)；％％呂氏堿性美藍(lán)染色液。（九）實(shí)驗(yàn)九 霉菌的形態(tài)觀察目的要求學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法；初步了解霉菌的形態(tài)特征。實(shí)驗(yàn)原理霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察：霉菌可產(chǎn)生復(fù)雜分枝的菌絲體，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多(約為3～10微米)，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容霉菌的觀察（試管直接觀察法）。實(shí)驗(yàn)材料和用品材料：細(xì)黃鏈霉菌或青色鏈霉菌、黑曲霉、根霉；用品：學(xué)生顯微鏡、體視鏡、酒精燈、載玻片、鑷子等。（十）實(shí)驗(yàn)十 培養(yǎng)基的配制與滅菌目的要求了解培養(yǎng)基的配制原理；通過對(duì)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用。基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有牛肉膏，蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCl提供無機(jī)鹽。由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使
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