實(shí)驗(yàn)八sds-聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì)(編輯修改稿)
2024-11-04 09:14 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 (b)緩沖體系離子成分及 pH值的不連續(xù)性； ? 在 前導(dǎo)離子或快離子： HC1解離出的氯根 (C1) 尾隨離子 (trailing ion)或慢離子：甘氨酸根 mcl?clmp?pmG?G(Cl代表氯根 ， P代表蛋白質(zhì) ， G代表甘氨酸根 )有效遷移率 =m?， m為遷移率 ， ?為解離度 ) ? 當(dāng)進(jìn)入 ， 甘氨酸解離度增加 ， 其有效遷移率超過(guò)蛋白質(zhì)； （ c)電位梯度的不連續(xù)性： (2)分子篩效應(yīng) (3)電荷效應(yīng) 圖 4 電泳過(guò)程示意圖 A為電泳前 3層凝膠排列順序， 3層膠中均有快離子，慢離子 B顯示電泳開(kāi)始后，蛋白質(zhì)樣品夾在快、慢離子之間被濃縮成極窄的區(qū)帶。 C顯示蛋白質(zhì)樣品分離成數(shù)個(gè)區(qū)帶。 圖 5 不連續(xù)系統(tǒng)濃縮效應(yīng)示意圖 ? SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ SDSPAGE） ：蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠電泳時(shí) ， 它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素 。 如果在丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(sodium dodecyl sulfate,簡(jiǎn)稱(chēng) SDS)， 則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量 ， 而與所帶電荷和形狀無(wú)關(guān) 。 因此可以利用 SDSPAGE測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 。 三、試劑與器材 試劑： 10%SDS、 凝膠貯液（ 30％ %Bis)、分離膠緩沖液（ mol/L － HCl 緩沖液）、 濃縮膠緩沖液（ mol/L － HCl 緩沖液）、 10%過(guò)硫酸銨、 10%TEMED、 、 1%瓊脂糖溶液、 ％考馬斯亮蘭 R250 、 7%醋酸 器材：垂直板電泳槽、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀 、脫色搖床 五 、 操作方法 夾心式垂直板電泳槽 (1)裝上貯槽和固定螺絲銷(xiāo)釘 ， 仰放在桌面上 。 (2)將長(zhǎng) 、 短玻璃板分別插到凵形硅橡框的凹形槽中 ，注意勿用手接觸灌膠
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