【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 對(duì)比識(shí)別。 第四節(jié) 顯微鑒定 ? 顯微鑒定 (microscopical identification) 是指利用 顯微鏡 ， 依據(jù) 對(duì)照生藥 的組織 、細(xì)胞或內(nèi)含物的特征 ， 對(duì)生藥 （ 檢品 ）進(jìn)行 真實(shí)性 鑒別的方法 。 ? 顯微鑒定通常適用于 性狀鑒定不易識(shí)別 的生藥 、 性狀相似的多來源生藥 、破碎生藥 、 粉末生藥 以及用粉末生藥制成的中藥成方制劑 。 一、對(duì)照生藥的顯微特征 ? 對(duì)照生藥 的顯微特征 ， 是依據(jù)對(duì)照生藥經(jīng)顯微觀察而獲得的生藥顯微特征 ， 經(jīng)生藥學(xué)研究者制訂并記錄于 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) 、 各種書籍和文獻(xiàn) 中 ， 是藥材顯微鑒定的依據(jù) 。 ? 顯微鑒定一般依據(jù) 對(duì)照生藥的顯微特征 。 （一）組織鑒定 ( histological identification) ? 是通過觀察植物器官的 切片 ，以生藥的組織構(gòu)造、 細(xì)胞形狀和內(nèi)含物形態(tài)等特征來鑒定生藥。 ? 適于類似品、混淆品、代用品、偽品或同屬多來源藥材的對(duì)比鑒別。 二、顯微鑒定的內(nèi)容 ? 用于 完整 藥材或能夠滿足制作切片條件的飲片的鑒定。 ? 一般來說，組織鑒定對(duì) 不同科屬 來源的藥材鑒別比較容易，對(duì)于相同科屬來源的藥材鑒別相對(duì)較困難。 （ 二 ） 粉末鑒定 (powder identification) ? 通過生藥的粉末制片，觀察生藥的 細(xì)胞、內(nèi)含物形態(tài)特征 來鑒定生藥的真?zhèn)巍? ? 用于粉末藥材、外形較大或組織構(gòu)造無(wú)鑒別特征的藥材、破碎藥材以及粉末性的中成藥的鑒別。 （ 三 ） 顯 微 化 學(xué) 反 應(yīng) ( microchemcal reaction) ? 是將生藥的干粉、手切片或浸出液少量，置于載玻片上，滴加某些化學(xué)試劑使產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶 ，或產(chǎn)生特殊的 顏色 ，在顯微鏡下觀察反應(yīng)結(jié)果，從而進(jìn)行鑒定。 ? 主要用于細(xì)胞壁、糖類、蛋白質(zhì)、草酸鹽、碳酸鹽和各類化學(xué)成分的鑒別。 1 ． 細(xì)胞壁性質(zhì)的鑒定 ? 木質(zhì)化細(xì)胞壁加間苯三酚試液 1~2 滴 ，稍放置 ， 加鹽酸 l 滴 ， 因木化程度不同 ，顯紅色或紫紅色 。 ? 木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁遇蘇丹 Ⅲ 試液 ，稍放置或微熱 ， 呈橘紅色至紅色 。 ? 纖維素細(xì)胞壁遇氯化鋅碘試液 ， 或先加碘試液濕潤(rùn)后 ， 再加硫酸溶液顯藍(lán)色或紫色 。 2. 細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的鑒定 ? 淀粉粒 遇碘試液顯藍(lán)色或藍(lán)紫色 。 ? 糊粉粒 ， 加碘試液 ， 顯棕色或黃棕色；加硝酸汞試液顯磚紅色 。 ? 脂肪油 、 揮發(fā)油或樹脂 ， 加蘇丹 Ⅲ 試液呈橘紅色 、 紅色或紫紅色；加 90 ％ 乙醇 ， 脂肪油一般不溶解 ， 揮發(fā)油則溶解 。 ? 菊糖 加 10 ％ α 萘酚的乙醇溶液 ， 再加硫酸 ， 顯紫紅色并很快溶解 。 ? 粘液細(xì)胞 遇釕紅試液顯紅色 。 ? 草酸鈣 結(jié)晶在裝片時(shí)加入硫酸溶液逐漸溶解 ， 并析出針狀硫酸鈣結(jié)晶 。 ? 碳酸鈣 結(jié)晶 （ 鐘乳體 ） 加入稀鹽酸溶解 ，同時(shí)有氣泡產(chǎn)生 。 3. 細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分的鑒定 ? 選擇合適的 化學(xué)試劑 ， 如肉桂粉末加氯仿 2~3 滴 ， 略浸漬 ， 速加 2% 鹽酸苯肼 1 滴 ，可見黃色針狀或桿狀結(jié)晶 （ 示桂皮醛反應(yīng) ） ； ? 檳榔粉末酸性水浸液滴于玻片上 ， 加 碘化鉍鉀 試液 ， 即發(fā)生渾濁 ， 放置后可見石榴紅色球形或方形結(jié)晶 （ 示檳榔堿反應(yīng) ） 。 ? 利用顯微化學(xué)定位試驗(yàn) ， 確定生藥有效成分在生藥組織構(gòu)造中的 部位 ， 如北柴胡橫切片加 1 滴無(wú)水乙醇 濃硫酸 (1:1) 液 ， 在顯微鏡下觀察可見木栓層 、 栓內(nèi)層和皮層顯黃綠色 ~ 藍(lán)綠色 ， 示北柴胡的有效成分柴胡皂甙存在于這些部位 。 4. 微量升華 ? 生藥中某些化學(xué)成分，在一定溫度下升華，在顯微鏡下觀察其 結(jié)晶形狀、顏色及化學(xué)反應(yīng) 作為鑒別特征。 ? 大黃粉末升華物有黃色針狀（低溫）、枝狀和羽狀（高溫）結(jié)晶，在結(jié)晶上加堿液呈紅色，進(jìn)一步確證其為蒽醌類成分。 ? 薄荷的升華物為無(wú)色針簇狀結(jié)晶（薄荷腦），加濃硫酸 2 D及香草醛結(jié)晶少許，顯黃至橙黃色，再加 DW 1D變紫紅色。 三、顯微鑒定的方法 （ 一 ） 制片 ? 包括 組織制片、表皮制片和粉末制片 。 ? 組織制片 的方法主要有徒手制片、滑走制片、冰凍制片及石蠟制片等。對(duì)植物類中藥，如根、根莖、莖藤、皮、葉等類，一般制作 橫切片 觀察，必要時(shí)制縱切片；果實(shí)、種子類須制作橫切片及縱切片觀察；木類藥材須制作橫切片、徑向縱切片及切向縱切片三個(gè)面觀察。 ? 表皮制片 系將表皮細(xì)胞組織制成顯微觀察片的一種方法 ? 適用于觀察葉片、花瓣、花萼和其它器官表皮的細(xì)胞形狀、氣孔、腺毛、非腺毛的類型和角質(zhì)層的紋理以及各種細(xì)胞內(nèi)含物等的顯微特征。 ? 粉末制片 用于觀察藥材的組織、細(xì)胞及細(xì)胞后含物特征，制片時(shí)根據(jù)觀察目的物的不同選用斯氏液或水合氯醛制片。 ? 有時(shí)為了觀察某些細(xì)胞組織如纖維、石細(xì)胞、導(dǎo)管等，可制解離組織片。 （ 二 ） 顯微觀察與結(jié)果記錄 ? 1. 組織特征的觀察與描述 ? 組織特征特別是 橫切面 組織特征的觀察與描述 ， 一般是 由外向內(nèi) 依次進(jìn)行 。 ? 在觀察與描述中 ， 首先注意其各部分的位置 、 形態(tài) 、 有無(wú)其它組織分布等特征 。 其次應(yīng)注意各種細(xì)胞及其內(nèi)含物的顏色 、 形狀 、 大小 。 ? 2. 粉末特征的觀察與描述 ? 粉末制片在顯微鏡下觀察時(shí) ， 可見到多種組織碎片 、 細(xì)胞及內(nèi)含物的特征 。 ? 描述方法同上 ， 在描述順序上 ， 一般可以按照 “ 先多后少 ” 或 “ 先特殊后一般 ” 的原則進(jìn)行 。 ? 3. 顯微測(cè)量 ? 指在顯微鏡下用 目鏡測(cè)微尺 測(cè)量細(xì)胞和后含物的大小 。 先將目鏡測(cè)微尺用 載臺(tái)測(cè)微尺 標(biāo)化 ， 計(jì)算出每一小格的 μm 數(shù) ， 應(yīng)用時(shí)將測(cè)得目的物的小格數(shù) ， 乘以每一小格的 μm 數(shù) ， 即得所欲測(cè)定物的大小 。 ? 測(cè)量微細(xì)物體時(shí)宜在高倍鏡下進(jìn)行 ， 而測(cè)量較大物體時(shí)可在低倍鏡下進(jìn)行 。 ? 4. 結(jié)果記錄 ? 除用文字來描述之外，均需 附圖 說明。 ? 附圖可用 顯微繪圖法 繪制，也可用顯微攝影技術(shù)攝制。 ? 顯微攝影 是利用顯微照相設(shè)備將顯微鏡下觀察的影像攝錄下來的一項(xiàng)技術(shù)。 ? 目前計(jì)算機(jī)圖像采集軟件較多，一般 多 具有靜態(tài)圖 像 、動(dòng)態(tài)圖 像 及連續(xù)圖像采集功能， 數(shù)碼顯微攝影圖像清晰逼真，操作方便快捷， 便于存儲(chǔ)與編輯，且還具圖像編輯、顯微測(cè)量功能。 偏光顯微鏡的應(yīng)用 ? 偏光顯微鏡（ polarizing microscope）： 利用自然光在通過 各向異性 透明體時(shí)，產(chǎn)生偏振光的原理。 ? 樣品為各向異性的物質(zhì)時(shí)，呈現(xiàn)不同色彩，樣品各向同性時(shí)，呈現(xiàn)暗視野 ? 常用于淀粉和晶體物質(zhì)的觀察，亦用于具有各向異性的中藥粉末的觀察。 掃描電子顯微鏡 ? 分辨率高 ? 圖像呈現(xiàn)表面 立體結(jié)構(gòu) ? 同科屬種間的表面結(jié)構(gòu)鑒別 四、各類藥材的顯微觀察要點(diǎn) （ 一 ） 根類藥材 ? 1. 組織構(gòu)造 ? （ 1） 雙子葉植物根類 多數(shù)為 次生構(gòu)造 ， 表層為木栓組織；皮層狹窄；韌皮部較發(fā)達(dá)或較狹窄；形成層環(huán)多明顯；木質(zhì)部由導(dǎo)管 、管胞 、 木纖維 、 木薄壁細(xì)胞及木射線組成；中央大多無(wú)髓 ， 少數(shù)有明顯的髓部 。 ? 少數(shù)雙子葉植物根類藥材為 初生構(gòu)造 ，皮層寬 ， 中柱小 ， 木質(zhì)部束及韌皮部束數(shù)目少 ， 相間排列 ， 初生木質(zhì)部呈星芒狀 ， 一般無(wú)髓 。 ? 有些雙子葉植物根有異常 三生構(gòu)造 ， 例如何首烏根的形成層環(huán)外方有數(shù)個(gè)異常復(fù)合維管束 。 ? （ 2） 單子葉植物根類 單子葉植物根類藥材一般 無(wú)木栓組織 ， 其表皮細(xì)胞外壁有時(shí)增厚 ， 也有表皮發(fā)育成數(shù)列根被細(xì)胞 ， 壁木栓化或木化； 皮層寬廣 ， 占根的大部分；內(nèi)皮層凱氏點(diǎn) ( 帶 ) 通常明顯； 中柱小 ；木質(zhì)部束及韌皮部束數(shù)目多 ， 相間 排列成一圈；中央 髓部 大多為薄壁細(xì)胞或細(xì)胞壁木化增厚 。 ? 粉末特征 ? 除葉肉組織 外 ， 其它細(xì)胞 、 組織碎片都可能存在 。 ? 根的 木栓組織 多見 ，應(yīng)注意木栓細(xì)胞表面觀的形狀 、 顏色 、壁的厚度 。 ? 導(dǎo)管 一般較粗 ， 應(yīng)注意其類型 、 直徑 、導(dǎo)管分子的長(zhǎng)度及末端壁的穿孔 、 紋孔的形狀及排列等 。 ? 石細(xì)胞應(yīng)注意形狀 、 大小 、 細(xì)胞壁增厚形態(tài)和程度 、 紋孔形狀及大小 、 孔溝密度等特征 。