吸光光度法ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-02-10 11:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一、 顯色反應(yīng)的選擇 1 靈敏度高 (High sensitivity)， 一般 ε104 2 有色化合物組成恒定，符合一定的化學(xué)式。性質(zhì)穩(wěn)定顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好。 3 顯色劑在測定波長處無明顯吸收。 對比度好 , ?λmax60 nm . 二、顯色劑 (Color reagents) 無機(jī)顯色劑 : [Fe(SCN)]2+， [TiOH2O2]2+ 有機(jī)顯色劑 : 顯色反應(yīng)和顯色劑 (Color reactions) 32 有機(jī)顯色劑 : O － N＝ N－，－ N＝ O， O C=S,－ N （共軛雙鍵） πe 生色團(tuán) （ 生色團(tuán) ） 能吸收紫外 可見光的基團(tuán) 有機(jī)化合物：具有不飽和鍵和未成對電子的基團(tuán)產(chǎn)生n→ π*躍遷和 π→ π*躍遷 , 躍遷 E較低 注：當(dāng)出現(xiàn)幾個 生 色團(tuán)共軛 ， 則幾個 生 色團(tuán)所產(chǎn)生的吸收帶將消失 ， 代之出現(xiàn)新的共軛吸收帶 ， 其波長將比單個生色團(tuán)的吸收波長長 ， 強(qiáng)度也增強(qiáng) 33 助色團(tuán) 本身無紫外吸收 ， 但可以使生色團(tuán)吸收峰加強(qiáng)同時 使吸收峰長移 （ 紅移 ） 的基團(tuán) 有機(jī)物：連有雜原子的飽和基團(tuán) 例： —OH， —OR， —NH—， —NR2—， —X 34 紅移 由于化合物結(jié)構(gòu)變化 （ 共軛 、 引入助色團(tuán)取代基 ） 或采用不同溶劑后 ， 吸收峰位置向長波方向的 移動 ， 叫 紅移 (Bathochromic shift） . 35 有機(jī)顯色劑 CH3－ C－ C－ CH3 HO－ N N－ OH ＝ ＝ N N OH COOH SO 3 H OO型： N N N O H OH ON型 ： 4（ 2吡啶偶氮）間苯二酚 PAR N H N H N S N S型 ： 雙硫腙 NN型： 丁二酮肟 鄰二氮菲 磺基水楊酸 36 顯色條件的選擇 cR cR cR 顯色劑用量 Mo(SCN)32+ 淺紅 Mo(SCN)5 橙紅 Mo(SCN)6 淺紅 Fe(SCN)n3n 37 二、溶液的酸度 pH1pHpH2 pH 38 酸度的影響 3[F e R ]lg[F e ]?～ 39 三、顯色時間和顯色溫度 T1(℃ ) T2(℃ ) t(min) 40 四，溶劑 降低有色化合物的解離度； 提高反應(yīng)速率； 有色化合物的溶解度等。 41 吸光光度分析及誤差控制 測定波長的選擇、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 515 655 釷 偶氮砷 III A 絡(luò)合物 試劑 415 500 鈷 亞硝基紅鹽 A 絡(luò)合物 試劑 吸收最大，干擾最小 吸收最大，干擾最小 42 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 ? 在一定條件下，測量一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，作 AC曲線 0 1 2 3 c mg/ml A * 43 引起偏離朗伯 — 比耳定律的因素 主要因素表現(xiàn)為 以下兩個方面 1. 物理 (光學(xué) )因素 2. 化學(xué)因素 cbA ??? ?? 44 一、物理因素 ? Beer定律應(yīng)用的重要前提 —— 入射光為單色光 定律偏離不成線性關(guān)系，與B e e rcAbcA21121成 線線 性 關(guān)???????? 45 ，不垂直 有反射 ， 散射現(xiàn)象 ， 吸光度偏高 散射和反射使 T↓， A↑， 吸收光譜變形 注：一般可用空白對比校正消除 46 二、化學(xué)因素 濃度過高，吸光質(zhì)點(diǎn)之間作用 改變 化學(xué)反應(yīng) ,濃度發(fā)生變化 以 C代替平衡濃度 解離 絡(luò)合 使 C與平衡濃度的正比關(guān)系破壞 締合 47 三、干擾及消除 ： ?干擾物質(zhì)本身有顏色 ?干擾物質(zhì)與顯色劑反應(yīng)有吸收 ?干擾物質(zhì)與顯色劑反應(yīng)雖沒吸收，但消耗顯色劑 ?干擾物質(zhì)生成沉淀 48 如測 Fe3＋ Fe3+,
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