組化3第三章酶組化(已改無錯(cuò)字)
2023-02-06 07:20:01 本頁面
【正文】 1ml 蒸餾水 配制時(shí) Pb(N03)2 要逐滴加入，并隨時(shí)攪拌，使充分混合至無色或淡乳白色。 （ 1）方法與步驟： ① 新鮮組織 ,冰切片； ② 入孵育液，恒溫 37℃ 孵育 20~40分鐘 ③ 蒸餾水洗； ④入 1%硫化胺 1分鐘 。 ⑤ 流水洗； ⑥甘油明膠封固。 (4)結(jié)果 : 酶活性處呈棕黑色硫化鉛沉淀 。 (5)對(duì)照 : ① 除去底物，則反應(yīng)為陰性；②以 223。－甘油磷酸鈉代替底物，顯示染色反應(yīng)為堿性磷酸酶的定位。 Ca2+激活的三磷酸腺苷酸 鈣 鈷法 （ 肌球蛋白型 ATPase Padykula和 Herman 1995） （ 1） 原理：此法類似堿性磷酸酶的鈣 鈷法， 但底物改用三磷酸腺苷鈉鹽 ， 最適 pＨ值為， 對(duì) Mg2+型 ATPase起抑制作用 。 （ 2） 孵育液的配制： 三磷酸腺苷鈉鹽 60mg 4ml 蒸餾水 2ml CaCl2 2ml 2,4－二硝基苯酚 30mg （ 1）方法與步驟： ① 新鮮組織 ,冰凍切片； ② 入孵育液，恒溫 37℃ 孵育 20~40分鐘 ③ 蒸餾水洗； ④ 1％ CaCl2溶液換洗三次，每次 2分鐘 ⑤ 蒸餾水洗； ⑥ 入 CoCl2液 5分鐘 。 ⑦ 流水洗； ⑧ 入硫化胺液 1分鐘； ⑨ 流水洗； ⑩甘油明膠封固。 (4)結(jié)果與評(píng)價(jià) : 硫化鈷黑色沉淀為酶活性所在部位。 (5)對(duì)照 : 同鉛法，可除去底物或用 223。－甘油磷酸鈉作底物。 六、 非特異性酯酶 （一）名稱 常用名： 非特異性酯酶 Nonspecific esterase） (二 ) 反應(yīng)原理 隨各種方法的不同，其原理不相同。 （三）、光鏡顯示方法 偶氮色素法（偶聯(lián)偶氮色素法） 由于使用不同的重氮鹽，具體方法也不相同，現(xiàn)分述如下： (1) 萘酚 AS乙酸鹽（ Naphthol AS acetate）法 1）孵育液的配制： 1％ 萘酚 AS乙酸鹽 （ 丙酮溶液 ） （ pH ） 10ml 堅(jiān)牢藍(lán) B鹽 30mg （ 攪拌過濾使用 ） 2）方法與步驟： ① 新鮮組織恒冷箱切片，適當(dāng)固定； ② 入孵育液，室溫或 37℃ 恒溫孵育 20~30分鐘 ③ 流水輕沖洗 2分鐘； ④ 2％甲基綠復(fù)染細(xì)胞核； ⑤ 流水沖洗 3~5分鐘； ⑥甘油明膠封固。 3）結(jié)果與評(píng)價(jià)： 酶活性部位呈黑色，胞核為綠色?；钚圆课坏娜旧鶕?jù)重氮鹽的不同而不同，堅(jiān)牢紅 TR為紫紅色，堅(jiān)牢藍(lán) RR為青銅色。 七 、 脂酶 （一）、名稱 常用名：脂（肪）酶（ Lipase） (二 )、反應(yīng)原理 脂酶又名甘油酯水解酶，它能催化長(zhǎng)鏈脂肪酸甘油（或其它醇）酯水解， Ca
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