重組體的篩選ppt課件(編輯修改稿)
2025-01-31 21:02 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 A的雜交 ，即將 DNA電泳、轉(zhuǎn)印到固相支持物上，用探針進(jìn)行檢測(cè)的方法。 帶有 DNA片段的凝膠 DNA分子 限制片段 限制性酶切割 瓊脂糖電泳 至膜 （尼龍膜或硝酸纖維素濾膜） 上 轉(zhuǎn)膜 雜交、顯影 凝膠 濾膜 用緩沖液轉(zhuǎn)移 DNA 吸附有 DNA片段的膜 實(shí)驗(yàn)步驟 白瓷盤 玻璃板 濾紙 凝膠 尼龍膜 濾紙 吸水紙 玻璃板 重物 吸水紙轉(zhuǎn)膜 用于 分析混合 DNA樣品中是否存在能與特定探針雜交的序列 。 Southern雜交由于濾膜是從凝膠上原位印跡而來，因而 能夠顯示出與探針雜交的 DNA片段的大小 。 用 途 Southern雜交定位 kan抗性基因 直接凝膠電泳檢測(cè)法 利用有插入片段的重組載體的分子量比野生型載體分子量大。 從轉(zhuǎn)化后的菌體克隆中分離質(zhì)粒，電泳、比較其分子量。 分子量 Marker 載體 重組克隆 實(shí)驗(yàn)步驟 bp — 1534 — 994 — 695 — 515 — 377 — 237 A B C M 酶切電泳篩選法 原 理 根據(jù)已知的外源 DNA序列的限制性酶切圖譜，選擇一兩種內(nèi)切酶切割質(zhì)粒，電泳后比較電泳結(jié)果（ DNA帶數(shù)和長(zhǎng)度） 用合適的內(nèi)切酶切下插入片斷，再用其它酶切這個(gè)片斷，電泳后比較結(jié)果。 A B A或 B 不同克隆的酶切結(jié)果 篩選過程 表型篩選加酶切篩選AATTAATT第二節(jié) 免疫化學(xué)與核酸分析法 利用抗體作為 “ 探針 ” 來檢測(cè)轉(zhuǎn)入受體菌并且表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)的外源基因。
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