細胞工程制藥復習ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-04 05:22 本頁面
【文章內容簡介】 的制備 ?雜交瘤技術： 將能夠產生抗體的 B淋巴細胞和具有無限增殖力的骨髓瘤細胞融合在一起，形成雜交瘤細胞。 ?單克隆抗體 (monoclonal antibody，簡稱 McAb)： 單一類型 的 只針對某一特定抗原決定簇 的 抗體分子 。 單抗的特點 ? ? ? ? ? 單抗的制備原理 ? ? 單抗的制備過程 ? ? ? ? ? ? 1）骨髓瘤細胞 ? 一般不分泌抗體 ? 能在體外無限繁殖和連續(xù)繼代培養(yǎng) ? 為 HPRT－ 或 TK－ 。 ? 多用 BALB/C 小鼠的骨髓瘤細胞。 ? 2）淋巴細胞 免疫方法 ? 體內法 ? 體外法 ? 脾細胞和骨髓細胞混勻 ? 離心 ? 沉淀滴加 50%的 PEG ? 靜置 90秒 ? 滴加不含血清培液或 BSS 5－ 10ml ? 靜置 10分鐘 ? 細胞團塊分散，加 HAT溶液 ，稀釋 ? 加入有飼細胞的多孔培養(yǎng)板 ? 2－ 3天半量換液， 7天后完成 細胞融合的選擇示意圖 1） HAT選擇系統(tǒng) ? HAT：是含一定濃度 次黃嘌呤（ H） 、 氨基喋呤（ A） 及 胸腺嘧啶核苷（ T） 的一種 選擇性培養(yǎng)基 ，其中三種成分與細胞 DNA合成有關。 ? DNA合成途徑有兩種。 ? 原理： ? 雜交瘤技術中，常選用次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶缺陷 （ HPRT） 或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型 （ TK）骨髓瘤細胞 為親本之一， 無補救途徑 。 ? 含氨基喋呤培養(yǎng)基抑制了全合成途徑 。 ? 淋巴細胞具有 合成 DNA的 兩條途徑 。 ? 雜種細胞通過互補作用獲得 HRPT或 TK基因 ，可應用培養(yǎng)基中次黃嘌呤及胸腺嘧啶核苷， 通過補救合成途徑合成 DNA。 ? 在 HAT培養(yǎng)基中， HPRT 或 TK 親本細胞死亡，淋巴細胞亦逐漸死亡， 只有雜種細胞存活 。 2）特異性雜交瘤細胞的篩選 ? 可溶性抗原 :放射免疫、免疫酶標測定等 ? 細胞抗原 :免疫熒光、被動血凝實驗、補體依賴的細胞
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