【文章內(nèi)容簡介】 當嫁接到 CAM 上， ESC 能分化形成各種各樣的細胞類型，并試圖組織成復雜的結(jié)構(gòu)。另外，將 ESC 注射到未孵化的 X 期胚盤，在許多胚胎組織和生殖系中都能發(fā)現(xiàn)該 ESC 的存在，而且形成胚體和生殖系嵌合體的潛能高度依賴于培養(yǎng)條件，并隨傳代而降低。 來源于 P G C 的胚胎生殖細胞也是多能干細胞，鳥類的 PGC 主要來自于第 X 期胚胎明區(qū)的中央盤，以后這些細胞逐漸分化的過程與胚胎發(fā)育的過程相互獨立。 EG 首次發(fā)現(xiàn)于小鼠，隨后在人、雞和豬中也發(fā)現(xiàn)。作為多能干細胞的 EG 可以通過以一種非分化狀態(tài)克隆擴增以長期的自我更新，并且在體外可分化形成胚體，形成的胚體含有代表三個胚層的細胞和很少分化的祖細胞和前體細胞的混合細胞群。重要的是，證明和正常的基因組印記方式一樣 (包括 X 染色體失活 )，具有正常的穩(wěn)定的核型。 目前， EG 移植研究已經(jīng)在各種模型中展開，希望能夠確定其在治療多種人類疾病 ( 如糖尿病和泌尿系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等 )中的潛在用途。 鼠、豬和雞的 EG 表明能產(chǎn)生嵌合體動物，其中包括可生殖系遺傳的。與最終實現(xiàn)細胞治療為目的的人胚胎干細胞研究不同，雞胚胎干細胞技術(shù)最重要的應(yīng)用領(lǐng)域是以胚胎干細胞的體外培養(yǎng)與遺傳修飾為技術(shù)平臺的家禽轉(zhuǎn)基因技術(shù)。通過胚胎干細胞技術(shù)對禽類的目標基因進行遺傳修飾與操作，這在胚胎發(fā)育基礎(chǔ)研究、轉(zhuǎn)基因禽類的生產(chǎn)以及家禽育種等方面具有巨大的應(yīng)用前景。 （七）雞胚胎的研究方法 雞的胚胎具有容易獲得、與人胚相似和易于外科操作等諸多優(yōu)勢，因此一直作為經(jīng)典的胚胎生物學模型用于科學研究。雖然分子時代已經(jīng)到來，但是對禽類胚胎操作的研究方法卻仍存在著各種實驗限制，主要是執(zhí)行目的基因靶向突變或轉(zhuǎn)基因研究的困難。在過去的十幾年中，已經(jīng)發(fā)展了許多 瞬時轉(zhuǎn)基因 的方法，允許在早期胚胎發(fā)育中有效的改變靶基因的功能，即能夠使目的基因鈍化或過表達，進而使對下游相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控或胚胎衍生物的影響效果擴大化成為可能。 對短期分析研究， 電穿孔和腺病毒介導基因轉(zhuǎn)移法能夠?qū)崿F(xiàn)目的基因的轉(zhuǎn)移和瞬時表達，但轉(zhuǎn)入基因在胚胎細胞內(nèi)只能短暫停留。 雞胚的電穿孔就是將暴露組織置于一個電場中，瞬間干擾細胞膜的穩(wěn)定性，產(chǎn)生可逆的小孔，這樣核酸或它們的類似物可以通過進入胞質(zhì)。通過調(diào)整電壓參數(shù)、類型和電脈沖的過程已經(jīng)使這種方法轉(zhuǎn)染脊椎動物的胚胎變得容易可行。 對長期實驗分析， 逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的基因轉(zhuǎn)移具有特別的優(yōu)勢，另 Tol2 轉(zhuǎn)座子也能夠?qū)⒛康幕蛘系郊毎蚪M和延長轉(zhuǎn)入基因的表達時間 。 這些方法通常被用于功能獲得性或缺失性分析實驗，即過表達或在不表達的組織細胞中表達目的基因，或?qū)⒆鳛楦偁幰种谱拥娘@性負調(diào)控結(jié)構(gòu)、封閉 mRNA 翻譯或剪切的反義寡聚物 morpholino或表達 siRNA/shRNA 結(jié)構(gòu)來電穿孔進入胚胎，進而封閉或部分封閉目的基因的表達。 此外，胚胎也可通過安置蛋白包被珠法和利用活體電擊法來引入質(zhì)粒。通過利用這些實驗方法，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了胚胎中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的大量重要數(shù)據(jù)。在所有這些研究方法中，首先都必須得打開蛋殼，并且要在不干擾胚胎發(fā)育的條件下再重新封閉蛋殼。目前，較好的封孔方法是讓蛋的內(nèi)容物置于一側(cè)，在蛋殼上開一小孔，進行完實驗后利用小塊無菌蛋殼加蓋蛋孔，再用塑料膠帶或石蠟密封蛋殼，以保護和防止胚胎在后期孵化中脫水和污染。 在所有這些研究方法中，首先都必須得打開蛋殼，并且要在不干擾胚胎發(fā)育的條件下再重新封閉蛋殼。目前，較好的封孔方法是讓蛋的內(nèi)容物置于一側(cè)，在蛋殼上開一小孔，進行完實驗后利用小塊無菌蛋殼加蓋蛋孔，再用塑料膠帶或石蠟密封蛋殼，以保護和防止胚胎在后期孵化中脫水和污染。 四、雞的胚胎發(fā)育 （一）蛋形成過程中的胚胎發(fā)育 從卵巢上排出的卵子被輸卵管漏斗部接納，后與精子相遇受精。由于母雞體溫高達 ℃ ，卵子受精不久即開始發(fā)育。到蛋產(chǎn)出體外為止，受精卵約經(jīng) 24小時的不斷分裂而形成一個多細胞的胚胎。隨著卵黃的累積，生殖細胞即漸漸升到卵黃的表面恰好在卵黃膜的下面。未受精的蛋，生殖細胞在蛋形成過程中一般不再分裂，破視蛋黃表面有一白點，稱為胚珠。受精后的蛋，生殖細胞在輸卵管過程中，經(jīng)過分裂，形成中央透明、周圍暗的盤狀形原腸胚，叫胚盤。胚胎在胚盤的明區(qū)部分開始發(fā)育并形成兩個不同的細胞層，在外層的叫外胚層，內(nèi)層的叫內(nèi)胚層。蛋產(chǎn)出體外后，由于外界氣溫低于胚胎發(fā)育所需的臨界溫度，胚胎發(fā)育隨之停止。 （二）孵化期中胚胎的發(fā)育 在適宜的孵化條件下，胚胎繼續(xù)發(fā)育，直至長成雛雞破殼而出。在孵化期中發(fā)育的早期（孵化第 1～ 4天）為內(nèi)部器官發(fā)育階段；中期（孵化率第 5～ 15天）為外部器官發(fā)育階段；后期（孵化第 16～19天）為雞胚的生長階段。 種 蛋 未受精蛋 種蛋中通常被稱為“卵黃”的部分，實際上只是一個細胞，即雌性生殖細胞或卵子，卵黃絕大部分是營養(yǎng)物質(zhì)，細胞核和大部分細胞質(zhì)集中為一個不規(guī)則的小白點，懸浮于卵黃上面和卵黃膜的下面，如圖中箭頭所示，這個蛋隨經(jīng)孵化不能發(fā)育，稱未受精蛋。 受精蛋 雞的卵子在輸卵管的漏斗部與精子相遇而受精，受精卵在母體內(nèi)滯留期間不斷分裂，到種蛋產(chǎn)出體外時已經(jīng)分裂成一團細胞，此時為胚胎發(fā)育的囊胚期，從正面看囊胚像覆蓋在卵黃表面的圓盤，中央為明區(qū)，邊緣為暗區(qū)，通常成為胚盤。 1齡胚 經(jīng)過 24小時的孵育，胚盤變大變厚，明區(qū)和暗區(qū)同時增大，在卵黃上可見到橢圓形的盾壯區(qū)稱為胚盾是未來的胚區(qū)。蛋通亮，蛋白中有晃動的蛋黃陰影。胚盤邊緣出現(xiàn)許多紅點，稱“ 血島 ”。 2胚齡 胚盤已擴展一倍并被紅色的血管圍成櫻桃形或橢圓形 ， 這些血管即胚胎的卵黃囊循環(huán)的邊緣血管 —— 緣竇 。 胚盤中心有一彎曲的透明體 —— 胚胎 ，透明體中可見一搏動著的小紅點 ， 即 原始心臟 。 3齡胚 由孵化的第一天開始，蛋白中的水分通過半透明卵黃膜向卵黃中移動 ,使卵黃水分含量大增，新進來的水分并不與卵黃液全面融合而主要存于胚區(qū)。胚胎與伸展的卵黃囊血管形似蚊子，白殼種蛋通過照視可見蚊狀的血管區(qū)，俗稱“ 蚊蟲珠 ”。 4胚齡 卵黃體積繼續(xù)增大，顏