【文章內容簡介】 中已測不出質粒，這種現(xiàn)象叫 。119．pBR322是一種改造型的質粒，它的復制子來源于 ，它的四環(huán)素抗性基因來自于 ，它的氨芐青霉素抗性基因來自于 。120．質粒的消失同染色體基因的突變是不同的，前者不能恢復，后者可以通過 恢復該基因的性狀。121．Co1El質粒復制的起始需要三種酶，即 、 和 。122．YAC的最大容載能力是 ，BAC載體的最大容載能力是 。123．pSC101是一種 復制的質粒。124．把那些沒有可檢測表型的質粒稱為 。125．轉座子主要由下列部分組成：(l) （2） (3) 。126. pUC18質粒是目前使用較為廣泛的載體。 pUC系列的載體是通過 和 兩種質粒改造而來。它的復制子來自 ， Amp抗性基因則是來自 。，符號Ω表示 ；符號A表示 。，主要有兩方面的原因：一是 ；二是 。 DNA噬菌體是φX174，DNA長5386個堿基對，共 個 基因，為一環(huán)狀 DNA分子，基因組的最大特點是 。 DNA為 kb，有 多個基因。在體內，它有兩種復制方式，擴增時(早期復制)按 復制，成熟包裝(晚期復制)則是按 復制。它有一個復制起點，進行 向復制。λ噬菌體的 DNA既可以以線性存在又可以環(huán)狀形式存在，并且能夠自然成環(huán)。其原因主要是在λ噬菌體線性DNA分子的兩端各有一個 個堿基組成的天然粘性末端。這種粘性末端可以自然成環(huán)。成環(huán)后的粘性末端部位就叫做 位點。，將野生型λ噬菌體的基因組 DNA改造成插入型載體，該載體的最小分子大小約為 kb，插入的外源片段最大不超過 kb。，主要原因是 和 。(cosmid)是質粒噬菌體雜合載體，它的復制子來自 、cos位點序列來自 ，最大的克隆片段達到 kb。，即插入型和取代型。從酶切點看，插入型為 個， 取代型為 個。 DNA不宜作為基因工程載體，原因是：(1) (2) (3) 。：(1) （2） (3) 。 DNA共同構成的，其中來自質粒的主要結構是 ，而來自噬菌體的主要結構是 。 IG區(qū)有三個最重要的功能，即(l) (2) (3) 。 M13有10個基因，分為三個功能集團，其中與復制有關的兩個基因是： 和 。，起始 DNA的長度是不同的，前者為 kb后者為 kb。，插入外源 DNA片段后，總的長度應在噬菌體基因組的 的范圍內。，如細菌中的 HB101菌株及 JM系列的宿主菌所含核酸酶的活性比 DHl、 LE392等菌株 。143. SDS是分離DNA時常用的一種陰離子除垢劑，它有四個作用： (1) ； (2) ； (3) ； (4) 。，用酚抽提細胞 DNA時，具有兩方面的作用：(1) (2) ?！确鲁樘?DNA時，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少許異戊醇。這是因為：異戊醇 。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含 DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維 持穩(wěn)定。，蛋白水解酶 K具有兩個顯著的優(yōu)點：(1) (2) 。 DNA時要使用金屬離子整合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是 。 DNA時，通常要在DNA溶液中加入單價的陽離子，如 NaCl和 NaAc，其目的是 。 DNA的方法有：(1) 。(2) 。(3) (4) 。 DNA:4～5℃、—20℃、—70℃，其中以 最好。 109細胞／ml時，即可通過離心收 集菌體。收集菌體使用定角轉子，離心的速度以 為宜。：(1) 。(2) 。 (3) 。(4) 。 DNA聚合酶得到的 PCR反應產物不是平末端，而是有一個突出堿基末端的雙鏈DNA分子。根據這一發(fā)現(xiàn)設計了克隆 PCR產物的 。 SDS分離 DNA時，要注意 SDS的濃度，0．1％和 l級的 SDS的作用效果是不同的，前者 ，后者 。，二者的原理是不同的，前者是根據 ，后者則是根據 。 DNA分離過程中，通常要進行透析，其目的是 。 DNA的菌體培養(yǎng)過程中，加入氯霉素有兩個好處：(1) (2) 。 DNA分離過程中造成 DNA分子斷裂的因素很多，主要有(1) (2) (3) 。 DNA時，常用 法、 法、 法 及 法等方法去除蛋白質。 DNA保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 作用。，改變基因中堿基的組成，以達到 的技術稱為 。，英國劍橋大學的 第一個合成了具有3’，5’—磷酸二酯鍵的 TpT和 pTpT，為此獲得了 年的諾貝爾獎。 除去 DNA溶液中的氯化絕。 cDNA的合成中要用到 S1核酸酶，其作用是切除在 。，常常要用到 dI(次黃嘌呤)，原因是 。 DNA時，要戴手套操作，原因是 。 DNA的原理是 。 PCR主要是根據蛋白質的氨基酸序列設計 引物來合成相應的基因。 DNA時，選用 CsCl作介質的優(yōu)點是： (1) (2) ，從而使不同分子量的 DNA分子得以分開。 。 Bal 31作系列缺失突變，得到的產物是： 。 NaCl和檸檬酸鈉組成的試劑，其中 NaCl的作用是使 ，而檸檬酸鈉的作用是 。％的8—羥基喹啉及少量β硫基乙醇，不僅可以防止酚的氧化，還可以 的活性及 作用。 HB101及其衍生株不宜用煮沸法分離質粒 DNA，其原因是 。：(1)第一層是 ； (2)第二層涵義是 ； (3)第三層涵義就是 。，必須考慮其表達的三個基本條件： (1) (2) (3) (4) 。： 、 、 。 。：(1) (2) (3) (4) 。(blunt end ligation)的連接效率比粘性末端連接的效率低得多，所以通常在連接反應體系中適量添加促進大分子凝聚的凝聚劑，以提高平末端 DNA連接的效率。常用的凝聚劑是 。181．一個細菌的表面大約有 個同 DNA結合的位點。182．1984年，Hung和 Wesink發(fā)現(xiàn)如果兩個不同的5’粘性末端通過部分填補得到如下的單鏈突出末端，即可有效地相互連接：(1) (2) (3) 。183．將含有外源基因組一個酶切片段的質粒稱之為含有一個 ，各種此類質粒的集合體稱之為構建了一個 。184．將含有一個 mRNA的 DNA拷貝的克隆稱作一個 ，源于同一批RNA制備 物的克隆群則構建了一個 。185．在構建 CDNA克隆之前，可以用 來富集一特殊的核苷酸序列。做法是：用來自于能夠產生目的蛋白的細胞 mRNA分子同來自于另一類型細胞(不產生這種 蛋白質，但親緣關系密切)的過量 mRNA分子雜交。186．一旦克隆了一個遺傳定位的基因，就可以用 技術來鑒定基因組DNA文庫中與之相鄰的基因克隆。187．只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用 可以將這段 DNA進行百萬倍的擴增。188．SD序列是 mRNA分子中同 結合的序列，其結構特征是 的全部或一部分。189．環(huán)狀質粒的轉化效率很低，通常是線性雙鏈 DNA轉化效率的 。190．cDNA技術是進行真核生物基因克隆的一種通用方法，因為它可以用 為模板通過反轉錄合成一個雙鏈的、無 的基因，因而有利于在原核細胞中進行功能