紫外可見吸光光度法及分子熒光分析法(編輯修改稿)
2025-02-13 13:06 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 05為高靈敏度 . 20 雙硫腙法測定 Pb2+，濃度為+溶液，用 2cm的比色皿于 520nm處測得吸光度 =。求摩爾吸收系數(shù)。 例： [Pb2+]= x 103 / 50 x 103 x 207 = x 106mol /L ?520= A / LC= / = L /（ ） 吸光系數(shù)可查表或?qū)崪y得到 CLA ??21 吸光度的加合性 多組分體系 中，如果各組分之間無相互作用，其吸光度具有加合性，即 ?? ? ???iiii iiii CLLCAA ?? A = A1 + A2 + … +An 22 有機物綜合指標 ——紫外吸光度(Ultraviolet Absorbance UVA) 含 不飽和鍵和雜原子 的有機物在紫外光 254nm初的 吸光度之和 波長 254nm 吸光度 23 ?朗伯比爾定律的局限性 ?定律本身的局限性： ?只適于 稀溶液 ?高濃度時 組分間有相互作用 ：分子間距減小、相鄰粒子的電荷分布變化等引起 ε的變化 ?化學(xué)偏離：被 分析物質(zhì)與溶劑發(fā)生締合、離解、溶劑化反應(yīng) ，產(chǎn)生不同的吸收光譜 ?儀器偏離： 單色光不純 引起 5 郎伯 比爾定律的適用范圍 A C 吸收定律偏離 郎比定律適用前提是對單色光 的吸收，而實際上波長選擇器從連續(xù)光源中分離出的是所需波長的波長帶（多色輻射） 24 朗伯 比爾定律的適用條件 1. 單色光： 應(yīng)選用 ?max處或肩峰處 測定，此時干擾組分、溶劑等不吸收或有很弱的吸收 3. 稀溶液 濃度增大，分子之間作用增強 2. 吸光質(zhì)點形式不變 離解、絡(luò)合、締合會破壞線性關(guān)系 , 應(yīng)控制條件 (酸度、濃度、介質(zhì)等 ). ? A ML ML2 ML3 ?1 A C(M) ML3 ML2 ML 25 溶液濃度 的測定 A＝ ? CL 工作曲線法 (校準曲線 ) 朗伯 比爾定律在定量分析中的應(yīng)用 0 c(mg/mL) A * Ax cx 26 吸光度的測量 CLIIAt??? 0lg001 2 2 1= lg = lg = = lgII IA A A A AI I I參參比 液比試 試液I0 除被測組分對波長為 ?的 光有吸收外，還有其他 干擾吸收 ： 1） 吸收池 對光的反射、吸收； 2）樣品中 樣品基體、顯色劑 (或其它試劑）和共存組分 對光的吸收 實際上是以通過參比液的光強作為 入射光強 I0 消除措 施： 用 參比溶液調(diào) T=100%（ A=0）， 再測樣品溶液的吸光度，即 消除 了 吸收池 對光的吸收、反射， 溶劑、試劑 對光的吸收等。 27 參比溶液的選擇 種類 溶劑空白 :純?nèi)軇鄢粘馗蓴_） 適用于樣品基體、共存組分和顯色劑均無色情況 試劑空白 :純?nèi)軇?+顯色劑 +其他試劑 ,適用于樣品基體、共存組分無色， 顯色劑等均有色 樣品空白 :待測試樣溶液 ,適用于顯色劑無色，共存組分、樣品基體有色 空白溶液 :顯色劑 + 待測試樣 + 待測組分的掩蔽劑， 適用于顯色劑、樣品基體、共存組分均有色 28 8. 2 比色法和分光光度法 1
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