紫外-可見光分光光度法(1)(編輯修改稿)
2024-11-14 18:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O 磷鉬黃 (?小 ) 磷鉬 (V)藍 (?大 ) Sn2+ 23 3. 蛋白質(zhì)測定 — 溴甲酚綠、考馬司亮藍等 4. 氨基酸測定 — 茚三酮 (紫色化合物 ) 5. 水質(zhì)檢測 : NH4+、 NO Mn2+、 Fe2+、SO4 Hg2+ 6. 藥物含量測定 — 比吸光系數(shù)定量；荷移光譜法測定 . 7. 紫外吸收 (UV): NO NO SO4SO3 CO3 SCN、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。 24 單組分定量分析 ? 紫外 可見吸收光譜是進行定量分析最廣泛使用的、最有效的手段之一。尤其在醫(yī)院的常規(guī)化驗中， 95%的定量分析都用此法。其用于定量分析的優(yōu)點是： ? 1) 可用于無機及有機體系。 一般可檢測 104105 mol/l的微量組分，通過某些特殊方法 (如膠束增溶 )可檢測 106107 mol/l的組分。 ? 2)準確度高，一般相對誤差 13%，有時可降至百分之零點幾。 ? 3)分析條件的選 ? 定量分析方法 ? 標準曲線法 ? 標準加入法 25 標準曲線法 ? 配制不同濃度的標準溶液，由低濃度至高濃度依次測定其吸收光譜，作一定波長下濃度與吸光度的關系曲線，在一定范圍內(nèi)應得到通過原點的直線，即標準曲線。通過標準曲線可求得未知樣品的濃度。 標準加入法 ? 樣品組成比較復雜，難于制備組成匹配的標樣時用標準加入法。將待測試樣分成若干等份，分別加入不同已知量 0, C1, C2…, Cn 的待測組分配制溶液。由加入待測試樣濃度由低至高依次測定上述溶液的吸收光譜，作一定波長下濃度與吸光度的關系曲線，得到一條直線。若直線通過原點，則樣品中不含待測組分；若不通過原點，將直線在縱軸上的截距延長與橫軸相交，交點離開原點的距離為樣品中待測組分的濃度。 26 多組分的測定 ?x?1, ?y?1, ?x?2, ?y?2由 x,y標液 在 ?1, ?2處分別測得 . a) 在 ?1處測組分 x, 在 ?2處測組分 y. b) 在 ?1處測組分 x。 在 ?2處測總吸收 ,扣除 x吸收 ,可求 y. c) x,y組分不能直接測定 A1=?x?1bcx+ ?y?1bcy(在 ?1處測得 A1) A2 =?x?2bcx+ ?y?2bcy(在 ?2處測得 A2) 27 光度滴定 NaOH滴定 對硝基酚 pKa= 間硝基酚 pKa= ? pKa= V1 V2 V(NaOH)/mL 對硝基酚 間硝基酚 酸形均無色 . 堿形均黃色 28 典型的光度滴定曲線 依據(jù)滴定過程中溶液吸光度變化來確定終點的滴定分析方法。 Vsp 滴定劑吸收 Vsp 被滴物吸收 Vsp 滴定劑與待測物均吸收 Vsp 產(chǎn)物吸收 29 絡合物組成的測定 1. 摩爾比法 : 固定 cM ,改變 cR 1:1 3:1 c(R)/c(M) A 3,0 30 2. 等摩爾連續(xù)變化法 : M R M R nn?MR (c c c ）?? 常數(shù)M:R=1:1 cM/c cM/c M:R=1:2 0 1 0 1 31 一元弱酸離解常數(shù)的測定 HL H＋ ＋ L HLHL L= [ H L ] + [ L ]KccAKK???? ? ? ??+ L++aaa(HL)[ H ] ( H L )=++ [ H ] + [ H ]Ka＝ [H+][L]/[HL] 高酸度下，幾乎全部以 HL存在，可測得 AHL＝ εHLc(HL)； 低酸度下，幾乎全部以 L存在，可測得 AL ＝ εLc(HL). 代入整理： L HLAAK AAap = p H + l g 或 配制一系列 c相同 ,pH不同的溶液 ,測 A. HL、 L 顏色不同 +a L= [ H ] K AA[HL] [L] HL AA32 MO吸收曲線 Aa(HL) Ab (L) 1 2 3 4 5 6 Ab 6 5 4 3 2 1 Aa 350 400 450 500 550 600 ?/nm A 曲線 pH 1 , 2 3 4 5 6 , 由每份溶液的一對 pH、 A，可求得一個 Ka, 取平均值即可 . 33 ? 高含量組分的測定 : ? 配制一系列待測組分的濃度相差較小 ， 且待測組分濃度與試液濃度相近的 標準溶液 ， 以其中濃度最小的標
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