【文章內(nèi)容簡介】 ?是 100% ?Lecture對於實驗的理解很有幫助，老師及助教 的講解相當仔細。五天的課程收穫很多。 ?實驗流程順暢，且在等實驗的過程中還會上課， 不會讓時間浪費掉。 ?可以感受到課程規(guī)劃的用心，這星期的課頗具收 獲，是很愉快的學習經(jīng)驗。 ?感謝助教耐心的指導和幫忙。 2 . 教學方法滿意24%尚可2 %非常滿意7 4 %96年度開設課程 (實驗課程 ) ? 課程 : 細胞訊息傳遞之分析 學分 :1學分 報名 /上課人數(shù) 22人 / 22人 組別數(shù) /每組人數(shù) 11組 / 2人 負責教師 馮濟敏 授課時數(shù) 40小時 上課學生來源 (人 ) 校內(nèi) 校外 產(chǎn)業(yè)界 教師 21 1 0 0 日期 講 題 講 員 7/16 講解：癌細胞因應環(huán)境改變導致葡萄糖運送增加之簡介 實驗： (I)製備含有 GLUT1 promoter之 Luciferase reporter載體 (pLuc GT1/E1/E2) (II)製備含有 EGFPconjugated GLUT1載體 (pGT1EGFP) 馮濟敏(校內(nèi) ) 7/17 講解：細胞培養(yǎng)之操作及轉染 實驗： (I)培養(yǎng) MCF7 乳癌 (II )利用電穿孔共同轉染 pLucGT1/E1/E2 及 pCMV? 或 pGT1EGFP及 pCMV? 馮濟敏 7/18 講解： GLUT1 細胞內(nèi)移位作用之分析 實驗： (I)使用 CoCl2 及 sodium azide處理轉染乳癌細胞 (II)製備樣本 以供螢光及共軛焦顯微鏡分析 馮濟敏 7/19 講解： GLUT1基因轉錄之分析 實驗： (I)製備樣本 以供 luciferase分析 (II) Luciferase分析 (III) ?galactosidase分析 馮濟敏 7/20 講解：螢光顯微鏡與共軛焦顯微鏡之比較與數(shù)據(jù)分析 實驗：螢光顯微鏡與共軛焦顯微鏡分析短期處理之樣本 馮濟敏 細胞訊息傳遞之分析 課程內(nèi)容及師資 學生實驗成果 細胞訊息傳遞之分析 【 圖一 】 為帶有 insert的 DNA片段經(jīng)過 PCR反應後，進行膠體電泳測試之實驗結果 。 【 圖二 】 電穿孔的cuvette 經(jīng) electroporation的溶液會有氣泡的產(chǎn)生，電穿孔法其原理係將細胞暴露於瞬間的高壓放電，造成細胞膜上出現(xiàn)一些暫時性開放的小孔洞，使得質體DNA可以藉者這些小孔洞進入細胞中，達到基因轉殖目的。 【 圖三 】 A :為 control，不加任何藥物； B :加入 CoCl2； C :加入 azide（ NaN3） 【 圖一 】 【 圖二 】 【 圖三 】 Analysis of EGFPGLUT1 localization under various treatment 細胞訊息傳遞之分析 實驗課程 學生成績分佈圖 1 117305101520曠課 7080 8190 9199分數(shù) 組距 曠課 7080 8190 9199 人數(shù) 1 1 17 3 人數(shù) 分數(shù) 成績評定標準 : 書面報告 65% 課堂表現(xiàn)及出席率 35% 細胞訊息傳遞之分析 學生實驗課程學習反應調(diào)查表 1 . 教材內(nèi)容滿意71%非常滿意2 4 %2 . 教學方法非常滿意34%滿意66%3 . 老師指導實驗之熱誠滿意34%尚可47%非常滿意1 9 % ?課程過於緊湊 5% ?課程內(nèi)容過淺 5% ?教師表達能力 10% ?親自操作實驗或儀器 14% ?各組器材數(shù)量 19% ?各組器材品質 14% ?實驗流程安排規(guī)劃 10% ?是 72% ?否 14% ?不清楚 14% 4 . 助教指導實驗之熱誠非常滿意6 7 %滿意33% ?學到很多東西，問助教們問題也都得到助教們清 楚又熱心的回答，真的辦得非常棒。 ?實驗結果及流程一切都算順利，也知道很多操作的基本原理，對於之後碩士生涯有很大的助益。 尚可5%96年度開設課程 (實驗課程 ) ? 課程 : 蛋白質交互作用 學分 :1學分 報名 /上課人數(shù) 28人 / 28人 組別數(shù) /每組人數(shù) 14組 / 2人 負責教師 陳美瑜 、 陳芬芳 授課時數(shù) 40小時 上課學生來源 (人 ) 校內(nèi) 校外 產(chǎn)業(yè)界 教師 27 0 1 0 日期 講 題 講 員 8/06 講解：簡介蛋白質間交互作用研究方法、簡介本實驗課程、酵母菌模型生物介紹、酵母菌雙雜合系統(tǒng)之原理 實驗：酵母菌雙雜合系統(tǒng) (1)：酵母菌培養(yǎng)、轉型 免疫共同定位分析 (1)：細胞轉染 免疫共沉澱 (1)：細胞轉染 陳美瑜 陳芬芳（校內(nèi)） 8/07 講解：共軛螢光顯微鏡技術 實驗：酵母菌雙雜合系統(tǒng) (2)：酵母菌 DNA萃取、大腸桿菌電轉型 免疫共同定位分析 (2)：細胞培養(yǎng) 免疫共沉澱 (2)：細胞蛋白質萃取物製備 陳美瑜 陳芬芳 8/08 講解：蛋白質交互作用免疫分析方法 實驗：酵母菌雙雜合系統(tǒng) (3)：大腸桿菌轉型菌落 PCR 免疫共同定位分析 (3)：免疫螢光染色、共軛螢光顯微鏡 觀察共同定位分析 p53及 MDM2的結合 陳美瑜 陳芬芳 8/09 講解： SDSPAGE電泳與 Western轉漬分析原理 實驗：酵母菌雙雜合系統(tǒng) (4)： PCR產(chǎn)物凝膠電泳分析回收質體結果 免疫共同定位分析 (4)：顯微呈像結果電腦共同定位分析 免疫共沉澱 (3)：免疫沉澱、製備 SDSPAGE凝膠分析 p53及 MDM2交互作用 陳美瑜 陳芬芳 8/10 講解：實驗結果解說與討論 實驗：酵母菌雙雜合系統(tǒng) (5)：以報告洋菜膠上之生長情形與 β galactosidase 酵素 反應呈色方法分析 p53及 MDM2蛋白質交互作用啟動報告基因表現(xiàn)之結果 免疫共沉澱 (4)： SDSPAGE蛋白質電泳、 Western轉漬分析免疫共沉澱結果 陳美瑜 陳芬芳 蛋白質交互作用 課程內(nèi)容及師資 學生實驗成果 蛋白質交互作用 圖二 : (利用共軛焦螢光顯微鏡觀察 ) 32℃ ( 操作組 )p53 大部分都在細胞質然而部份進入細胞核的可以成功的活化 MDM2 圖一 : 38℃ (negative control) p53(紅 )沒有入核，沒辦法 activate MDM2(綠 )。藍色為DAPI染的 DNA 代表核的位置 圖三 :可以看到綠色箭頭指的就是經(jīng)由 p53 Ab 免疫沉澱下來 ， 後來用 MDM2 Ab detect 的 MDM2。 圖一 圖二 圖三 蛋白質交互作用 實驗課程 學生成績分佈圖 32230510152025曠課 7080 8190分數(shù) 組距 曠課 7080 8190 人數(shù) 3 2 23 人數(shù) 分數(shù) 成績評定標準： 課堂表現(xiàn) 15% 實驗課參與度及出席率 25% 書面報告 60% 蛋白質交互作用 學生實驗課程學習反應調(diào)查表 1 . 教材內(nèi)容2 . 教學方法非常滿意4 8 %滿意52%3 . 老師指導實驗之熱誠滿意33%尚可17%非常滿意5 0 % ?課程過於緊湊 4% ?希望提供講義大綱及參考資料 16% ?課程內(nèi)容過淺 8% ?教師表達能力 4% ?各組器材 數(shù)量 4% ?各組器材品質 8% ?實驗桌操作寬擠 8% ?實驗流程安排規(guī)劃 20% ?是 88% ?不清楚 12% 4 . 助教指導實驗之熱誠非常滿意8 8 %滿意12% ?可增加實驗項目 :例如 confocal ?助教們講解清楚，人都很 nice。實驗上的討論很有幫助學到很多東西，是個感覺很棒的課程，在這一個禮拜內(nèi)受益良多。 滿意56%尚可4%非常滿意4 0 %96年度開設課程 (實驗課程 ) ? 課程 : 特殊基因對癌細胞生長影響 之分析 學分 :1學分 報名 /上課人數(shù) 30人 / 30人 組別數(shù) /每組人數(shù) 15組 / 2人 負責教師 簡靜香 授課時數(shù) 40小時 上課學生來源 (人 ) 校內(nèi) 校外 產(chǎn)業(yè)界 教師 27 1 2 0 特殊基因對癌細胞生長影響之分析 課程內(nèi)容及師資 日期 講 題 講 員 7/23 7/24 7/25 7/26 7/27 講解 :流式細胞儀之分析原理及應用，細胞週期頻譜之圈選。 實驗：培養(yǎng)肝癌細胞之前處理，進行 PI staini