組化3第三章酶組化-展示頁
2025-01-15 07:20本頁面
【正文】 理，磷酸鉛被置換形成粗顆粒狀的黑色硫化鉛沉淀物，便可用光鏡看到。在神經(jīng)傳導(dǎo)沖動時， ACP參與 Ca 2 +依賴的神經(jīng)遞質(zhì)釋放過程。 ACP在細胞退變過程中活性最強，在核酸和蛋白質(zhì)代謝活動增強時，也見 ACP活性增強。 二、酸性磷酸酶 （一）名稱： 常用名： 酸性磷酸酶 （ acid phosphaatase, ACP） 主要位于細胞內(nèi)的溶酶體內(nèi)，是溶酶體 的標志酶。 4）染色結(jié)果： ALP活性的最終反應(yīng)產(chǎn)物為棕黑色硫化鈷沉淀。 ⑧ 甘油明膠封片 。 ⑥ 1%(NH4)2S 1 min。 ④ 2%（ Co(NO3) 2)5 min。 ② 入孵育液 ,37 ℃ 3040min (腎組織 10min, 肝組織 60min)。7H2O) 1ml 蒸餾水 5ml 調(diào)此液 pH至 ,可冰箱保存。 （ 三 ） 光鏡顯示法 Gomori 改良鈣鈷法 1）溶液的配制： ① 孵育液： 3％ β－甘油磷酸鈉 10ml 2％巴比妥鈉 10ml 2％氯化鈣（ %CaCl2 在運輸較為活躍的細胞膜上廣泛分布 ，如毛細血管內(nèi)皮細胞 、 肝內(nèi)毛細膽管膜 、 腎近曲小管的刷狀緣 、 腸上皮的紋狀緣和神經(jīng)細胞的突觸膜等 。 ? 必須做陽性或陰性對照試驗。 ? 試劑的濃度配制必須準確。 酶組織化學(xué)反應(yīng)中注意事項 ? 在制備標本及組化實驗中必須做到既要最大限度地保存酶的活性，又要保存好組織細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，以保證酶在組織細胞中準確定位。 :是催化同分異構(gòu)體相互轉(zhuǎn)化的酶。 :是催化水解反應(yīng)的酶。 酶＋酶的底物 最初的反應(yīng)物＋另外物質(zhì) （ 金屬鹽 ） 不溶于水的顯色產(chǎn)物 酶的分類： ：是催化氧化還原反應(yīng)的酶。第三章 酶組織化學(xué)方法 第一節(jié)概述 ? 酶是生物體內(nèi)具有催化作用的特異性蛋白質(zhì)，細胞內(nèi)新陳代謝的合成和分解的生物化學(xué)反應(yīng)都有酶的參與，因此，又稱其為生物催化劑。 ? 組織化學(xué)中的酶反應(yīng)是指在一定的條件下，使組織細胞內(nèi)的酶通過作用于酶的底物，使后者被分解形成某種初級反應(yīng)產(chǎn)物，這種產(chǎn)物被捕捉劑所捕獲而沉淀于原位上，然后將這種沉淀物變成具有可見性的最終產(chǎn)物，從而間接證明酶的定位。 :是催化功能基團轉(zhuǎn)移的酶。 :是催化分裂或合成化合物的酶。 :是催化將兩種物質(zhì)合成一各物質(zhì) ,并必 須與 ATP分解相偶聯(lián)的酶。 ? 酶反應(yīng)的溫度、時間、 PH必須控制好。 ? 所用器皿必須清潔，以防污染及出現(xiàn)假陽性。 第二節(jié) 若干酶組織化學(xué)反應(yīng)程序 一 、 堿性磷酸酶 （ 一 ） 名稱： 常用名：堿性磷酸酶 （ alkaline phosphatase, ALP） 水解酶 ， 在堿性環(huán)境下催化水解磷酸脂生成磷酸和醇 。 (二 ) 反應(yīng)原理： ALP在有激活劑 （ Mg 2 +） 存在和 ，將其磷酸鹽底物 （ 如 β一甘油磷酸鈉 、 α一苯酚磷酸鈉 ） 分解產(chǎn)生甘油鈉和磷酸離子 ， 后者被孵育液中的氯化鈣所捕獲 ， 在有酶活性存在處生成磷酸鈣沉淀 ， 但為非金屬鹽 ， 需要加入硝酸鈷 ， 從而生成無色磷酸鈷沉淀 ， 再通過硫化銨處理 ， 形成棕黑色硫化鈷 。2H2O） 20ml 5%硫酸鎂 (MgSO4 ② 2％硝酸鈷（ Co(NO3) 2） ③ %硫化銨 ((NH4)2S)(新配 ) 2)染色步驟 : ① 石蠟切片脫蠟入水 ,或冰凍切片或 經(jīng) 10%福爾馬林固定 15min。 ③ 流水沖洗 5min 。 ⑤ 蒸餾水洗 。 ⑦ 蒸餾水洗 。 3）對照 :孵育液中去除 β甘油磷酸鈉 。 5）說明： 鈣鈷法在一般實驗室仍是常用的方法，但因其化學(xué)反應(yīng)多次轉(zhuǎn)換，容易造成定位不準確；石蠟切片雖然也能顯示 ALP活性，但經(jīng)石蠟包埋處理（包括酒精、二甲苯、
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