高效液相色譜法ppt課件(編輯修改稿)
2025-03-20 11:26 本頁面
【文章內容簡介】 基質的表面。 ? 微孔型（或凝膠型） ? 大孔型（全多孔型） ? 薄殼型 ? 表面多孔型 圖 811 3. 填料的物理結構 數(shù)據處理系統(tǒng)與自動控制單元 又稱色譜工作站。它可對分析全過程（分析條件、儀器狀態(tài)、分析狀態(tài)）進行在線顯示，自動采集、處理和儲存分析數(shù)據。一些配置了積分儀或記錄儀的老型號液相色譜儀在很多實驗室還在使用，但近年新購置的色譜儀，一般都帶有數(shù)據處理系統(tǒng)，使用非常方便。 數(shù)據控制系統(tǒng) 將各部件與控制單元連接起來，在計算機上通過色譜軟件將指令傳給控制單元，對整個分析實現(xiàn)自動控制，從而使整個分析過程全自動化。也有的色譜儀沒有設計專門的控制單元，而是每個單元分別通過控制部件與計算機相連，通過計算機分別控制儀器的各部分。 自動控制單元 液相色譜分離模式 原理 固定相 流動相 基于被測組分在固定相表面具有吸附作用，且各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產生保留和實現(xiàn)分離。 固定相通常是活性硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固體吸附劑。 弱極性有機溶劑或非極性溶劑與極性溶劑的混合物 硅羥基呈微酸性，易與氫結合，是吸附的活性點 .。流動相溶劑在吸附劑表面形成單分子或雙分子吸附層，當樣品分子進入色譜柱，樣品主要靠氫鍵結合力吸附到硅羥基上，與流動相分子競爭吸附點。樣品分子反復地被吸附，又反復地被流動相分子頂替解吸，隨著流動相的流動而在柱中向前移動。因為不同的樣品分子在固定相表面的吸附能力不同，因而吸附 解吸的速度不同，被洗脫的時間也就不同，使得各組分相互分離。 吸附色譜在早期的 HPLC中應用得最多，現(xiàn)在，很多以前用吸附色譜分離的物質被更方便和更有效的化學鍵合相反相分配色譜所代替。由于硅羥基活性點在硅膠表面常按一定幾何規(guī)律排列，因此吸附色譜用于結構異構體分離和族分離仍是最有效的方法。如農藥異構體分離、石油中烷、烯、芳烴的分離。 （一）分配色譜 原理 基于樣品分子在流動相和固定相間的溶解度不同 鍵合固定相 以化學鍵合將功能分子結合到惰性載體上。 極性鍵合固定相 鍵合在載體表面的功能分子極性基團的有機分子 非極性鍵合固定相 鍵合在載體表面的功能分子是非極性有機分子。 正相 HPLC 由極性固定相和非極性流動相所組成的 HPLC體系 。 反相 HPLC 非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系 （二）凝膠色譜 （ gel chromatography） 以多孔性物質作固定相，樣品分子受固定相孔徑大小的影響而達到分離的分離模式。樣品分子與固定相之間不存在相互作用力（吸附、分配和離子交換等）。比固定相孔徑大的溶質分子不能進入孔內，迅速流出色譜柱，不能被分離。比固定相孔徑小的分子進入孔內而產生保留，溶質分子體積越小，進入固定相孔內的機率越大，停留（保留）的時間也就越長 圖 812 原理 ◆ 固定相 ： 化學惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝膠、親水凝膠、無機多孔材料。 ◆ 流動相： 在凝膠色譜中，流動相的作用不是為了控制分離，而是為了溶解樣品或減小流動相粘度。 ◆ 凝膠過濾色譜（ gel filtration chromatography, GFC）： 以水或緩沖溶液作流動相的凝膠色譜法。主要適合于水溶性高分子的分離。 ◆ 凝膠滲透色譜（ gel permeation chromatography, GPC）： 以有機溶劑作流動相的凝膠色譜法。主要適合于脂溶性高分子的分離。如甲苯和四氫呋喃能很好地溶解合成高分子，所以 GPC主要用于合成高分子的分子量（分布）的測定。 （三）離子色譜 （ ion chromatography, IC） IEC使用的是低交換容量的離子交換劑，這種交換劑的表面有離子交換基團。帶負電荷的交換基團（如磺酸基和羧酸基）可以用于陽離子的分離，帶正電荷的交換基團可以用于陰離子的分離。 圖 813 1離子交換色譜法 ICE的分離機理是以樹脂的Donnan排斥為基礎的分配過程。分離陰離子用強酸性高交換容量的陽離子交換樹脂，分離陽離子用強堿性高交換容量的陰離子交換樹脂。 圖 814 2離子排斥色譜法 離子對色譜 (IPC)也稱離子相互作用色譜，是在流動相中加入適當?shù)木哂信c被測離子相反電荷的離子，即 離子對試劑 ，使之與被測離子形成中性的離子對化合物，此離子對化合物在反相色譜
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