【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 抗原 HBeAg ?僅存在于 Dane顆粒中 ?游離存在于血液中 ?為病毒復(fù)制及強(qiáng)傳染性的指標(biāo) ?產(chǎn)生抗－ HBe， 是預(yù)后良好的征象 HBV的其它生物學(xué)性狀 ? 培養(yǎng) 黑猩猩動(dòng)物模型、鴨動(dòng)物模型 用分子生物學(xué)技術(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)成功 ? 抵抗力 抵抗力強(qiáng)于 HAV 對(duì)低溫干燥紫外線(xiàn)耐受 不被 70％乙醇滅活 100℃ 10 分鐘可滅活 HBV的致病機(jī)制 ? 免疫低下： HBsAg無(wú)癥狀攜帶者 ? 病毒變異：逃逸免疫 ? 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷：為主 ? 免疫復(fù)合物性的免疫損傷：肝外損傷 ? 自身免疫反應(yīng)的免疫損傷：肝特異性脂蛋白抗原 HBV的傳染機(jī)制 ?傳染源 主要傳染源是患者或無(wú)癥狀 HBsAg攜帶者 ? 傳播途徑 密切接觸 血液及體液 母嬰傳播 不嚴(yán)格集體預(yù)防接種、藥物注射 針刺、文身等 乙型肝炎的特點(diǎn) ?我國(guó)約有 40%60%人群曾受到過(guò) HBV的感染 ?表現(xiàn)急性乙肝的僅占 %1%， 亞臨床 30%75%，慢性乙肝 1%5%，乙肝病毒攜帶 7%20%) ?急性乙肝如治療不徹底， 10%患者可轉(zhuǎn)為慢性乙肝 乙肝五項(xiàng)及 HBV DNA的臨床意義 ?HBsAg、 抗 HBs ?HBeAg、 抗 HBe ?抗 HBc （ HBcAg） ?HBV DNA ? 乙型肝炎病毒抗原 ,特別是表面抗原 ,在血液中的濃度較高 ,現(xiàn)癥 HBV感染 —— 明確診斷 。 ? 僅抗 HBc單項(xiàng)陽(yáng)性 ,也可在血清中檢測(cè)到 HBV DNA ? 乙型肝炎的診斷往往不需要進(jìn)行病毒核酸的檢測(cè) 。 ? 抗病毒治療時(shí) ,血清中的病毒核酸含量是反映病毒數(shù)量和復(fù)制活躍程度最可靠的直接指標(biāo) 、 動(dòng)態(tài)觀(guān)察藥物療效的確切指標(biāo) ,特別是對(duì)于 HBeAg陰性患者 。 預(yù)防及免疫 ?控制傳染源，切斷傳播途徑 ?人工自動(dòng)免疫： 疫苗（血源性、基因工程 ) ?人工被動(dòng)免疫： 高效價(jià)人血清球蛋白（ HBIg） 丙型肝炎病毒（ hepatitis C virus） HCV的生物學(xué)性狀 ?40～ 60nm球形 ?有包膜 ?單正鏈 RNA HCV的基因結(jié)構(gòu) 丙型肝炎的特點(diǎn) ?我國(guó)丙肝病毒攜帶者的比例在 2%5% ?隨著年齡的增長(zhǎng)，丙肝病毒攜帶率亦增高 ?易感人群感染 HCV后，慢性化的比例高達(dá) 50%以上 ?乙肝患者容易重疊 HCV感染 HCV的診斷及預(yù)防 ?檢查病毒 RNA ?檢測(cè)抗 HCV ?因 HCV免疫原性不強(qiáng)及變異，目前尚無(wú)可用疫苗 HCVRNA ? HCV是引起輸血后肝炎主要致病因子，因?yàn)檠?HCV含量?jī)H為 HBV的千分之一，加之其免疫學(xué)標(biāo)志僅有抗 HCV一項(xiàng)，至今 HCV分離尚不成功，其檢測(cè)較 HBV困難得多，因此分子生物學(xué)方法在此應(yīng)用顯得格外重要。 丙型肝炎基因診斷及意義 ? 結(jié)果判斷 ? 抗 HCV(+)伴 ALT?，或已排除其他肝炎的慢性肝炎，可診斷為丙肝。 ? 抗 HCV(+)， ALT N。必須檢測(cè)到 HCVRNA(+)（定性）才診斷 丙肝。 丙型肝炎基因診斷及意義 ? 結(jié)果判斷 ? 抗 HCV()，臨床懷疑丙肝。應(yīng)做 HCVRNA二次定性或有一次定量 (+)，可診斷為丙肝。常見(jiàn)于免疫功能低下或缺陷、少數(shù)兒童和老人。 ? 急性丙肝抗 HCV檢出率為 50%90%，應(yīng)檢測(cè) HCVRNA。 ? 抗病毒藥用治療必須用定量 PCR檢測(cè)反映藥物療效。 HCVRNA ?病原學(xué)： ? 單鏈正股 RNA 病毒基因組長(zhǎng)度 10KB，為一個(gè)連續(xù)的 ORF，包含多個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)和非結(jié)構(gòu)區(qū)的蛋白基因。 HCV變異及其亞型：序列變異率在 %之間 ,不同國(guó)家和地區(qū)分離的毒株基因差異很大 ,同一患者在不同時(shí)期分離的毒株也有變異 . HCV基因組分為 IIV型和若干亞型 . ?定量檢測(cè) HCV—RNA: ? ,在 HCV陽(yáng)性之前 ? HCV感染有無(wú)傳染性的指標(biāo) ? HCV的生物學(xué)性狀 ?40～ 60nm球形 ?有包膜 ?單正鏈 RNA HCV的致病性與免疫性 ?傳播途徑似 HBV ?是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因 ?潛伏期： 48周 ?無(wú)癥狀 HCV攜帶者和慢性丙肝者多見(jiàn) ?誘發(fā)肝外損傷：腎小球腎炎 ?免疫力不牢固 丙型肝炎的特點(diǎn) ?我國(guó)丙肝病毒攜帶者的比例在 2%5% ?隨著年齡的增長(zhǎng)，丙肝病毒攜帶率亦增高 ?易感人群感染 HCV后，慢性化的比例高達(dá) 50%以上 ?乙肝患者容易重疊 HCV感染 HCV的診斷及預(yù)防 ?檢查病毒 RNA ?檢測(cè)抗 HCV ?因 HCV免疫原性不強(qiáng)及變異，目前尚無(wú)可用疫苗 HCV的診斷及預(yù)防 ?丙型肝炎病毒：中國(guó)普通人群抗 ＨＣＶ抗體的陽(yáng)性率為 3 2% ?全世界約 1 7億人感染了ＨＣＶ ?目前除了干擾素 α(ＩＦＮ α)或其與利巴韋林聯(lián)合應(yīng)用對(duì)部分患者有一定療效 ?疫苗研究：由于ＨＣＶ包膜糖蛋白Ｅ 2中和性抗原位點(diǎn)存在高變區(qū) 1(ＨＶＲ 1)進(jìn)展甚微 ? ＨＣＶ抗原表位：線(xiàn)性表位、空間表位。如果以ＨＣＶ特異性抗體對(duì)化學(xué)合成的隨機(jī)噬菌體多肽庫(kù)進(jìn)行篩 選 ,則很難篩選到與原始的抗原序列完全一致的序列 ,而是獲得大量與原始抗原序列完全不同的多肽片段。這種一級(jí)結(jié)構(gòu)序列與原始抗原不同 ,又保留其抗原反應(yīng)性的抗原表位 ,稱(chēng)為模擬表位 (ｍｉｍｏｔｏｐｅ )。從其結(jié)構(gòu)而言 ,模擬表位多數(shù)是構(gòu)象表位 (ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｅｐｉｔｏｐｅ ),即空間表位。 ? 噬菌體表面展示技術(shù)的建立和應(yīng)用促進(jìn)了ＨＣＶ抗原模擬表位的研究。國(guó)外學(xué)者應(yīng)用噬菌體表面展示技術(shù)篩選獲得了ＨＣＶ不同的結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白抗原的模擬表位。這些研究結(jié)果首先在免疫學(xué)理論上闡明了抗原 抗體分子之間相互對(duì)應(yīng)的多樣性的問(wèn)題 ,同時(shí)由于模擬表位的抗原性較強(qiáng) ,且具有廣譜性 ,因此 ,在新型診斷試劑和廣譜疫苗的研究中具有重要的應(yīng)用前景。 HCV的診斷及預(yù)防 ?丙型肝炎病毒感染的診斷 ,第三代血清學(xué)檢測(cè)試劑 ——較好的敏感性和特異性 ,但 20%患者可不出現(xiàn)抗體 ,或有的患者抗體存在時(shí)間可以很長(zhǎng) ?現(xiàn)行感染 ， 早期診斷 ——因此 ,核酸檢測(cè)在HCV感染的診斷中要比 HBV感染的診斷重要得多 。 ? 丁型肝炎病毒（ hepatitis D virus， HDV） ? HDV是一種缺陷病毒 ? 由 HBsAg構(gòu)成其外殼 ? HDV定位于肝細(xì)胞核內(nèi)，在血液中由 HBsAg包被，形成 3537nm顆粒 ? 單負(fù)鏈環(huán)狀 RNA HDV的結(jié)構(gòu) ? Rizzetto于1977年首先發(fā)現(xiàn)，又稱(chēng) ? 抗原 ? 3537nm球形顆粒； ? ssRNA ? 含 9個(gè) ORF 丁型肝炎的特點(diǎn) ? 只能感染 HBsAg陽(yáng)性的病人 ? 我國(guó)丁肝感染率在 %5%，西南地區(qū)感染率高 ? 患者可不定期隔離，或隔離至肝功能正常，或 HBsAg陰轉(zhuǎn)。 ? 病原學(xué)檢查為 HDAg、 抗 HD及 HDVRNA， 持續(xù)高滴度 IgG型抗 HD是慢性 HDV感染的主要血清學(xué)標(biāo)志。一旦乙肝患者感染了 HDV， 尤其是在慢性乙肝的基礎(chǔ)上感染，容易發(fā)展成為重度慢性乙肝、重型肝炎，甚至肝硬化。 微生物學(xué)檢查及預(yù)防 ?診斷為檢測(cè)抗 HD ?HDVRNA ?丁型肝炎傳播途經(jīng)與乙型肝炎相似。 傳播途徑和防治原則似HBV。 戊型肝炎病毒（ hepatitis E virus， HEV） ?球形，無(wú)包膜 ?直徑 32～ 34nm ?單正鏈 RNA， 3個(gè) ORF ?兩個(gè)血清型 致病性及免疫 ?主要為糞－口途徑傳播 ?由膽汁經(jīng)糞便排出體外 ?對(duì)肝細(xì)胞的直接損傷及免疫病理作用 ?多表現(xiàn)為急性戊型肝炎 ?孕婦感染常致流產(chǎn) 戊型肝炎的特點(diǎn) ? 與甲型肝炎相比，患者黃疸前期癥狀重，病程持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，病死率較高，特別是孕婦感染 HEV后。青壯年是 HEV最喜歡攻擊的人群。 ? 戊型肝炎分兩種： “ 流行性 ” 多發(fā)生在雨季和洪水后， “ 散發(fā)性 ” 在秋冬季呈現(xiàn)高峰。 ? 傳染性強(qiáng)的時(shí)間在患者將要出現(xiàn)癥狀前 (潛伏末期 )至發(fā)病初期，患者的隔離期為起病后 3周。 ? 尚末發(fā)現(xiàn)有 2次發(fā)病者。 微生物學(xué)檢查及預(yù)防 ? 檢測(cè) HEV： EM或 IEM ? 檢測(cè)抗 HEV IgM ? HEV RNA ? 預(yù)防與甲肝類(lèi)似 ? TLMV病毒（ TTVliked mini virus, TLMV） ：2022年 Takahashi TTVDNA引物作 PCR， 檢測(cè)抗HCV陽(yáng)性血漿， 10份 TTV DNA滴度 105拷貝 /ml，其中 3份（分別為 CBD23 279和 203）血漿 PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度較預(yù)期為短（約 ）， 該病毒的全長(zhǎng) DNA序列較 TTV為短，分別為 2 860nt（ CBD231株）、 2 856nt–BD279株）和 2 897nt（ CBD203株），證明是一種新病毒，命名為 TTV樣微小病毒（ TTVlike mini virus， TLMV） . ? 準(zhǔn)種的研究：集中在 RNA病毒（ RNA病毒變異大，復(fù)制快，短時(shí)間內(nèi)感染個(gè)體中即可形成一個(gè)彼此密切相關(guān)的異質(zhì)性病毒群體 .） ? HCV和 HIV ? 病毒的準(zhǔn)種特性：實(shí)質(zhì)是進(jìn)化的一種生存優(yōu)勢(shì)，病毒最大限度地 制造 自己的大量變異序列，這些序列中可能包括了潛在有用的變異體，對(duì)抗病毒制劑有抵抗能力 ? 能逃避 CTL攻擊和誘導(dǎo)免疫耐受的突變體 . 這樣當(dāng)環(huán)境改變后病毒可以快速的作出反應(yīng)，從而保證其在宿主體內(nèi)的生存 ? 最近的研究還發(fā)現(xiàn)病毒準(zhǔn)種象人體免疫系統(tǒng)一樣具有記憶能力，當(dāng)準(zhǔn)種再次遇到經(jīng)歷過(guò)的環(huán)境作用時(shí)，保存在突變譜內(nèi)的少量病毒株將迅速大量復(fù)制成為準(zhǔn)種的主導(dǎo)序列 .因此如果病毒準(zhǔn)種的復(fù)雜性越大，治療難度就可能越大 . ? 在 HCV的研究中已發(fā)現(xiàn)，病毒準(zhǔn)種的異質(zhì)性越大，對(duì) IFNα的應(yīng)答性就越差 DNA病毒的 HBV也存在準(zhǔn)種特性 . 已有少量的研究報(bào)道證實(shí)了這種假說(shuō)，有關(guān) HBV準(zhǔn)種復(fù)雜性與 IFNα應(yīng)答性之間相關(guān)性研究尚未見(jiàn)報(bào)道 . HBV不僅存在準(zhǔn)種特性，且在慢性乙型肝炎中準(zhǔn)種的復(fù)雜性和異質(zhì)性還很大 . 同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，在 IFNα應(yīng)答的患者中，準(zhǔn)種的復(fù)雜性明顯小于非應(yīng)答患者，這與在 HCV的研究發(fā)現(xiàn)相一致 . 肝臟天然免疫系統(tǒng)的研究意義： 肝臟 NK細(xì)胞研究 NK細(xì)胞是天然免疫的核心細(xì)胞 ,在腫瘤及病毒的免疫監(jiān)視中十分重要 ,國(guó)內(nèi)該領(lǐng)域研究十分薄弱 。 肝臟是機(jī)體天然免疫的核心器官 ,近 3年才形成此概念 ,國(guó)際上研究亦十分薄弱 ,有望形成自有學(xué)科優(yōu)勢(shì) 。 ? DL C1基因表達(dá)與肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 ? 應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng) (RQPCR)研究位于 8P的 DLC l基因 mRNA表達(dá)與肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。收集 5l例復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院外科手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌 (H C C)及癌旁正常組織標(biāo)本，根據(jù)臨床病理學(xué)指標(biāo)，分為高低侵襲性?xún)山M，用RQ—PCR對(duì)不同侵襲性 H CC之間的 DLC l基因表達(dá)進(jìn)行分析。對(duì)不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能 Mtt CC 9 7一 L． MHCC97一 H、 HCCLMHep3B及 HepG2肝癌細(xì)胞系用同樣方法分析 DLC—l基因的表達(dá)差異。結(jié)果非轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 Hep3B和 HepG2與轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MHCC97一 L、 MHCC97 H和 ttCCLM 3之間 DLC l基因表達(dá)差 ? 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (尸 0． 01)，并隨著侵襲與轉(zhuǎn)移潛能的逐步提高 DlJC l表達(dá)水下也相應(yīng)逐步降低； HCCLM 3細(xì)胞系顯著低于 MHCC97 L細(xì)胞系 (P0． 01)。 HCC組織中，高侵襲忡HCC組 DLC—l基因表達(dá)明顯低于低侵襲性 HCC組 (P0． 05)。結(jié)論 DI C—l基因表達(dá)與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移的抑制相關(guān)，其表達(dá)可能在抑制肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。 ? RNA干擾技術(shù)用于抗乙型肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)研究 ? 構(gòu)建針對(duì)乙型肝炎病毒表面抗原 (IIBSAg)和核心抗原的小干擾 RNA (siRNA)表達(dá)載體 pSUper C， 觀(guān)察其對(duì) HepG2 2． 2． 1 5細(xì)胞 (簡(jiǎn)稱(chēng) 2． 1 5細(xì)胞 )中 HBV DNA轉(zhuǎn)錄和翻譯相應(yīng)蛋白的影響。根據(jù) RNA干擾 (RNAi)作用原理設(shè)計(jì)針對(duì)IIBV核心區(qū)的相應(yīng)序列，再將其克隆入含聚合酶 Ⅲ H l R NA 啟動(dòng)子的真核表達(dá)載體 PSUPe r， 將此重組質(zhì)粒以電轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)入 2． 2． 1 5細(xì)胞中，用酶聯(lián)免疫吸附法 (Abbott試劑 )檢測(cè)培養(yǎng)上清液中 HBsAg和 e抗原 (HBeAg)的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)酶切鑒定、電泳和測(cè)序分析證明，