【文章內(nèi)容簡介】 色效果 與 操作的 簡便性 7 圖 1 三種染色方法的結(jié)果 注： 蛋白質(zhì)上樣量均為 5 μ g/ 孔 。A. 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色 。 B. 水浴常染結(jié)合法 。 C. 微波爐加熱法 由圖可知，水浴熱染法 較傳統(tǒng)染色法條帶更為清晰，微波爐加熱法背景色 太重， 不容易徹底脫去 ，不易觀察， 且容易損壞膠片。 另外，傳統(tǒng)染色法 脫色所使用的乙醇有可能會同時把考馬斯亮藍(lán)的 顏色脫掉，從而使蛋白質(zhì)條帶不清楚，而水浴和微波法 只使用冰乙酸脫色， 操作更簡便 ，更安全 。 不同染色方法凝膠成像結(jié)果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 8 圖 2 3種染色方法的靈敏度檢測 注： 110號蛋白質(zhì)上樣量依次為： ， ， ， ， ， ， ， ， ， μ g/ 孔 。A. 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色 。 B. 水浴常染結(jié)合法 。 C. 微波爐加熱法 定量牛血清 白蛋白加熱變性后電泳，分別用三種不同的染色方法：傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色 、 水浴常染結(jié)合法 、 微波爐加熱法對三塊平行的凝膠進行染色，比較三者的靈敏度。 由 圖 中可知 ， 三種方法的靈敏度差異不大， 其中水浴法蛋白質(zhì)測定的靈敏度都 為 μg / 孔 。 染色時間 表 4 不同染色方法所用 時間比較 時間 （ min） 方法 固定和放大 染色 脫色 總時間 傳統(tǒng)染色法 水浴加熱法 微波熱染法 50 5 9 120 20 3 至少 180 15 3 350 40 15 由表可知， 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色法 所耗 時間 長 達(dá) 6 h， 甚至 需要進行過夜脫色 ； 而水浴和微波加熱法大大縮短了染脫時間， 水浴法 總消耗時間 40 min，其 5 min沸水浴脫色效果和傳統(tǒng)染色的過夜脫色相當(dāng) ； 微波 加熱法 更短達(dá) 15 min， 所用試劑 也 較少，可循環(huán)使用 。 3．結(jié)論與討論 9 高溫有利于促進分子的自由擴散運動，加速試劑向凝膠中擴散和滲透。同時由于 SDS 對熱不穩(wěn)定 ， 在 80 ℃ 以下才相對穩(wěn)定 [8]， ， 通過水浴或微波熱處理，使 SDSPAGE凝膠的溫度達(dá)到 100 ℃ ， 從而分解了 SDS ， 解除了 SDS 對考馬斯亮藍(lán)染色的扼制 ， 使考馬斯亮藍(lán)染色得以順利進行 [9]；加熱使蛋白質(zhì)被快速固定，大大節(jié)省了固定和染色時間， 降低 了 凝膠被污染的機會 ；同時由于不使用甲醇，降低了成本 ，也有利于操作者的身體健康。 水浴 考馬斯亮藍(lán)染色 法檢測的蛋白質(zhì)靈敏度 為 μg / 孔 。 水浴法 中固定和染色的時間 可 由 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色法 的 3 h縮短為 25 min， 微波加熱法 則在 10 min左右，但微波爐加熱法凝膠背景色較深，且 容易損壞膠片， 不容易把握， 適用于蛋白質(zhì)的快速分離。 所以 ， 總體上水浴法操作 更簡便 快 捷 ， 效果更好 ，可用于蛋白質(zhì)的測定 。 參考文獻(xiàn) [1]. BradfordMM. A rap id and sensitive method for the quantitation of microgram quantifies of protein utilizing the principle of proteindye binding. Anal Biochem, 1976, 7: 2482254. [2]. CHEN C Q, BELANGER R R, BENHAMOU N, et al. Defence enzymes induced in cucumber roots by treatment with plant growthpromoting rhizobacteria and Pythium aphanidermatum[J]. Physiol Mol Plant Pathol, 2022, 56: 1323. [3]. 崔艷麗 ， 王生余 ， 張真 . 微波技術(shù)在尿蛋白譜檢測中的應(yīng)用 [J]. 現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志 ，2022,17:3536. [4]. 謝克昌 . 甲醇及其衍生物 [M] . 北京 :化學(xué)工業(yè)出版社 , 202206. [5]. 汪家政 ， 范 明 . 蛋白質(zhì)技術(shù)手冊 [M] . 北京 :科學(xué)出版社 . 2022. [6]. 李林 ， 張悅紅 . 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教程 . 北京 :化學(xué)工業(yè)出版社 ,2022. [7]. Merril C R. Gel staining techniques[J] . Methods Enzymol ,1990 ,182 :477 488. [8]. 國家技術(shù)監(jiān)督局 . 十二烷基硫酸鈉 ( GB/ T15963 1995) [ S] . 北京 :中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 ,19960801 [9]. 葉長青 . SDS2聚丙烯酰胺凝膠電泳染色方法的改進 . 湖北工 業(yè)大學(xué)學(xué)報 .2022， 24:1618. 10 致 謝 在畢業(yè)論文即將完成之際，收獲頗多，感觸良深。論文完成的背后離不開可愛的親們的支持和幫助。 首先我要感謝我的指導(dǎo)老師姬云濤老師，姬老師嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致、一絲不茍的作風(fēng)是我在人生路上的榜樣。她在論文的選題以及實驗方面給予了我無私的幫助，在忙碌的教學(xué)工作中抽出時間來審查我的論文，指出其中的不足，并不耐其煩的指導(dǎo)我進行論文的修改，在此特向姬老師表示我由衷的感謝； 其次感謝屈長青老師，劉小麗和楊京霞老師，謝謝你們在實驗過程中諸多方面給予 我的指導(dǎo)，教會我科學(xué)的嚴(yán)謹(jǐn)態(tài)度和永不言棄的精神； 也要感謝二樓和我一起做實驗的 “戰(zhàn)友們 ”，我們一起走過大學(xué)最后的日子，在一次次 “預(yù)實驗 ”的失敗之后，我們不斷完善著自己，雖然忙碌但卻很快樂； 同時還要感謝 07 級生科二班的兄弟姐妹們，謝謝你們曾經(jīng)給予我的關(guān)心和幫助，我們滿懷希望，我們一腔熱情，我們是一個可愛的大家庭。在這到處充溢著 11 感傷的季節(jié)，在這離別的時刻，我心中滿是不舍，但我想說 “海內(nèi)存知己，天涯若比鄰 ”，我們不曾離開！ 還有我宿舍的姐妹們，感謝你們大學(xué)四年的幫助，在我最悲傷的時候安慰我，在我最無助的時候支持 我，快樂的時候我們一起瘋狂，煩惱的時候我們一塊分擔(dān)，是你們給了我溫暖，讓我感受到 “家 ”的溫馨； 最后要我要感謝我親愛的父母，感謝你們的養(yǎng)育之恩，你們是我力量的源泉，永恒的動力！ 大學(xué)四年即將結(jié)束，回頭望去，有歡笑，有淚水，有遺憾，有感動 … 我們一起攜手走過這最為可貴的四年，最為難忘的四年。曾經(jīng)，我們年少輕狂；現(xiàn)在，我們?nèi)諠u成熟，我們都在經(jīng)歷華麗的 “蛻變 ”。大學(xué)，雖然不盡完美，但卻讓我們學(xué)會更加珍惜，學(xué)會勇于追求自己想要 的生活 ！ g an employment tribunal claim Employment tribunals sort out disagreements between employers and employees. You may need to make a claim to an employment tribunal if: ? you don39。t agree with the disciplinary action your employer has taken against you ? your employer dismisses you and you think that you have been dismissed unfairly. For more information about dismissal and unfair dismissal, see Dismissal. You can make a claim to an employment tribunal, even if you haven39。t appealed against the disciplinary action your employer has taken against you. However, if you win your case, the tribunal may reduce any pensatio