生物化學檢驗技術研究進展新(編輯修改稿)
2025-02-14 02:12 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 蛋白質(zhì)復合物在電泳時產(chǎn)生的泳動率差異，就反映了分子量的差異。在此條件下，樣品分子量的對數(shù)與其在凝膠中的遷移率呈直線關系。 ?應用 : 測定蛋白質(zhì)分子量 測定蛋白質(zhì)亞基數(shù) 等電點聚焦 ?原理： 在一定抗對流介質(zhì)（如凝膠）中加入兩性電解質(zhì)載體 (Ampholyte,是一種多氨基多羧基的混合物，由異構物和同系物組成，其 pK和pI值各自相異卻又相近），當直流電通過時，便形成一個由陽極到陰極 pH值逐步上升的梯度。兩性化合物在此電泳過程中，就被濃集在與其等電點相等的 pH區(qū)域，從而使不同化合物能按其各自等電點得到分離。 ?應用： 高效率分離純化蛋白質(zhì) 測定蛋白質(zhì)分子量 離心技術 ? 原理：離心是利用旋轉運動的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進行分離、濃縮和提純的一種方法。顆粒的沉降速度取決于離心機的轉速及其自身與中心軸的距離。不同大小、形狀和密度的顆粒會以不同的速度沉降。 電化學分析技術 ? 定義： 利用物質(zhì)的電化學性質(zhì)，測定化學電池的電位、電流或電量的變化進行分析的方法稱為電化學分析法。 ? 原理：將電極浸入待測溶液中組成原電池，其中一支電極的電極電位與待測離子的活度有關，此電極為指示電極；另一支電極是電位已知并且恒定的所謂參比電極，目前最常用的參比電極有甘汞電極和銀 氯化銀電極。 分類 ? 電位法： 測定原電池電動勢以求物質(zhì)含量 ? 電導法：測定 電阻以求物質(zhì)含量 ? 電容量法： 借助某些物理量的突變作為滴定分析終點的指示 新興技術 ?高效液相色譜分析法 ?毛細管電泳技術 ?生物芯片技術 高效液相色譜分析技術（ HPLC) 高效液相色譜法是用特制微粒（＜ 10μm ）充填的層析柱作為固定相，通過高壓使液體流動相快速通過層析柱而達到快速有效分離液相中各種物質(zhì)的層析技術。它具有分離效果好、分析速度快、檢測靈敏度高等特點。在醫(yī)藥衛(wèi)生和生物化學領域得到廣泛的應用，蛋白質(zhì)、糖類、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等大分子以及高分子聚合物都能用 HPLC測定。 典型的高效液相色譜儀包括輸液系統(tǒng)、進樣分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分。流動相用一高壓泵輸入，輸入前要先脫氣。在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動相的離子強度、pH和極性，以改變分離條件、提高分離效果、縮短分離時間。進樣可以是注射器進樣，也可以是進樣閥進樣。HPLC使用的檢測器應用最多的是紫外或紫外 可見分光檢測器，還有熒光檢測器、電化學檢測器等。 臨床應用 高效液相色譜法是目前最好的血藥濃度監(jiān)測方法，但在實際應用中還存在一些問題，如每遇到一種新藥必須摸索測定的最佳條件；各種藥物的測定條件不同，要不斷的更換流動相甚至色譜柱；每次只能測定一種藥物，至多只能測定一類藥物，無法測定性質(zhì)不同的藥物。因此，高效液相色譜法用于常規(guī)血藥濃度監(jiān)測，只適用于少量常用的某些特定藥物，大大限制了它的推廣應用。 鑒于臨床的需要，國外一些公司設計了自動高效液相色譜儀，具有以下優(yōu)點：①固定色譜柱和流動相，使一臺儀器適合多種藥物的檢測。②利用計算機技術，儲存幾百種藥物的圖譜，能自動識別未知藥物。③為提高圖譜鑒別能力，該機利用了三維光譜、出峰時間等多種手段。
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