[醫(yī)學(xué)]第六章血液代用品(編輯修改稿)
2025-01-30 23:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ， 再加40％體積的 甲苯 ， 置于 磁力攪拌器 上充分?jǐn)嚢?10分鐘 （ 加速細(xì)胞破裂 ） ,細(xì)胞破裂釋放出 血紅蛋白 。 (3)分離血紅蛋白溶液： ①過程： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2022r/min的速度離心 10 min。 ②試管中溶液層次： 第 1層（最上層）：甲苯層（ 無色透明 ）；第 2層（中上層）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（ 白色薄層固體 ）；第 3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（ 紅色透明液體 ）；第4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（ 暗紅色 ）。 ③分離： 用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的 紅色透明液體 。 (4)透析： ①過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入 透析袋 中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12小時。 ②透析目的： 除去樣品中分子量較小的雜質(zhì) 。 ② 原理：透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而大分子保留在袋內(nèi)。 Company Logo 透析過程動畫演示 利用透析袋透析 凝膠色譜操作 : （ 1）凝膠色譜柱的制作： ①取長 40厘米，內(nèi)徑 ， 兩端需用砂紙磨平。 ②底塞的制作： 打孔 → 挖出凹穴 → 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用 100目尼龍紗包好，插到玻璃管的 一 端 。 注意事項 ： 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實尼龍網(wǎng)，還會導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。 ③頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。④組裝： 將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個整體 。 ⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ①凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。 B、代表意義： “ G” 表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍 。 75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時吸水 。 ② 凝膠的前處理： 配置凝膠懸浮液： 計算并稱取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中充分溶脹后，配成凝膠懸浮液。 ③ 凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定： 將色譜柱裝置固定在支架上。 B、裝填： 將凝膠懸浮液一次性的裝填入色譜柱內(nèi)，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻。 注意： 凝膠裝填時盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。 裝填凝膠柱時不得有氣泡存在： 因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 。 裝配好的凝膠柱 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12小時 。 注意： 液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入 ，影響液體在柱內(nèi)的流動與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。 不能發(fā)生洗脫液流干， 露出凝膠顆粒的現(xiàn)象 。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 50cm高 （ 3）樣品加入與洗脫 ①調(diào)節(jié)緩沖液面： 打開下端出口，使柱內(nèi)緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。 ② 滴加透析樣品 ： 吸管吸 1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣，同時注意不要破壞凝膠面。 ③樣品滲入凝膠床： 加樣后打開下端出口，使樣
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