聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離血清蛋白質(zhì)-liuchang(編輯修改稿)
2025-02-02 07:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 應(yīng) 濃縮膠 ,大孔膠 , TrisHCl, 1. 凝膠孔徑的不連續(xù)性 2. 緩沖體系離子成分及 pH值的不連續(xù)性 快離子 (前導(dǎo)離子 ): 氯離子 Cl 慢離子 (尾隨離子 ): 甘氨酸根 NH2CH2COO 樣品中蛋白質(zhì)的泳動(dòng)速度介于這兩種離子之間 3. 電位梯度的不連續(xù)性 _ + Tris/甘氨酸 pH Tris/HCl pH 分子篩效應(yīng) 分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)通過一定孔徑的分離膠時(shí)，其受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率。 電荷效應(yīng) 進(jìn)入 ,各種蛋白質(zhì)所帶凈電荷量不同而有不同的遷移率。表面電荷多 ,則遷移快 。反之 ,則慢 . 分離膠（小孔膠） 分離膠 ,濃縮膠 實(shí)驗(yàn)操作 一 、制膠 (本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟 ) 安裝玻板 ： 將洗凈的、帶白色邊條的玻板水平放好，將U型硅膠密封條擺好。然后，將不帶邊條的短玻板蓋在 U型硅膠密封條上。 安裝鐵夾： 用 4只鐵夾將安裝好的玻板夾好。 注意： 1） 夾子的作用點(diǎn)應(yīng)和白色邊條重合， 避免夾到邊條內(nèi)側(cè)，造成玻板變形。 2） 玻板下沿的兩個(gè)夾子盡量下移， 使之能夠起到 “ 腿 ” 的作用，保證玻板處于直立狀態(tài)。 配制聚丙烯酰胺凝膠 : 每種試劑用相應(yīng)的吸量管、滴管來吸，吸量管上有標(biāo)記。 不可混用 ，否則污染試劑，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 分離膠的配制 小燒杯中按下列順序加入：（ B液有毒性，盡量不要接觸到皮膚） 1—— A液（ TrisHCl） 1 ml 2—— B液（ AcrBis） 2 ml 3—— 蒸餾水 1 ml 4—— 過硫酸銨 (現(xiàn)配） 5 ml 前面四項(xiàng)加完后，混勻
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