人教版教學課件生物選修1之蛋白質(zhì)的提取和分離(編輯修改稿)
2025-02-02 14:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 加蒸餾水到原血液體積，再加 40％體積的甲苯 ，置于磁力攪拌器上充分攪拌10分鐘（加速細胞破裂） ,細胞破裂釋放出血紅蛋白。 磁力攪拌器 返回 分離過程 紅細胞 混合液 高速離心 10min 離心管 濾紙 過濾 脂類物質(zhì) 燒杯 (3)分離血紅蛋白溶液 ： ① 過程： 將攪拌好混合液轉移到離心管內(nèi)，以 2022r/min的速度離心 10 min。 ②試管中溶液層次： 第 1層（最上層）：甲苯層（無色透明）；第 2層（中上層）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（白色薄層固體）；第 3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（紅色透明液體）；第 4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（暗紅色）。 ③分離： 用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。 甲苯層 （ 無色透明 ） 白色薄層固體 紅色透明液體 雜質(zhì)沉淀層 （ 暗紅色 ） 試管中溶液層次 返回 20mmol/L磷酸緩沖液 1mL 1mL 利用透析袋透析 透析過程 返回 純化－－凝膠色譜操作 制作 ： 裝填 ： 教材圖 5－ 19 加入和洗脫 （二）凝膠色譜操作 （ 1）凝膠色譜柱的制作： ①取長 40厘米，內(nèi)徑 玻璃管， 兩端需用砂紙磨平。 ②底塞的制作： 打孔 → 挖出凹穴 → 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用 100目尼龍紗包好，插到玻璃管的 一 端 。 注意事項 ： 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實尼龍網(wǎng)，還會導致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。 ③頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。④組裝： 將上述三者按相應位置組裝成一個整體 。⑤安裝其他附屬結構。 裝配好的凝膠柱 返回 材料：交聯(lián)葡聚糖凝膠 G75； 20mmol/L磷酸緩沖液 裝填 : ： 步驟 操作要求 ① ② ③ ④ ⑤ 立刻用磷酸緩沖液洗滌平衡 12h 洗滌平衡 一次性緩慢倒入；輕輕敲打 裝填懸浮液 凝膠顆粒＋洗脫液 → 沸水浴 凝膠顆粒＋蒸餾水 → 充分溶脹 根據(jù)色譜柱體積計算凝膠用量 色譜柱垂直固定在支架上 配制懸浮液 計算稱量凝膠 固定色譜柱 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ① 凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。 B、代表意義 ： “ G”表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍 。 75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時吸水 。 ② 凝膠的前處理： 配制凝膠懸浮液：計算并稱取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中充分溶脹后，配成凝膠懸浮液。 ③ 凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性的裝填入色譜柱內(nèi)，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻。 注意： 凝膠裝填時盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。 裝填凝膠柱時不得有氣泡存在： 因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 。 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用
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