組化3第三章酶組化-文庫吧資料
2025-01-12 07:20本頁面
【正文】 ③ 蒸餾水洗； ④ 1％ CaCl2溶液換洗三次，每次 2分鐘 ⑤ 蒸餾水洗； ⑥ 入 CoCl2液 5分鐘 。－甘油磷酸鈉代替底物，顯示染色反應為堿性磷酸酶的定位。 (4)結果 : 酶活性處呈棕黑色硫化鉛沉淀 。 （ 1）方法與步驟： ① 新鮮組織 ,冰切片； ② 入孵育液，恒溫 37℃ 孵育 20~40分鐘 ③ 蒸餾水洗； ④入 1%硫化胺 1分鐘 。 最適 pＨ值為 。 根據(jù) ATP酶對激活劑 、 抑制劑的不同反應 ， 以及超微定位觀察 ， 生物體內(nèi)主要有三種三磷酸腺苷酶 （ ATPase） 。釋放出來的磷酸離子被鉛離子捕獲，而通過形成硫化鉛沉淀顯色。 五 、 三磷酸腺苷酶 (一 )名稱 常用名 : 三磷酸腺苷酶 （ Adenosine triphosphatase， ATPase） (二 )反應原理 ATP酶是分解 ATP產(chǎn)生 ADP和磷酸的酶。 (5)對照 : ① 除去底物；②以 223。 ⑦ 水洗； ⑧ 3％中性福爾馬林液后固定 10分鐘； ⑨甘油明膠封固。 ③ 水洗； ④ 入孵育液 ,恒溫 37℃ ,孵育 5～ 20分鐘 。 （ 2） 孵育液的配制： %葡萄糖－ 6－磷酸鈉 4ml Tris蘋果酸 （ TrisMoleate） 緩沖液 pＨ 6 4ml 2%Pb(N03)2 蒸餾水 新鮮配制 ,充分混合后使用。 例如它可以最快的速度催化葡萄糖－ 6－磷酸水解 ,也可以水解阿洛糖 6磷酸 、 1,5山梨醇聚糖 6磷酸 、 甘露糖 6磷酸 、 半乳糖 6磷酸 、 核酸－ 5－磷酸及 2甘油磷酸 ,同時此酶還可水解焦磷酸 、 核苷三磷酸 ,果糖 6磷酸 、 氨甲?；?磷酸 、 磷酸烯醇丙酮酸 、 磷酰胺鹽和某些其它焦磷酸化合物 。－甘油磷酸鈉代替底 物 ,或加入堿性磷酸酶抑制劑溴化四唑草 酸鹽可防止雜入的堿性磷酸酶起作用。 (4)結果與評價 : 棕黑色硫化鉛沉淀為酶活性所在部位。 ⑥ 蒸餾水沖洗 。 ④ 自來水洗 。 ② 蒸餾水水洗 。即：腺苷－５ ˊ－磷酸＋水 腺苷＋磷酸。 ５ ˊ－核苷酸酶是一種最適 pＨ值相當廣泛的酶 。 三 、 ５ ˊ－核苷酸酶 （ 一 ） 名稱 常用名： ５ ˊ－核苷酸酶 （ ５ ˊ－ Nucleotidase） ５ ˊ－核苷酸酶是一種特異性的磷酸單酯酶 ， 它能水解核糖核苷和去氧核糖核苷在Ｃ－ 5位置的磷酸酯 ， 如一磷酸腺苷 （ ＡＭＰ ） ， 一磷酸肌苷 （ ＩＭＰ ） ， 尿苷－磷酸（ UMP） ,胞苷－磷酸 （ ＣＭＰ ） 等 ， 水解產(chǎn)生核苷和磷酸 ， 但不能分解 223。 M 4）染色結果： ACP呈棕黑色硫化鉛顆粒。 2) 染色步驟： ① 石蠟切片脫蠟到水；冰凍切片或冰凍切 片冷福爾馬林鈣固定 10 min后水洗； ② 入孵育液 2～ 4 h（肝組織 1 h左右）， 37℃ ； ③ 雙蒸餾水洗； ④ 入 1％硫化銨（新配）溶液內(nèi) 1～ 2 min ⑤ 流水洗。 （二）反應原理 顯示酸性磷酸酶，先將切片放入含有酶底物（ β甘油磷酸鈉 ）的溶液（）中孵育，底物經(jīng)酶水解，釋放磷酸，用捕捉劑硝酸鉛與磷酸反應，形成微細的磷酸鉛，沉淀于酶存在的部位，再用硫化銨處
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