常見(jiàn)的生化與分子生物學(xué)技術(shù)大串講(編輯修改稿)
2025-02-09 22:32 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的兩個(gè)不同的 pH 值分別進(jìn)行檢測(cè)，這樣得出的結(jié)論才更可靠； （ 2）化學(xué)法： N端測(cè)定， C端測(cè)定。純品蛋白質(zhì)應(yīng)該具有恒定的 N端或 C端組成。如果一種蛋白質(zhì)只有一條鏈組成，則只會(huì)檢測(cè)到一種 N端或 C端氨基酸； （ 3）儀器法： HPLC或質(zhì)譜。如果一種蛋白質(zhì)樣品在 HPLC上只表現(xiàn)單一的峰，則可視為其為純品；如果純化的是一種已知蛋白，經(jīng)質(zhì)譜分析測(cè)定出來(lái)的相對(duì)分子量與實(shí)際的值一致，那么也可認(rèn)為它是純品。 等電聚焦 需要在凝膠中加入兩性電解質(zhì)，以在陽(yáng)極和陰極之間建立遞增的 pH梯度，處在其中的蛋白質(zhì)分子在電場(chǎng)的作用下遷移，最后各自移動(dòng)到并聚焦于與其 pI相當(dāng)?shù)?pH位置上。于是通過(guò) 等電聚焦，不僅可以實(shí)現(xiàn) pI不同的蛋白質(zhì)之間的分離，而且還可以測(cè)定出各種蛋白質(zhì)的 pI 蛋白質(zhì)的雙向電泳 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定 ? 直接測(cè)定法 ? 間接測(cè)定法： 先得到某一種蛋白質(zhì)基因的核苷酸序列，然后根據(jù)通用的遺傳密碼表間接推導(dǎo)出由其決定的氨基酸序列。 表 2 各種印跡技術(shù) 印跡類型 轉(zhuǎn)移到膜 上的分子 探針 獲得的信息 Southern DNA片段 放射性標(biāo)記的互補(bǔ) RNA或DNA 基因結(jié)構(gòu)等 Northern RNA 放射性標(biāo)記的互補(bǔ) RNA或DNA 特定 RNA的大小、分布和含量 Western 蛋白質(zhì) 一級(jí)抗體和與酶偶聯(lián)的二級(jí)抗體 特定蛋白質(zhì)的大小、分布和含量 Western印跡 基因芯片 ? 基因芯片是隨著“人類基因組計(jì)劃”和其它模式生物基因組計(jì)劃的進(jìn)展而發(fā)展起來(lái)一門新技術(shù)，也叫 DNA芯片、 DNA微陣列或寡核苷酸陣列，它采用原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬(wàn)計(jì)的 DNA探針固定在支持物表面上，產(chǎn)生二維 DNA探針陣列，然后，與標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)弱，對(duì)生物樣品進(jìn)行快速、并行和高效地檢測(cè)或醫(yī)學(xué)診斷，由于常用硅芯片作為固相支持物，且在制備過(guò)程運(yùn)用了計(jì)算機(jī)芯片的制備技術(shù)，所以稱之為基因芯片技術(shù)?；蛐酒云錈o(wú)可比擬的信息量、高通量、快速和準(zhǔn)確地分析基因的本領(lǐng)，在基因組功能研究、臨床診斷及新藥開(kāi)發(fā)等方面顯示出巨大的威力，已成為人類研究和維護(hù)生命的一大利器，因此，被譽(yù)為是基因功能研究領(lǐng)域最偉大的發(fā)明之一。 ? 一般說(shuō)來(lái)應(yīng)用基因芯片分 5步進(jìn)行：（ 1）生物學(xué)問(wèn)題的提出和芯片設(shè)計(jì)與制備；（ 2）樣品制備；（ 3）生物雜交反應(yīng)；（ 4）結(jié)果探測(cè)；（ 5）數(shù)據(jù)處理和建模。 使用基因芯片對(duì)正常細(xì)胞 和癌細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)分析比較 RNA干擾（ RNAi） ? RNA干擾是指通過(guò)雙鏈 RNA使目的 mRNA降解，從而特異性地抑制目的蛋白表達(dá)的現(xiàn)象。 ? miRNA是指微 RNA，其長(zhǎng)度通常為 21nt~25 nt，由內(nèi)源基因
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