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正文內(nèi)容

熒光分析法ppt課件(編輯修改稿)

2025-02-11 09:30 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 取代基效應(yīng) ?給電子取代基 OH,CN, NH2等,可擴(kuò)大共軛雙鍵體系加強(qiáng)熒光 ?得電子取代基 =C=O, NO2 COOH, SH等減弱熒光 ?重原子效應(yīng): 芳環(huán)上取代 F、 Cl、Br、 I之后,系間竄躍加強(qiáng),熒光強(qiáng)度隨鹵素原子量增加而減弱。 ?取代基的位置: 鄰、對(duì)位熒光增強(qiáng),間位抑制 ,,26 能與弱熒光物質(zhì)作用,得到強(qiáng)熒光行產(chǎn)物。 1) 熒光胺 — 本身不顯熒光,能與脂肪族、芳香伯胺形成熒光衍生物。 λex=27 390nm, λem=480nm 2)鄰苯二甲醛( OPA) — 伯胺, α氨基酸 λex=340nm ,λem=455nm 3)丹酰氯 — 含伯、仲胺及酚基的生物堿 丹酰肼 — 可的松的羰基 λex=365nm ,λem=500nm 4)無機(jī)離子 能與某些有機(jī)物形成熒光配合物 27 三、影響熒光強(qiáng)度的外部因素 熒光強(qiáng)度對(duì)溫度變化敏感, ?溫度增加,分子間碰撞次數(shù)增加,熒光效率、強(qiáng)度 降低 ?溫度降低, Φf、 If增大 。 除一般溶劑效應(yīng)外,溶劑的極性、氫鍵、配位鍵的形成都將使化合物的熒光光譜發(fā)生變化 , 熒光波長(zhǎng)隨著溶劑極性的增強(qiáng)而長(zhǎng)移,強(qiáng)度增強(qiáng)。 28 3. 溶液 pH 對(duì)酸堿熒光物, pH影響離解、型體分布,從而影響熒光強(qiáng)度,需要嚴(yán)格控制。 OH O_OHH +_pH≈1有熒光 pH≈13無熒光 29 1)熒光猝滅 熒光物質(zhì)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子相互作用引起熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象。 2)熒光熄滅劑: 使熒光強(qiáng)度降低的物質(zhì)又稱為熒光猝滅劑。 如鹵素離子、重金屬離子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羧基化合物等。 30 3)機(jī)理: a碰撞失去能量 b生成不發(fā)光的配合物 c溶解氧的存在使熒光物質(zhì)氧化或氧分子的順磁性 使激發(fā)單重態(tài)分子轉(zhuǎn)變?yōu)槿貞B(tài) d濃度較大,自熄滅現(xiàn)象 31 瑞利光:彈性碰撞,不發(fā)生能量交換,僅改變方向, 波長(zhǎng)與入射光相同 拉曼光:非彈性碰撞,改變方向同時(shí)能量交換,波長(zhǎng) 長(zhǎng)移或短移。 散射光對(duì)熒光測(cè)定有干擾 尤其是波長(zhǎng)與熒光波長(zhǎng)接近的拉曼光 選擇適當(dāng)?shù)娜軇┖图ぐl(fā)波長(zhǎng),可消除拉曼光的干擾 32 320 360 448 350 448 320 360 350 400 激發(fā) 320nm 硫酸奎寧 激發(fā) 350nm 硫酸奎寧 激發(fā) 320nm 激發(fā) 350nm 強(qiáng)度 強(qiáng)度 λ /nm λ /nm 33 第二節(jié) 熒光定量分析方法 一、 特點(diǎn) 比紫外 可見分光光度法高 2~ 4個(gè)數(shù)量級(jí); 檢測(cè)下限: 1010~ 1012g/ml 既可依據(jù)特征發(fā)射光譜,又可根據(jù)特征吸收光譜; 缺點(diǎn):應(yīng)用范圍小。 34 二、定量依據(jù)與方法 熒光強(qiáng)
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