分子熒光分析法ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-08 08:59 本頁面
【文章內容簡介】 attering light） 當一束光照射在被測溶液上 ， 其中一部分光被吸收后發(fā)出熒光 ， 一部分光透過溶液 ， 還有一小部分光則由于光子與溶劑分子的相互碰撞 ， 使光子的運動方向發(fā)生改變而向不同方向散射 ， 稱為散射光 。 1. 瑞利 （ Reyleigh） 散射光 光子和物質分子發(fā)生彈性碰撞 ， 不發(fā)生能量的交換 ， 只是光子運動方向發(fā)生改變 ，其波長和激發(fā)光相同 ， 這種散射光稱為瑞利散射光 。 它的強度與波長的四次方成反比 ， 即波長越短 ， 瑞利散射光越強 。 但因瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同 ， 只要選擇適當?shù)臒晒鉁y定波長或選用濾光片即可消除其影響 。 2. 拉曼 （ Raman） 散射光 光子和溶劑分子發(fā)生非彈性碰撞 ， 在運動方向發(fā)生改變的同時 ， 光子與溶劑分子還發(fā)生能量的交換 ， 使光子能量減小或者增加 ， 光的波長增長或變短 ， 這兩種散射光均稱為拉曼 （ 散射 ） 光 。 其中波長較長的拉曼光因其波長與物質的熒光波長相接近 , 故對測定的干擾較大 。 由于拉曼光波長隨激發(fā)光波長的改變而改變 , 而熒光物質的熒光波長與激發(fā)光波長無關 , 故通過選擇適當?shù)募ぐl(fā)光波長 ， 就可以將二者區(qū)分開 。 320nm 320nm 448nm 350nm 448nm 350nm 400nm 360nm 激發(fā) 320nm硫酸奎寧 激發(fā) 350nm硫酸奎寧 散射光譜 散射光譜 第二節(jié) 定性定量分析 一、熒光強度與溶液濃度的關系 分光光度法是測定物質對光的吸收程度；熒光分析法是測定物質吸收了一定頻率的光之后，物質本身所發(fā)射的熒光強度。當溶液中的熒光物質被入射光激發(fā)后，可以在各個方向觀察到熒光，由于激發(fā)光一部分可透過溶液，所以在透射光方向觀察熒光是不適宜的，一般是在與透射光垂直的方向觀察熒光。 測定熒光強度時，要選擇兩個不同的波長：一個是物質吸收的光，即激發(fā)光的波長；另一個是被激發(fā)物質發(fā)射的光，即熒光的波長。 溶液的熒光強度與該溶液對光的吸收程度以及溶液中熒光物質的熒光效率有關。 根據(jù) Beer定律 a b cII ? 100所以 )101(00 a b ca IIII ??abcII ? 100 由于溶液的熒光強度與溶液對光的吸收程度及熒光效率成正比，即 aΦIF ?)101( 0 abcIΦKF ?)1( abceIK Φ ?)101(00 a b ca IIII ???????!2)()(12 abcabce abc)1( a b ceIK ΦF ?]}!2)()(1[1{ 20 ?????abcabcIK ΦF]!2)([ 20 ????abcabc IK ΦF當 abc≤（即溶液很?。r， ]!2)([ 20 ????a b ca b cIK ΦFa b cIK ΦF 0 ?對于一定的熒光物質，當測定條件固定時， cKF 39。?即對一定的熒光物質的稀溶液（ abc≤），在一定的溫度下，當激發(fā)光的波長、強度和液層厚度都固定后，其熒光強度與該溶液的濃度成正比。這是熒光分析定量的基礎。 二、定性分析 熒光物質的特征光譜包括激發(fā)光譜和熒光光譜，因此用它鑒定物質比吸收光譜可靠。 三、定量分析 1. 標準曲線法 F c Fx cx 2. 直接比較法 如果熒光物質的標準曲線過零點，且線性良好，可用直接比較法測定。 ss KcFF ? 0xx KcFF ? 0xsxsccFFFF?00 sxsx cFFFFc ??00第三節(jié) 儀器 一、儀器的構造及原理 儀器類型很多，基本結構相似，一般包括五部分：激發(fā)光源、單色器、樣品池、檢測器和記錄顯示部分。 1. 光源 能發(fā)射紫外到可見區(qū)波長的光、強度大、穩(wěn)定。常用的有溴鎢燈、高壓汞燈、氙燈。 2. 單色器 兩個單色器 3. 樣品池 通常用石英制成 4. 檢測器 光電倍增管 二、儀器類型 1. 光電熒光計 用濾光片作單色器（激發(fā)濾光片和熒光濾光片），溴鎢燈或高壓汞燈作光源，光電管為檢測器。 2. 熒光分光光度計 用氙燈作光源、光柵作單色器，光電倍增管為檢測器?？蛇B續(xù)掃描激發(fā)光譜和熒光光譜。 第五節(jié) 熒光分析法的應用 （一） 有機物的熒光分析 由于熒光分析的高靈敏度、高選擇性，使它在醫(yī)學檢驗、衛(wèi)生檢驗、藥物分析、環(huán)境檢測及食品分析等方面有廣泛的應用。 芳香族及具有芳香結構的物質，在紫外光照射下能產生熒光。因此，熒光分析法可直接用于這類有機物的測定，如：多環(huán)胺類、萘酚類、嘌呤類、吲哚類、多環(huán)芳烴類、具有芳環(huán)或芳雜環(huán)結構的氨基酸及蛋白質等，約有 200多種。 食品中維生素含量的測定是食品分析的常規(guī)項目，幾乎所有種類的維生素都可以用熒光法進行分析。多環(huán)芳烴普遍存在于大氣、水、土壤、動植物及加工食品中，大家所熟知的苯并 [a]芘是致癌活性最強的一種，通過萃取或色譜分離后，可采用熒光法進行測定。該方法準確可靠，測定最低濃度可達 ?g/ml。 應用實例：食品中 VB2（核黃素）的測定 其測定原理是 VB2在 440～ 500 nm波長的光照射下，發(fā)出黃綠色熒光，在波長 525 nm下測定其熒光強度，在稀溶液中其熒光強度與 VB2的濃度成正比。為消除試液中共存熒光雜質的干擾，可在測定過熒光強度的溶液中加入連二亞硫酸鈉（ Na2S2O4），將 VB2還原為無熒光的物質，然后再測定試液中殘余的熒光雜質的熒光強度，兩者之差即為食品中 VB2的熒光強度。該方法被作為食品分析的國家標準分析方法。 （二） 無機元素的熒光分析 能產生熒光的無機物較少，對其進行分析通常是將待測元素與熒光試劑反應，生成具有熒光特性的配合物，進行間接測定。目前利用該法可進行熒光分析的無機元素已近70種。常見的有鉻、鋁、鈹、硒、鍺、鎘等及部分稀土元素。 例如 Al3+與桑色素或 8羥基喹啉的配合物就可產生熒光，從而用于鋁的測定。有些
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