薄層色譜法ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-31 12:08 本頁面
【文章內容簡介】 ent） (7) 梯度展開（ gradient development） 27 6 展開操作 目的是使展開槽被展開劑蒸氣飽和并使展開劑組成不變。 為避免 “ 邊緣效應 ” ，在薄層板用展開劑蒸氣飽和有時是必要的。 常規(guī)薄層最長展距為 20cm。高效薄層展距最長為 10cm。 28 展距對結果的影響，硅膠 HPTLC 分離洋甘菊油， a） 3 cm、 b） 5 cm、 c） 7 cm、 d） 9 cm。 展距對結果的影響 29 (六 )薄層層析的定性檢測 展開完畢后，把薄層從層析缸中取出，用鉛筆劃出或小針刺出展開劑前緣的位置，隨即進行顯色，以確定各個斑點的位置、 Rf值和顯色情況，從而判斷試樣中含有哪些組分。 有色物質經展開后呈現明顯的色斑，很易判斷。 對于無色物質，可根據化合物的性質，用 物理檢出法 、 化學檢出法 、 酶與生物檢出法 和 放射性檢出法 進行顯色。 1 物理檢出法 1 .紫外光 一般來說，對于未知化合物，展開后在用顯色劑以前，都應先在紫外燈下進行察看。紫外光常用兩種波 254nm與 365nm。 如果化合物能吸收紫外光同時放出熒光，可用此熒光定位。 2. 碘 元素碘的最大特點是與物質的反應往往是可逆的，當化合物定位以后在空氣中放置時，碘即升華揮去，可以回到組分的原來狀態(tài)，有利于薄層的進一步處理。 3. 水 水可作為一種非破壞性顯色劑，用于硅膠薄層，當許多憎水性化合物展開后，用水噴薄層板，對光觀察，在半透明的薄層板上，顯出白色不透明的斑點。 化學檢出法是在薄層上使用一種或數種化學試劑與被檢出物質反應，生成有顏色的化合物而定位。這種試劑叫 顯色劑。 顯色劑 一般分為兩類，即通用顯色劑和專屬性顯色劑。 1 通用顯色劑 (1) 濃硫酸或 50%的硫酸溶液：極大多數有機物質，噴此種顯色劑后立刻或在加熱到 110—120℃ 并經數分鐘后出現棕色到黑色斑點。 (2) 酸堿指示劑溶液：例如 %溴甲酚綠甲醇溶液，在綠色背景上顯現黃色斑，表示是脂肪族羧酸。 常用的通用顯色劑還有： 5%磷鉬酸乙醇、 堿性高錳酸鉀溶液、硝酸銀 氫氧化銨試劑、熒光顯色劑等。 2 專屬性顯色劑 指能使某一類或少數幾類官能團或化合物顯色的試劑。 例如 2%2， 4二硝基苯肼乙醇溶液噴后在 120℃ 加熱 10分鐘，醛酮在黃橙色背景上顯紅色或橙色斑。 33 3 原位化學衍生化 在色譜分析的綜合技術中，尤其對痕量組分的檢測，衍生化反應已成為重要手段之一。 在薄層色譜中，有些化合物本身無色，又無紫外吸收與熒光，同時也找不到合適的顯色劑，或者有性質近似的化合物共存很難分離，這時可考慮在原位進行適當的化學反應，使之產生紫外吸收、熒光、顯色，或使性質發(fā)生較大差異以利于分離。 34 4 生物與酶檢出法 (bioautography) 生物檢出法又稱生物自顯影法是用生物檢定法檢出薄層上具有生物效應的物質如抗生素的方法。基于檢出物質的生物活性，將薄層板與已培養(yǎng)有適當微生物的瓊脂表面接觸，并置適宜溫度的培育箱內，經過一段時間后觀察抑菌點，有抗生素斑點處的培養(yǎng)基微生物生長受到抑制，整個瓊脂板出現了抑菌點，由此抑菌點可對該抗生素組分定位。 酶檢出法實際上是一種酶抑制技術，用于薄層色譜檢出某些有機磷農藥。 35 5 放射 顯影 法（ Autoradiography） 就是用含放射性同位素的化合物在薄層上顯示位置的方法。具體方法是使薄層上同位素的輻射線透過照相底片，顯影以后由于銀粒而顯出潛影，在一定劑量范圍內，放射性物質斑點使底片所呈暗
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