細胞工程finalppt課件(編輯修改稿)
2024-10-08 20:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 官 ， 它們細胞增殖能力強 ， 分裂旺盛 ， 分化程度低 ， 容易培養(yǎng) 。 有限細胞系 無限細胞系 50代細胞 動物原代細胞分離培養(yǎng)與傳代 34 動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。 傳代培養(yǎng)的細胞都能一直傳代下去嗎？ 有些為何能一直傳下去？ 連續(xù)細胞系：能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系 有限細胞系：不能連續(xù)培養(yǎng)下去的 細胞系 培養(yǎng)過程中發(fā)生 突變或轉(zhuǎn)化 的細胞系 —— ① 惡性細胞系，致癌性。 —— ② 不死性，接觸抑制，不致癌 從原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的原因？ 細胞會因 密度過大 和代謝消耗引起 營養(yǎng) 枯竭，不能正常生長 動物原代細胞分離培養(yǎng)代 35 細胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。 物理污染 化學(xué)污染 生物污染 細胞培養(yǎng)物污染的防治 36 細胞培養(yǎng)物污染的防治 最常見的細菌種類： 有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及革蘭氏陰性菌，如大腸桿菌、假單胞菌等，其中又以白色葡萄球菌較常見。 預(yù)防用藥一般用雙抗生素 (青霉素100u/mL加鏈霉素 100μg/ mL)， 污染后清除用藥需采用大于常用量 5～ 10倍的沖洗療法 ， 于加藥后作用 24～48小時 ， 再換常規(guī)培養(yǎng)液 。 37 常見真菌種類 ： 煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、 白念珠菌、酵母菌等 一般預(yù)防與清除 制霉菌素 細胞培養(yǎng)物污染的防治 38 支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的最小微生物，最小直徑 ，變形能力大，能通過濾器，光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。不易發(fā)現(xiàn)，對青霉素有抗藥性。 細胞培養(yǎng)物污染的防治 支原體污染 一般預(yù)防與清除 慶大霉素或卡那霉素，根除困難 39 細胞培養(yǎng)物污染的防治 病毒污染 正常細胞 病變細胞 潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題 40 動物細胞冷凍保存 冷凍保存細胞的解凍與復(fù)蘇 細胞培養(yǎng)與傳代 細胞冷凍 保存 41 細胞培養(yǎng)物中加入 Trypsin EDTA進行消化。 吹打成單個細胞。 洗滌離心。 棄上清，加入預(yù)冷的凍存液，吹打均勻。 移入凍存管，置冰上或 4 ℃ 冰箱 30分鐘。 80℃ 過夜。 液氮保存。 動物細胞冷凍保存 42 動物細胞融合 1958年， Okada發(fā)現(xiàn)紫外滅活仙臺病毒可引起艾氏腹水瘤細胞彼此融合。 1975年，免疫學(xué)家 Kohler和 Milstein利用仙臺病毒誘導(dǎo)綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合，建立了小鼠淋巴細胞雜交瘤技術(shù)。 病毒誘導(dǎo)融合 聚乙二醇 PEG誘導(dǎo)融合 電擊誘導(dǎo)細胞融合法 43 動物細胞融合 44 1975年英國科學(xué)家 Milstein和 Kohler將產(chǎn)生抗體 的淋巴細胞同腫瘤細胞融合，成功建立了單克隆抗 體技術(shù)，而獲得 1984年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎。 每個 B淋巴細胞僅專一地產(chǎn)生、分泌一種針對某 種抗原決定簇的特異性抗體，而腫瘤細胞可以無限 增殖，因此雜交瘤細胞可在體外培養(yǎng)或移植到體內(nèi) 條件下分泌大量單克隆抗體。 單克隆抗體技術(shù)的最主要優(yōu)點是可以用不純的抗 原分子大量制備純一的單克隆抗體。 單克隆抗體制備 45 設(shè)備準備 清洗 烘干 安裝 消毒 培養(yǎng)基制備 存水制備 試劑制備 除菌 檢測 細胞準備 種子庫建立 細胞復(fù)蘇 擴增 檢測 細胞培養(yǎng) 溫度控制 通氣 pH控制 攪拌 檢測 細胞數(shù) 存活率 葡萄糖 pH 分批式 （ batch culture) 流加式 (feeding culture) 半連續(xù)式
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