組化3第三章酶組化(編輯修改稿)
2025-02-02 07:20 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 硫化鉛沉淀為酶活性所在部位。 (5)對(duì)照 : 可除去底物 ,或以 223。－甘油磷酸鈉代替底 物 ,或加入堿性磷酸酶抑制劑溴化四唑草 酸鹽可防止雜入的堿性磷酸酶起作用。 四 、 葡萄糖－ 6－磷酸酶 (一 )名稱(chēng) 常用名 : 葡萄糖－ 6－磷酸酶（ Glucose6 phosphatase Phosphohydro lase） 葡萄糖－ 6－磷酸酶是一種催化多種磷酸化合物水解的磷酸酶 。 例如它可以最快的速度催化葡萄糖－ 6－磷酸水解 ,也可以水解阿洛糖 6磷酸 、 1,5山梨醇聚糖 6磷酸 、 甘露糖 6磷酸 、 半乳糖 6磷酸 、 核酸－ 5－磷酸及 2甘油磷酸 ,同時(shí)此酶還可水解焦磷酸 、 核苷三磷酸 ,果糖 6磷酸 、 氨甲酰基 磷酸 、 磷酸烯醇丙酮酸 、 磷酰胺鹽和某些其它焦磷酸化合物 。 （ 二 ） 光鏡顯示方法 鉛法 （ Wachstei和 Meisel 1956） （ 1） 原理：葡萄糖－ 6－磷酸被釋放出磷酸后 ， 為硝酸鉛所捕獲 ， 最終反應(yīng)產(chǎn)物為顆粒狀的硫化鉛沉淀 。 （ 2） 孵育液的配制： %葡萄糖－ 6－磷酸鈉 4ml Tris蘋(píng)果酸 （ TrisMoleate） 緩沖液 pＨ 6 4ml 2%Pb(N03)2 蒸餾水 新鮮配制 ,充分混合后使用。 （ 1）方法與步驟： ① 新鮮組織 ,冰凍切片 , ② 3%冷福爾馬林固定 5分鐘 。 ③ 水洗； ④ 入孵育液 ,恒溫 37℃ ,孵育 5～ 20分鐘 。 ⑤ 水洗； ⑥ 入 1%硫化胺 1分鐘 。 ⑦ 水洗； ⑧ 3％中性福爾馬林液后固定 10分鐘； ⑨甘油明膠封固。 (4)結(jié)果與評(píng)價(jià) : 棕色硫化鉛顆粒為活性所在部位。 (5)對(duì)照 : ① 除去底物；②以 223。－甘油磷酸鈉代替葡 萄糖－ 6－鈉鹽 ；③以 制劑。 五 、 三磷酸腺苷酶 (一 )名稱(chēng) 常用名 : 三磷酸腺苷酶 （ Adenosine triphosphatase， ATPase） (二 )反應(yīng)原理 ATP酶是分解 ATP產(chǎn)生 ADP和磷酸的酶。 ATPase水解磷酸之間的高能鍵，釋放大量的能量，而不是水解磷酸與碳之間的鍵。釋放出來(lái)的磷酸離子被鉛離子捕獲，而通過(guò)形成硫化鉛沉淀顯色。最適 pＨ 。 根據(jù) ATP酶對(duì)激活劑 、 抑制劑的不同反應(yīng) ， 以及超微定位觀察 ， 生物體內(nèi)主要有三種三磷酸腺苷酶 （ ATPase） 。 膜 ATP酶：又分為 Na+、 K+激活 ATPase 和 Mg2+激活 ATPase； 肌球蛋白 ATP酶：又稱(chēng) Ca2+激活 ATPase， 因?yàn)樗杀?Ca2+激活； 線粒體 ATP酶：由 Mg2+激活的ATPase （ 三 ） 光鏡顯示方法 Mg2+激活的三磷酸腺苷酶鉛法 （ 1） 原理： ATP酶分解 ATP釋放出來(lái)的磷酸離子被鉛離子捕獲 ， 通過(guò)形成硫化鉛沉淀顯色 。 最適 pＨ值為 。 （ 2） 孵育液的配制： 三磷酸腺苷鈉鹽 5mg Tris鹽酸 （ TrisHCl buffer） 4ml 2%Pb(N03)2 MgSO4
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